王延?xùn)|

(太原市第五中學(xué)校，山西 太原 030012)

植物遠(yuǎn)志多糖的含量測定與特性黏度的分析

王延?xùn)|

(太原市第五中學(xué)校，山西 太原 030012)

分析植物遠(yuǎn)志多糖的含量，并對多糖的特性黏度進(jìn)行了分析。采用苯酚－硫酸法分析遠(yuǎn)志總多糖含量，采用烏氏黏度計、用逐步稀釋法測定遠(yuǎn)志多糖的特性黏度。結(jié)果表明，采用苯酚－硫酸法分析遠(yuǎn)志總多糖含量是可行的，3個樣品的多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為51.00%、52.41%、55.95%，特性黏度值分別為31.55、33.16、21.77 mL/g。從紫外分析可知，樣品多糖中不含蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)。

遠(yuǎn)志多糖;苯酚－硫酸法;特性黏度;測定

遠(yuǎn)志為多年生草本植物，為藥食兩用植物，具有抗衰老、抗誘變、抗癌及抑菌作用［1］，可用于保健食品中，具有廣闊的應(yīng)用前景。

植物中的多糖成分是一種高相對分子質(zhì)量的物質(zhì)，有多種生物活性功能，如免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、降血糖、降血脂、抗菌、抗病毒等，且毒副作用小。近年來，植物多糖的研究已成為植物化學(xué)研究的一個重要領(lǐng)域。本實(shí)驗(yàn)對3種不同醇沉深度下得到的遠(yuǎn)志多糖樣品的含量進(jìn)行了分析，并對多糖黏度進(jìn)行了測量。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

遠(yuǎn)志多糖樣品由實(shí)驗(yàn)提供;苯酚，天津市北辰方正試劑廠;葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，北京北化康泰臨床試劑有限公司。

HH－6數(shù)顯恒溫水浴鍋，常州國華電器有限公司;102－2 BS電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱，上海躍進(jìn)醫(yī)療器械有限公司;Cary50紫外分光光度計，美國瓦里安;HK－1D型恒溫水槽，南大萬和;微量移液器，上海求精生化試劑儀器有限公司;烏氏黏度計等。

1.2 實(shí)驗(yàn)內(nèi)容

1.2.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

采用苯酚－濃硫酸法測定多糖的含量［2］。準(zhǔn)確移取0.0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4 mL的葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，加蒸餾水補(bǔ)至2 mL，加入質(zhì)量分?jǐn)?shù)為6%的苯酚1.0 mL。搖勻后，迅速加入濃硫酸5 mL，充分搖勻(沸水浴加熱15 min)，冷卻至室溫。室溫放置30 min。

以0號溶液為空白，4號溶液進(jìn)行波長掃描，得出最大吸收波長為489.0 nm，在此波長下測得各個標(biāo)準(zhǔn)樣品的吸光度(見表1)。以吸光度A為橫坐標(biāo)，標(biāo)準(zhǔn)液質(zhì)量濃度C(mg/mL)為縱坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線方程C=4.349 2+0.068 0A(R2=0.998 2)，如第55頁圖 1所示。由圖 1可知，在線性范圍為0.020 mg/mL～0.050 mg/mL內(nèi)具有良好的線性關(guān)系。

表1 標(biāo)準(zhǔn)溶液吸光度及其對應(yīng)的質(zhì)量濃度

圖1 標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.2.2 多糖含量的測定

分別精密稱量分離得到的3個遠(yuǎn)志多糖樣品0.100 5、0.100 4、0.100 6 g，用蒸餾水定容至25 mL的容量瓶中。分別移取0.5 mL的溶液到25 mL容量瓶，稀釋至刻度。分別取稀釋溶液2 mL到20 mL的具塞試管中。其余的步驟按1.2.1所述方法測定多糖溶液的吸光度值。

1.2.3 多糖特性黏度的測定方法

采用烏氏黏度計，用逐步稀釋法求得遠(yuǎn)志多糖的特性黏度［3］。測定裝置如圖2所示。

圖2 烏氏黏度計

測定溶劑流出時間t0:將恒溫水槽調(diào)至25℃，黏度計垂直夾在恒溫水槽內(nèi)，先將20 mL的蒸餾水自A管注入黏度計，恒溫10 min，夾緊C管上聯(lián)結(jié)的乳膠管，同時在連接B管的乳膠管上用洗耳球慢慢抽氣，等到液體上升到G球的1/2左右即可。打開C管乳膠管上的夾，使得毛細(xì)管內(nèi)的液體與D球分開，用秒表測定液面在a、b 2條線間移動所需的時間。需要重復(fù)測定5次，每次的測定時間相差不超過0.3 s，取平均值，記為溶劑流出時間t0。

測定多糖溶液流出時間t:采用上述方法，分別先將15 mL的多糖溶液自A管注入黏度計，重復(fù)測定5次，每次的測定時間相差不超過0.3 s，取平均值，為多糖溶液的流出時間 t。再用移液管加入5 mL已恒溫的蒸餾水，用洗耳球從C管鼓氣攪拌，并將溶液慢慢地抽上流下數(shù)次，使其混勻，測定流經(jīng)時間。再依次加入5、10、10 mL的蒸餾水，逐個測定溶液的流經(jīng)時間。

分別計算3個多糖樣品的相對黏度、增比黏度和比濃黏度，繪制特性黏度曲線，實(shí)驗(yàn)結(jié)果如表2、表3和第56頁表4、表5所列以及第56頁圖3～圖5。外推法求特性黏度［η］。

