姚 欣，趙 磊，楊 進

Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致惡性胸腔積液中的表達及臨床意義

姚 欣，趙 磊，楊 進

目的探討 Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致惡性胸腔積液（MPE）中的表達及其臨床意義。方法收集 45例原發(fā)性肺癌所致 MPE和 30例肺部良性疾病所致胸腔積液標本，ELISA法檢測胸腔積液中 Fascin蛋白的表達，分析 Fascin蛋白表達與臨床特征、療效之間的關系。結果Fascin蛋白在肺癌組胸腔積液中的濃度［（31.21±2.06）μg／L］明顯高于對照組［（9.12±0.57）μg／L］，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。Fascin蛋白在 MPE中的濃度在不同淋巴結轉移、遠處轉移、分化程度間差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），但在不同性別、年齡、腫瘤大小、病理類型、吸煙史間差異無統(tǒng)計學意義。結論Fascin蛋白在原發(fā)性肺癌所致 MPE中高表達，與肺癌的分化、淋巴結轉移及遠處轉移有關，胸腔積液中Fascin蛋白與細胞學聯(lián)合檢測可提高 MPE診斷的陽性率，并有一定的鑒別診斷價值。

原發(fā)性肺癌；惡性胸腔積液；Fascin蛋白；酶聯(lián)免疫吸附試驗

惡性胸腔積液（malignant pleural effusion，MPE）是指原發(fā)于胸膜的惡性腫瘤或其他部位的惡性腫瘤轉移至胸膜引起的胸腔積液。繼發(fā)于原發(fā)性肺癌的胸膜轉移癌是引起 MPE最常見的病因。MPE患者的中位生存期8個月，故早期診斷及治療對延長生存期、改善預后至關重要［1-2］。MPE的確診有賴于胸水脫落細胞學或胸膜活檢，胸液細胞學的敏感性為 62% ～90%，但在腫瘤細胞數(shù)目少、異形程度低及間皮細胞增生情況下診斷較為困難；而胸膜活檢對 MPE診斷的敏感性低于細胞學檢查，其診斷率僅為 40% ～75%［3-4］，漏診率高。目前比較普遍使用的某些 腫瘤標志物 如 癌 胚抗原 （carcino-embryonic antigen，CEA）、細 胞 角 蛋 白 19片 段 （cytokerantin-19-fragment，CYFRA21-1）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（neuron-specific enolase，NSE）等靈敏度普遍不高，特異度也沒有高到能夠滿足臨床需要的程度。因此，仍有必要研究開發(fā)出更可靠的指標，以期提高MPE的診斷效率。Fascin蛋白是一種肌動蛋白結合蛋白，有保持細胞形態(tài)、調(diào)節(jié)細胞運動的作用。Fascin蛋白在多種惡性腫瘤如肺癌［5-6］、乳腺癌、胃癌、結直腸癌［7］患者的血清及腫瘤組織中表達上調(diào)，與腫瘤的侵襲轉移及預后密切相關，但目前尚無 Fascin蛋白在 MPE中表達情況的研究報道。該研究采用 ELISA法檢測胸腔積液中 Fascin蛋白的表達，試圖探討其在肺癌所致MPE中的作用及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 臨床資料收集 2014年6月 ～2015年 3月安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科住院患者胸腔積液標本75例，所有患者臨床資料完整。肺癌組：45例，其中男 20例，女 25例，年齡 35～80（61.82± 12.39）歲，有吸煙史 16例，均為首次就診住院期間經(jīng)細胞學或組織病理學確診；確診前未行手術、化療、放療、分子靶向藥物治療、胸腔內(nèi)藥物治療，同時排除合并其他惡性腫瘤（胃腸道、甲狀腺、乳腺、婦科腫瘤等）及嚴重疾?。ǜ文I功能異常、結締組織疾病等）患者。其中經(jīng)胸水脫落細胞學確診 24例，纖維支氣管鏡活檢確診14例、淋巴結穿刺細胞學確診2例、經(jīng)皮肺穿刺組織病理學確診 23例。其中腺癌30例，鱗癌 10例，小細胞癌癥 5例，每例肺癌所致MPE均由2～3名呼吸內(nèi)科專科醫(yī)師（其中至少有1名為主任醫(yī)師）結合臨床癥狀及輔助檢查討論后做出最終診斷。所有肺癌組患者接受后續(xù)至少一次全身含鉑方案化療或分子靶向藥物治療，并至少隨診1個月評價療效。對照組：30例，均胸水脫落細胞學陰性且經(jīng)臨床診斷可排除惡性疾病；其中男 21例，女 9例，年齡 29～79（56.03±15.26）歲，有吸煙史9例，結核性胸膜炎 25例，臨床診斷符合全國結核病診斷與分類標準［8］且抗結核治療有效；低蛋白血癥2例；心力衰竭 2例；肺炎 1例。兩組患者性別、年齡分布及吸煙率差異無統(tǒng)計學意義，性別和吸煙使用 χ2檢驗（χ2=15.26、11.50），年齡使用 t檢驗（t=1.780，P=0.079）。

