劉蘭英，康迎春，李曉鶯，李越鯤，張曦燕，曹有龍，*（.國(guó)家枸杞工程技術(shù)研究中心，寧夏銀川75000；.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)06）

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枸杞果實(shí)不同發(fā)育階段主要活性成分變化研究

劉蘭英1，康迎春2，李曉鶯1，李越鯤1，張曦燕1，曹有龍1，*
（1.國(guó)家枸杞工程技術(shù)研究中心，寧夏銀川750002；2.沈陽(yáng)農(nóng)業(yè)大學(xué)食品學(xué)院，遼寧沈陽(yáng)110161）

摘要：采用HPLC方法和分光光度法分析測(cè)定寧杞7號(hào)枸杞果實(shí)不同發(fā)育階段主要活性成分VC、甜菜堿、多糖和5種主要類胡蘿卜素含量變化。結(jié)果表明：VC和多糖含量隨著果實(shí)成熟不斷增加，峰值都出現(xiàn)在盛果期，甜菜堿含量在青果期最高，5種類胡蘿卜素含量變化趨勢(shì)各不相同，總量以幼果期最低，黃變后期最高，盛果期稍有下降但含量與黃果期相當(dāng)。

關(guān)鍵詞：枸杞果實(shí)；發(fā)育階段；活性成分

枸杞是藥食同源的功能性特色植物資源，加工食用歷史悠久。寧夏枸杞是唯一被載入“藥典”的道地藥材，富含VC、類胡蘿卜素、甜菜堿、多糖等多種生物活性物質(zhì)，具有滋肝補(bǔ)腎、益精明目、增強(qiáng)免疫力、抗衰老、抗氧化等多種功效。目前對(duì)枸杞藥理活性研究報(bào)道較多，但對(duì)枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中活性物質(zhì)變化規(guī)律的系統(tǒng)研究鮮見報(bào)道。為了加強(qiáng)枸杞的深加工和深度開發(fā)利用，研究枸杞果實(shí)的品質(zhì)和發(fā)育過(guò)程中活性物質(zhì)積累十分重要[1]。本文采用分光光度法和液相色譜法分析了寧杞7號(hào)枸杞果實(shí)中主要4種活性物質(zhì)的變化，為枸杞鮮果的貯藏加工及進(jìn)一步探索枸杞活性物質(zhì)的積累機(jī)制提供參考。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

本試驗(yàn)研究材料寧杞7號(hào)（5年樹齡）枸杞果實(shí)采自寧夏農(nóng)林科學(xué)院蘆花臺(tái)枸杞試驗(yàn)基地。從枸杞開花（2014年5月19日）到成熟（2014年6月19日）過(guò)程中共取材5次，采樣時(shí)間分別為花后10 d（幼果期）、花后16 d（青果期）、花后22 d（黃變初期）、花后27 d（黃變后期）、花后30 d（盛果期）。樣品采集完成后用液氮低溫封存。

分析純?cè)噭浩姿?、氫氧化鈉、氫氧化鋁、95 %乙醇、無(wú)水乙醇、蒽酮、濃硫酸、四氫呋喃、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚、石油醚（60-90）、無(wú)水硫酸鈉、氯化鈉、氫氧化鉀、三乙胺均購(gòu)于天津大茂化學(xué)試劑廠；色譜純?cè)噭毫姿釟涠?、磷酸二氫鉀、丙酮、二氯甲烷、乙腈、甲醇、正己烷均?gòu)于MREDA。

1.2主要儀器

BS 224S型電子天平、PHS-3酸度計(jì)：賽多利斯（北京）科學(xué)儀器有限公司；JPCT0628超聲波提取器：武漢佳鵬電子有限公司；Milli Q純水系統(tǒng)：密理博公司；Agilent1260高效液相色譜儀系統(tǒng)、G1311C四元梯度泵含四通道在線脫氣機(jī)、G1316A柱溫箱、G1315DDAD檢測(cè)器、G1329B自動(dòng)進(jìn)樣器、G2185BA Triple Quad LC、色譜工作站：Agilent，USA。