表2 蒸餾水黏度測定

表3 多糖樣品1溶液黏度測定

2 結(jié)果與討論

2.1 多糖含量測定結(jié)果

采用苯酚－硫酸法測得3個多糖溶液吸光度分別為0.596、0.612、0.655，計算多糖的質(zhì)量分?jǐn)?shù)分別為51.00%、52.41%、55.95%。

表5 多糖樣品3溶液黏度測定

2.2 多糖黏度測定結(jié)果

多糖為高分子物質(zhì)，由小分子單糖組成。高分子相對分子質(zhì)量是表征其特征的基本參數(shù)之一，相對分子質(zhì)量不同，性能差異很大。其相對分子質(zhì)量的測定，實(shí)質(zhì)上就是特性黏度的測定［4］。

圖3 多糖樣品1溶液黏度曲線

圖4 多糖樣品2溶液黏度曲線

圖5 多糖樣品3溶液黏度曲線

2.3 多糖紫外分析結(jié)果

多糖的紫外分析結(jié)果如圖6所示。

圖6 多糖的紫外圖譜

由圖6可知，在200 nm～400 nm的波長范圍內(nèi)對遠(yuǎn)志多糖進(jìn)行紫外掃描，得到的多糖在200 nm處均有強(qiáng)多糖吸收峰，260 nm及280 nm處無特征吸收峰，表明3個多糖樣品中沒有蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)［5］。

3 結(jié)論

苯酚－硫酸比色法測定多糖的原理是多糖在濃硫酸的作用下，先水解為單糖，迅速脫水形成糠醛衍生物，然后與苯酚起顯色反應(yīng)。這種方法用于測定遠(yuǎn)志多糖時簡單快速、顯色穩(wěn)定，適合于遠(yuǎn)志多糖的定量分析。

實(shí)驗(yàn)表明，所提的物質(zhì)為多糖類物質(zhì)，且多糖中無蛋白質(zhì)和核酸類物質(zhì)。

對不同相對分子質(zhì)量條斑紫菜多糖體外抗氧化活性研究表明［6］，抗氧化能力與其相對分子質(zhì)量大小相關(guān)，相對分子質(zhì)量較小的抗氧化能力最佳，明顯高于相對分子質(zhì)量較大的。對桑葉多糖不同相對分子質(zhì)量段降血糖作用研究表明［7］，多糖相對分子質(zhì)量大的部分在降血糖、降膽固醇方面具有良好的作用，是桑葉多糖降低血糖的最佳活性相對分子質(zhì)量段。本實(shí)驗(yàn)運(yùn)用逐步稀釋法測定遠(yuǎn)志多糖特性黏度，根據(jù)Mark－Houwink經(jīng)驗(yàn)式，多糖的特性黏度與其黏均分子量呈指數(shù)關(guān)系。因此，本研究為建立植物遠(yuǎn)志多糖特性黏度與其功能性質(zhì)的關(guān)系研究提供了基礎(chǔ)。

感謝:山西中醫(yī)學(xué)院物理化學(xué)實(shí)驗(yàn)室王穎莉教授提供的幫助。

［1］張敏，高曉紅，孫曉萌，等.遠(yuǎn)志的藥用價值及開發(fā)研究［J］.北華大學(xué)學(xué)報:自然科學(xué)版，2007，8(4):322－327.

［2］張勝，李湘洲，吳志平，等.植物多糖分離純化與含量測定方法研究進(jìn)展［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2009，29(增刊):238－242.

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［5］羅婭君，肖新峰，王照麗.大葉金花草多糖的提取、分離純化及結(jié)構(gòu)分析［J］.林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè)，2009，29 (1):68－72.

［6］何芳，汪之和，馬婉婉，等.不同分子量條斑紫菜多糖體外抗氧化活性研究［J］.上海海洋大學(xué)學(xué)報，2015，24(5):783－788.

［7］趙駿，方玲，于坤路，等.桑葉多糖不同分子量段降血糖作用研究［J］.中藥材，2010，33(1):108－110.

Determination and intrinsic viscosity of polysaccharides polygala

WANG Yandong
(Taiyuan No.5 Middle School，Taiyuan Shanxi 030012，China)

Objective study the total polysaccharide content of polygala，and preliminary analysis intrinsic viscosity.Method The contents of polysaccharide in polygala were assayed by phenol－sulfuric acid method.And intrinsic viscosity of polysaccharide in polygala was measured by means of ubbelohde viscometer and gradually dilution method.Result by using phenol－sulphate colorimetry to determine the total polysaccharide content of polygala is feasible.polysaccharide content of three samples was 51.00%，52.41%，55.95%.And The characteristic viscosity values were 31.55，31.55，21.77 ml/g，respectively.From ultraviolet spectrum analysis，the different concentrations of the polysaccharide were not containing protein and nucleic acid.Conclusion preliminary study of polysaccharide polygala analysis provides a theoretical basis for fourth research in polygala polysaccharide characteristic viscosity and function relationship.

polygalaceae polysaccharide;phenol－sulphate colorimetry;intrinsic viscosity;determination

TQ460.7;O655

A

1004－7050(2016)06－0054－04

10.16525/j.cnki.cn14－1109/tq.2016.06.16

2016－11－22

王延?xùn)|，男，太原市第五中學(xué)校。