1.2 主要試劑肌動蛋白束蛋白（FSCN）檢測試劑盒（酶聯(lián)免疫吸附試驗法）購自武漢優(yōu)爾生科技股份有限公司。

1.3 標本采集收集新鮮胸腔積液 3～5 m l，室溫，3 500 r／min離心 15 min，取上清液 1 m l分裝后放入-80℃冰箱保存。

1.4 Fascin蛋白含量檢測采用人 Fascin定 量ELISA試劑盒檢測肺癌組及對照組胸腔積液 Fascin蛋白含量：每孔各加入標準品或50倍稀釋肺癌組胸腔積液樣品或對照組 10倍稀釋樣本 100μl，37℃孵育2 h，吸棄每孔液體，加入酶標抗體工作液 100 μl，37℃孵育 1 h，洗板 3次，加二抗工作液 100μl，37℃孵育 30 min，洗板 5次；加底物工作液 90μl，37℃避光反應 15～20 min，每孔加入終止液 50μl，立即用酶標儀測定 450 nm處光密度（optical density，OD）值。肺癌組設置副孔，結果取兩孔平均值。以肺癌組胸腔積液 Fascin蛋白 OD值 ／對照組 Fascin蛋白平均 OD值≥2.1為陽性，否則為陰性。

1.5 療效評價標準按 WHO癌性滲液療效評價標準評價療效。完全緩解（CR）：胸腔積液完全消失，持續(xù) 4周以上；部分緩解（PR）：胸腔積液減少≥50%，持續(xù) 4周以上；穩(wěn)定（SD）：胸腔積液減少 ＜50%或增加≤25%；進展（PD）：胸腔積液增加 ＞25%或死亡；CR+PR為客觀有效（ORR）。

1.6 統(tǒng)計學處理采用 SPSS 10.0軟件進行分析，計量資料以 ˉx±s表示；多組之間的比較以方差分析，兩獨立樣本均數(shù)比較采用 t檢驗；相關性分析Spearman相關性檢驗，應用 Graphpad prism 5.0進行圖表繪制。

2 結果

2.1 ELISA法檢測Fascin蛋白的表達在胸腔積液中，肺 癌 組 的 Fascin蛋白 含 量 ［（31.06±5.75）μg／L］明顯高于對照組［（9.33±2.48）μg／L］，差異有統(tǒng)計學意義（t=19.26，P＜0.05）。表明 Fascin與肺癌之間有良好相關性，對良惡性胸腔積液的鑒別具有意義。

2.2 Fascin蛋白表達與肺癌患者臨床特征的關系Fascin蛋白的含量與肺癌患者的年齡、性別、是否吸煙、原發(fā)腫瘤部位、T分期、病理類型差異無統(tǒng)計學意義。見表 1。但在不同分化程度、淋巴結轉移及遠處轉移中差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見圖1。

表1 Fascin蛋白與肺癌患者臨床特征之間的聯(lián)系

2.3 Fascin蛋白與其他腫瘤標志物比較肺癌患者胸腔積液中 CEA、CYFRA21-1、NSE的平均濃度均明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），提示胸腔積液中3種腫瘤標志物的靈敏度及特異度均低于 Fascin蛋白。進一步相關性分析結果顯示，在 MPE中，F(xiàn)ascin蛋白與 CEA、NSE、CYFRA21-1的表達水平均無明顯相關性（rs=0.261 9、-0.029 8、-0.274 7）。