1.3試驗(yàn)方法

1.3.1枸杞鮮果中VC的測(cè)定方法

參照文獻(xiàn)[2]測(cè)定枸杞鮮果中的VC含量。

1.3.2枸杞鮮果多糖的測(cè)定方法

準(zhǔn)確稱取5.00 g枸杞鮮果，加入100 mL 80 %乙醇溶液，超聲30 min（脫脂同時(shí)使枸杞多糖沉淀），抽濾除去濾液，收集殘?jiān)?。按照料液?∶20（g/mL）加入100 mL的水，于80℃水浴中超聲提取40 min，重復(fù)提取2次，合并濾液定容至250 mL，得到水提粗多糖。多糖含量測(cè)定參照文獻(xiàn)[3]的方法。

1.3.3枸杞鮮果甜菜堿的測(cè)定方法

1.3.3.1樣品處理

稱取枸杞鮮果5.00 g，加入50 mL超純水，超聲波熱水浴提取40 min，抽濾，將濾液定容至100 mL，4 000 r/min離心5 min，上清液經(jīng)0.45 μm濾膜過(guò)濾，取25 μL上樣測(cè)定。

1.3.3.2 HPLC色譜條件

Waters HILIC柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈/水（50∶50，體積比）；流速：0.75 mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：195 nm；進(jìn)樣量：25 μL；等度洗脫15 min。甜菜堿標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為Y=5 742.6X+319.01，R2=0.999 4，式中X代表甜菜堿質(zhì)量濃度，mg/mL，Y代表峰面積。

1.3.4枸杞鮮果類胡蘿卜素的測(cè)定方法

參照文獻(xiàn)[4]測(cè)定枸杞鮮果中類胡蘿卜素的含量。1.3.5數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel-2007和SPSS17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2　結(jié)果與分析

2.1枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中VC含量變化

枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中VC含量變化見圖1。

圖1不同發(fā)育階段VC含量變化Fig.1 VCcontents at different mature stages of wolfberry

如圖1所示，枸杞果實(shí)中的VC含量隨著果實(shí)不斷發(fā)育含量逐漸增加，幼果期含量較低為21.62 mg/100 g。果實(shí)發(fā)育后期VC含量不斷增加，在盛果期也即花后30 d含量達(dá)到最高133 mg/100 g，是幼果期的6.3倍左右。

2.2枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中多糖含量變化

枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中多糖含量變化見圖2。

圖2不同發(fā)育階段枸杞多糖含量變化Fig.2 Polysaccharides contents at different mature stages

枸杞多糖是枸杞中最重要的藥用成分。如圖2所示，在枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中，枸杞多糖含量呈先降低而后迅速增加趨勢(shì)，從幼果期到青果期，枸杞多糖含量下降到最低150 mg/100 g。花后22 d，隨著枸杞果實(shí)膨大，多糖含量迅速增加，到盛果期時(shí)多糖含量達(dá)到最高為16 058.51 mg/100 g，與張寧等[1]和鄭國(guó)琦等[5]研究結(jié)果一致。

2.3枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中甜菜堿含量變化

枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中甜菜堿含量變化見圖3。

圖3不同發(fā)育階段枸杞甜菜堿含量變化Fig.3 Betaine contents at different mature stages

目前有關(guān)枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中甜菜堿含量變化鮮見報(bào)道。如圖3所示，枸杞果實(shí)中甜菜堿隨著果實(shí)發(fā)育、成熟呈先增后降的趨勢(shì)，幼果期至青果期，甜菜堿含量迅速增加，青果期時(shí)含量達(dá)到最高為242.33 mg/100 g，隨著果實(shí)不斷發(fā)育，甜菜堿含量逐漸降低，到盛果期時(shí)含量降至129.98 mg/100 g，稍高于幼果期的111.12 mg/100 g?？梢?，枸杞甜菜堿大量合成是在青果期。

2.4枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中主要類胡蘿卜素含量變化

枸杞果實(shí)發(fā)育過(guò)程中5種主要類胡蘿卜素的含量及總量變化見圖4。

圖4不同發(fā)育階段枸杞類胡蘿卜素含量變化Fig.4 Five main carotenoids contents at different mature stages of wolfberry

