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        一例由PCV2感染引起母豬產(chǎn)木乃伊胎的診斷報告

        2016-04-25 07:02:07代振江曾智勇葉百川貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院貴州貴陽550025
        豬業(yè)科學(xué) 2016年2期
        關(guān)鍵詞:死胎木乃伊圓環(huán)

        徐 國,代振江,曾智勇,葉百川,劉 釗(貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025)

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        一例由PCV2感染引起母豬產(chǎn)木乃伊胎的診斷報告

        徐 國,代振江,曾智勇*,葉百川,劉 釗
        (貴州大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院,貴州 貴陽 550025)

        豬圓環(huán)病毒病感染是指由豬圓環(huán)病毒(PCV)引起的豬的一種傳染病,其主要臨床特征為母豬繁殖障礙、體質(zhì)下降、消瘦、呼吸困難、貧血、黃疸、生長發(fā)育不良、腹瀉、內(nèi)臟器官及皮膚的廣泛病理變化,特別是腎、脾臟及全身淋巴結(jié)的高度腫大、出血和壞死[1]。PCV分為PCV1和PCV2兩個血清型,PCV2危害極大。豬圓環(huán)病毒自2000年由郎洪武等[2]在國內(nèi)首次報道以來,全國各省(市)先后有PCV2 感染病例報道 。豬圓環(huán)病毒病在世界范圍內(nèi)廣泛流行,給養(yǎng)豬業(yè)帶來巨大危害,由PCV2引起的母豬流產(chǎn)、死胎、木乃伊胎等繁殖障礙疾病更應(yīng)引起重視[3]。

        2015年11月貴州省貴陽市某種豬場發(fā)生一起母豬繁殖障礙,送檢的同窩胎兒既有木乃伊胎,也有死胎。據(jù)送檢豬場描述的臨床特征,初步判斷與病毒感染有關(guān)。為篩查具體病原,實驗室對送檢木乃伊及死胎的組織混合樣品分別對豬JEV(日本乙型腦炎病毒)、PPV (豬細(xì)小病毒)、CSFV(豬瘟病毒)、PRRSV (豬繁殖與呼吸障礙綜合征病毒)、PRV (豬偽狂犬病毒)和 PCV2(豬圓環(huán)病毒2型)6種常見病毒進(jìn)行了病原核酸檢測,現(xiàn)將相關(guān)檢測及結(jié)果報道如下。

        1 ?材料

        1.1病料

        分別采自送檢同窩木乃伊胎、死胎的組織混合病料(心、肝、脾、肺、腎、淋巴結(jié)等臟器和腦組織),見圖1。

        圖1 同窩送檢胎兒

        1.2主要試劑

        TakaRa Mini BEST Viral RNA/DNA Extraction Kit Ver 4.0、Prime Script One Step RTPCR Kit Ver.2.0、DL2000;其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

        2 ?方法

        2.1病料的處理及核酸的提取

        采集送檢胎兒組織混合樣品,碾磨勻漿,反復(fù)凍融3次之后,12 000r/ min離心10 min,取上清,用TakaRa Mini BEST Viral RNA/ DNA Extraction Kit Ver 4.0試劑盒提取核酸。

        2.2引物合成

        相關(guān)引物為由本實驗室所保存的參考據(jù)GenBank中關(guān)于PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV序列設(shè)計并合成的特異性引物[4]。

        2.3病原核酸檢測

        參照一步法RT-PCR試劑盒說明書,對PCV2、CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV進(jìn)行檢測。反應(yīng)總體系為50 μL :2×1 Step Buffer 25 μL,模板7.0 μL,上下游引物各1.0 μL,Prime Script 1 Step Enzyme Mix 2 μL,Release Free H2O 14 μL;反應(yīng)條件均為:95 ℃5 min;94 ℃ 30 s,57 ℃ 30 s,72 ℃30 s,35個循環(huán);72 ℃ 10 min。擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳檢測。

        3 結(jié)果

        通過對送檢樣品進(jìn)行病原核酸檢測,結(jié)果見圖2。電泳結(jié)果顯示CSFV、PRRSV、PPV、PRV和JEV的檢測結(jié)果均為陰性;對PCV2檢測結(jié)果為陽性,擴(kuò)增條帶與預(yù)期的353bp擴(kuò)增片段相符,表明送檢死胎可能存在PCV2感染。

        圖2 病原檢測結(jié)果

        4 ?討論

        PCV2、PPV、PRV、CSFV、PRRSV和JEV等都是引起母豬繁殖障礙疾病的主要因素。根據(jù)母豬繁殖障礙的特征,通常木乃伊胎更多的會考慮PPV(一般木乃伊胎的長度小于17 cm)和JEV(木乃伊胎大小不等) 這2種病毒,此外PRRSV、PRV也可見木乃伊胎,但更多是流產(chǎn)和產(chǎn)死胎,有資料顯示,PCV2感染豬只后引起的繁殖障礙癥狀主要為流產(chǎn)、產(chǎn)死胎、木乃伊胎增多、斷奶前死亡率上升等[5]。本次病原篩查PCV2呈陽性,該豬場發(fā)生的母豬繁殖障礙可能由PCV2引起。所以,養(yǎng)豬場應(yīng)該對PCV2引起高度重視。據(jù)述,此次送檢病樣的豬場已對PCV2、PPV、PRV、CSFV、PRRSV和JEV進(jìn)行了免疫,但未進(jìn)行相應(yīng)的抗體監(jiān)測,而本次病原篩查結(jié)果也間接表明該豬場PCV2免疫失敗。免疫失敗的原因是多方面的,如疫苗的接種途徑、用法用量和效價,動物應(yīng)激,遺傳因素,患免疫抑制疾病等。所以,養(yǎng)豬場應(yīng)從多方面查找免疫失敗的原因,采取措施提高抗體免疫水平,并定期進(jìn)行疫苗免疫抗體水平的監(jiān)測。引起母豬繁殖障礙疾病既有傳染性因素,也有非傳染性疾病因素,因此,建議發(fā)生該病的養(yǎng)豬場從飼養(yǎng)管理方式、飼料搭配、環(huán)境設(shè)施等多方面進(jìn)行改進(jìn),使母豬繁殖障礙得到有效控制,提高母豬繁殖生育力,增加養(yǎng)豬生產(chǎn)經(jīng)濟(jì)效益。

        參考文獻(xiàn)

        [1]陳溥言,獸醫(yī)傳染病學(xué)[M].5版,北京:中國農(nóng)業(yè)出版社,2010.231.

        [2]郎洪武,張廣川,吳發(fā)權(quán),等.斷奶豬多系統(tǒng)衰弱綜合征血清抗體檢測[J].中國獸醫(yī)科技,2000,30(3):3-5.

        [3]劉金鑫,孫孟嬌,陳磊,等.豬圓環(huán)病毒研究進(jìn)展[J].動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展,2012,33(2):94-97.

        [4]ZENG Z,LIU Z,WANG W,et al.Establishment and application of a multiplex PCR for rapid and simultaneous detection of six viruses in swine[J].Journal of Virological Methods,2014,208:102-106.

        [5]宣長和,豬病學(xué)[M].3版,北京:中國農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,2010.177.

        通訊作者:曾智勇(1978—),男,教授,博士,碩士生導(dǎo)師,從事動物傳染病病原分子生物學(xué)研究:as.zyzeng@ gzu.edu.cn

        [作者簡介]徐國(1988—),男,在讀碩士,研究方向:動物傳染病病原分子生物學(xué)。E-mail:576144546@qq.com

        [基金項目]省校合作計劃項目,黔科合LH字[2014]7670號

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