表2 良惡性胸腔積液中肺癌3項指標

圖1 Fascin蛋白表達與肺癌患者臨床特征關系A：Fascin蛋白在肺癌組及對照組的差異；B、C、D：Fascin蛋白在不同淋巴結轉移、遠處轉移、分化程度肺癌患者的差異；與肺癌組比較：*P＜0.05；與 N0比較：＃P＜0.05；與 M1a比較：△P＜0.05；與低分化組比較：▽P＜0.05

2.4 肺癌患者胸水Fascin蛋白表達與療效關系根據(jù) WHO療效評價標準，將肺癌組患者分為完全緩解（CR）組、部分緩解（PR）組、穩(wěn)定（SD）組、進展（PD）組，其中 CR+PR為有效緩解組。PD組 Fascin蛋白濃度［（31.55±6.01）μg／L］高于有效緩解組（CR+PR）［（31.11±5.31）μg／L］，但經(jīng)方差分析，3組蛋白的 Fascin表達差異無統(tǒng)計學意義（F= 0.019，P=0.981）。

3 討論

Fascin蛋白是一種存在于細胞中的，分子量為55 ku的肌動蛋白結合蛋白，在細胞絲狀突起的形成和穩(wěn)定，細胞運動、遷移和侵襲的過程中發(fā)揮重要作用［9］。人類細胞中表達 3種 Fascin亞型，F(xiàn)ascin-1即通常所指的 Fascin，在大多數(shù)脊椎動物中存在，廣泛表達于間質組織及神經(jīng)系統(tǒng)；Fascin-2只在視網(wǎng)膜中表達，F(xiàn)ascin-3只在睪丸中表達［10］。Fascin蛋白在正常上皮中不表達或低表達，但在過去的十余年，研究［11-13］表明在膽管細胞癌、膀 胱 癌、乳 腺 癌、腦膠質細胞瘤、胃癌、結腸癌、食管癌、卵巢癌等上皮性腫瘤中 Fascin蛋白的表達明顯上調(diào)，且與腫瘤的病死率、腫瘤進展、淋巴結轉移及遠處轉移有關，揭示了 Fascin蛋白與人類侵襲性腫瘤之間的相關性，認為 Fascin蛋白或可成為識別具有高度侵襲惡性的腫瘤的早期標志物及阻止腫瘤轉移的新的治療靶點。

目前國內(nèi)外關于 Fascin蛋白在肺癌中的研究主要集中于腫瘤組織及血清中，尚無對胸腔積液中Fascin蛋白表達的研究報道。本研究采用 ELISA法檢測良惡性胸腔積液中 Fascin蛋白的表達，結果顯示 Fascin蛋白在肺癌所致 MPE中的表達明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，陽性率為 100%。既往關于肺癌患者血清的大樣本研究［6］表明 Fascin在肺癌患者血清中的陽性率約 19%，無法達到臨床應用的要求，而胸腔積液中 Fascin陽性率明顯高于血清。本研究同時顯示，MPE中，CEA、CYFRA21-1、NSE的表達水平亦明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義，可作為良惡性胸腔積液的鑒別，但其靈敏度及特異度均低于 Fascin蛋白。進一步分析了胸腔積液中 Fascin蛋白與 CEA、NSE等的相關性，結果分析表明胸腔積液中 Fascin蛋白與 CEA等無相關性，可作為一項獨立的預測因素，與 CEA、NSE等無關，對于胸腔積液 CEA、NSE等陰性的 MPE患者有一定的鑒別意義。