如圖4所示，類胡蘿卜素不僅是決定枸杞果實(shí)外觀品質(zhì)的重要因子，也是衡量枸杞內(nèi)在品質(zhì)的重要指標(biāo)[4]。從整個(gè)發(fā)育過(guò)程看，新黃質(zhì)含量呈現(xiàn)出先增后降的趨勢(shì)，峰值出現(xiàn)在黃變后期，其含量為（109.12± 0.05）μg/100 g，顯著高于其它發(fā)育階段（P﹤0.05），隨后含量大幅下降但仍顯著高于含量最低的幼果期。葉黃素和玉米黃素變化趨勢(shì)基本一致，在花后22 d大幅增加，含量均在盛果期時(shí)達(dá)到最高，分別為（9.04± 0.09）μg/100 g和（9 252.40±0.003）μg/100 g，其中特征類胡蘿卜素玉米黃素含量占5種類胡蘿卜素總量的45 %以上。β-隱黃質(zhì)含量在枸杞果實(shí)發(fā)育前期基本穩(wěn)定且含量較低，花后22 d黃變初期時(shí)其含量迅速增加，含量峰值出現(xiàn)在黃變后期為（314.38±0.016）μg/100 g，而后稍有下降，但仍顯著高于幼果期。β-胡蘿卜素含量整體先增加后降低，青果期含量最高為（212.40± 0.007）μg/100 g，在枸杞果實(shí)發(fā)育后期β-胡蘿卜素含量逐漸降低，盛果期含量降至最低為（58.01±0.094）μg/100 g。受采樣時(shí)間、品種等因素影響，這一結(jié)果與李赫等報(bào)道有所不同[6]。

5種類胡蘿卜素總量在整個(gè)發(fā)育階段逐漸增加，幼果期類胡蘿卜素總量最低為（470.12±0.05）μg/100 g，黃變期時(shí)類胡蘿卜素總量急速增長(zhǎng)，在黃變期后期總量達(dá)到最大為（9 755.57±0.004）μg/100 g，極顯著的高于幼果期（P﹤0.01）。枸杞果實(shí)發(fā)育到達(dá)盛果期時(shí)，類胡蘿卜素總量略有下降，但含量基本穩(wěn)定。

3　結(jié)論

研究表明，果實(shí)發(fā)育期間VC含量變化總體上呈升高變化趨勢(shì)，花后30 d VC含量達(dá)到最高133 mg/100 g。枸杞果實(shí)多糖含量在發(fā)育前期較低且呈緩慢下降趨勢(shì)，于花后22 d迅速增加，到成熟時(shí)達(dá)最大值為16 058.51 mg/100 g。甜菜堿含量在青果期時(shí)最高為242.33 mg/100 g，之后不斷降低至幼果期水平。5種主要類胡蘿卜素變化趨勢(shì)各不相同，總量隨果實(shí)成熟度呈增加趨勢(shì)，以幼果期最低，黃變期后期總量最大為（9 755.57±0.004）μg/100 g，與盛果期含量基本相當(dāng)。

參考文獻(xiàn)：

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Bioactive Compounds of Wolfberry Fruits at Different Development Stages

LIU Lan-ying1，KANG Ying-chun2，LI Xiao-ying1，LI Yue-kun1，ZHANG Xi-yan1，CAO You-long1，*
（1. National Wolfberry Engineering and Technology Research Center，Yinchuan 750002，Ningxia，China；2. Food Institute，Shenyang Agricultural University，Shenyang 110161，Liaoning，China）

Abstract：Bioactive compounds including Vitamin C，betaine，polysaccharides and five main carotenoids in Ningqi No.7 wolfberry fruit were analyzed at different mature stages using HPLC and UV methods. Results indicated that the maximum value of vitamin C and polysaccharide appeared in full ripening fruit，while the peak of betaine content in green ripe stage. Contents of five main carotenoids including β-carotene，lutein，zeaxanthin，β-cryptoxanthin and neoxanthin differed from each other，total carotenoids reached the maximum，then decreased slightly and maintained stable in full ripening stage.

Key words：wolfberry fruit；developmental stages；bioactive compounds

收稿日期：2015-08-03

*通信作者

作者簡(jiǎn)介：劉蘭英（1980—），女（漢），副研究員，研究生，研究方向：枸杞活性成分研究與產(chǎn)品加工。

基金項(xiàng)目：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31160340）；寧夏自然基金資助項(xiàng)目（NZ14208）

DOI：10.3969/j.issn.1005-6521.2016.03.001