本研究同時分析了胸腔積液 Fascin蛋白表達與肺癌患者臨床特征間關系，表明 Fascin蛋白的表達水平與患者的年齡、性別、原發(fā)腫塊的大小、部位，病理類型、吸煙均無相關性。研究［14］表明 Fascin與區(qū)域淋巴結轉移關系密切，區(qū)域淋巴結轉移越廣，F(xiàn)ascin的表達越高，F(xiàn)ascin可以作為獨立預測肺癌患者淋巴結轉移的標志物，可以作為選擇合適治療方案的新指標。此外，F(xiàn)ascin蛋白的高表達與肺癌的遠處轉移、組織分化程度、臨床分期密切相關。在肺癌患者血清標本的研究［6］中也得出一致結論。而本研究亦顯示有淋巴結轉移的肺癌患者胸腔積液Fascin蛋白含量明顯高于淋巴結轉移陰性患者，在有胸膜轉移以外的遠處轉移組表達水平高于無胸膜以外遠處轉移組，差異均有統(tǒng)計學意義。本研究進一步探索了胸腔積液 Fascin含量與 MPE療效之間的關系，其中進展組（PD）患者胸腔積液 Fascin含量高于有效緩解組（CR+PR），但兩者差異無統(tǒng)計學意義。原因可能為病例數(shù)少、腫瘤的異質性及個體差異，因此需擴大樣本量進一步研究。以上結論表明 Fascin蛋白在肺癌的發(fā)病、侵襲及轉移中有重要作用，可早期識別具有高度惡性侵襲潛能的腫瘤，提示肺癌患者的預后情況，可能是肺癌的一個預后標志物。而 Fascin蛋白促進肺癌的轉移的具體機制尚未闡明，研究［15］表 Fascin蛋白可能在肺癌細胞的遷移、侵襲、黏附以及上皮惡性轉化中起著重要的作用。

既往關于小細胞肺癌中的 Fascin表達研究較少，Pelosi et al［16］報道了 27例小細胞肺癌組織標本，F(xiàn)ascin蛋白的陽性率為 100%，而在血清中的研究［6］顯示，F(xiàn)ascin在非小細胞癌中陽性率較低，與健康人群接近，本研究亦納入了 5例有胸腔積液的非小細胞癌患者，檢測了胸腔積液中 Fascin蛋白的表達，均有高表達，提示了 Fascin蛋白在肺癌中的表達有普遍性，其表達與病理類型無關。

綜上所述，檢測胸腔積液中 Fascin蛋白的表達可有助于良惡性胸腔積液的鑒別。與胸腔積液中傳統(tǒng)的腫瘤標志物相比，F(xiàn)ascin蛋白是一項獨立預測指標，有較好的實用價值，可補充胸腔積液細胞學對MPE的診斷。Fascin蛋白可能參與肺癌的發(fā)生及侵襲轉移過程，與肺癌的惡性程度及生物學進展密切相關，為肺癌的預后評估提供一定的依據(jù)。

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Protein level of Fascin and its clinical significance in malignant p leural effusion associated w ith primary lung cancer

Yao Xin，Zhao Lei，Yang Jin
（Dept of Respiratory Medicine，The Second Affiliated Hospital of Anhui Medical University，Hefei 230601）

Objective To investigate the protein level of Fascin in malignant pleural effusions associated with primary lung cancer and its clinical significance.Methods 45 malignant pleural effusions associated with primary lung cancer and 30 benign pleural effusionswere collected.Specimenswere subjected to the ELISA test for the protein level of Fascin.Futhermore，the protein level of Fascin in malignant effusion and its association with clinicopathological feathers and therapeutic effectwere also analyzed.Results The protein level of Fascin in malignant pleural effusionswas（31.21±2.06）μg／L，which was higher than that in benign pleural effusions［（9.12±0.57）μg／L）］，the difference was statistically significant（P＜0.05）.The protein level of Fascin in malignant pleural effusion was statistically significant（P＜0.05）in different lymph nodemetastasis，distantmetastasis，and differentiation degree，but there was no significant difference in different gender，age，tumor size，pathological type，and smoking history.Conclusion The protein level of Fascin is high in malignant pleural effusion caused by primary lung cancer，and it is related to the differentiation of lung cancer，lymph node metastasis and distantmetastasis. Fascin protein combined with cytological examination can improve the diagnosis ofmalignant pleural effusion，and has a certain value in differential diagnosis.

primary lung cancer；malignant pleural effusion；Fascin；ELISA

R 734.2；R 561.3；R 341；R 446.6

A

1000-1492（2016）02-0239-05

時間：2016-1-20 10：32：26

http：／／www.cnki.net／kcms／detail／34.1065.R.20160120.1032.040.htm l

2015-11-17接收

國家自然科學基金（編號：81400058）

安徽醫(yī)科大學第二附屬醫(yī)院呼吸內(nèi)科，合肥 230601

姚 欣，女，碩士研究生；

趙 磊，男，主 任 醫(yī) 師，碩 士 生 導 師，責 任 作 者，E-mail：ayefyzhaolei＠163.com