耿伏生，張衛(wèi)慶，蘇麗霞，李艷寧

(安陽(yáng)市燈塔醫(yī)院，河南安陽(yáng) 455000)

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·臨床研究·

微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)TPO-Ab及TG-Ab的實(shí)驗(yàn)室性能驗(yàn)證

耿伏生，張衛(wèi)慶，蘇麗霞，李艷寧

(安陽(yáng)市燈塔醫(yī)院，河南安陽(yáng) 455000)

摘要:目的對(duì)A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)及甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)的性能進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室評(píng)價(jià)，從而驗(yàn)證該儀器檢測(cè)這兩種甲狀腺抗體的可靠性。方法參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)相關(guān)文件的要求，對(duì)儀器檢測(cè)TG-Ab及TPO-Ab的參數(shù)進(jìn)行精密度、準(zhǔn)確度、攜帶污染率及線性范圍的評(píng)價(jià)分析。結(jié)果微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)這兩種甲狀腺抗體的精密度、準(zhǔn)確度、樣本攜帶污染率、線性范圍均在允許范圍之內(nèi)。結(jié)論該微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)TG-Ab及TPO-Ab的性能符合質(zhì)量要求，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可對(duì)批量標(biāo)本實(shí)現(xiàn)快速處理，基本上滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

關(guān)鍵詞:甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體；甲狀腺球蛋白抗體；微粒子化學(xué)發(fā)光；性能驗(yàn)證

甲狀腺過(guò)氧化物酶抗體(TPO-Ab)及甲狀腺球蛋白抗體(TG-Ab)是臨床醫(yī)師輔助診斷自身免疫性甲狀腺疾病常用的實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)。有關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道顯示，這兩種抗體聯(lián)合檢測(cè)可提高甲狀腺疾病診斷的正確率[1]。由于檢測(cè)手段的限制，常采用放射免疫法(RIA)來(lái)檢測(cè)，近幾年來(lái)，隨著醫(yī)療技術(shù)的進(jìn)步和革新，化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)甲狀腺抗體成為可能，特別是微粒子化學(xué)發(fā)光和電化學(xué)發(fā)光的應(yīng)用，更加提高了檢測(cè)的靈敏度和特異度，并豐富了甲狀腺疾病診斷的新方法[2]。A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀是由鄭州安圖綠科生物有限公司生產(chǎn)的一款完全具備自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的化學(xué)發(fā)光儀，為驗(yàn)證該設(shè)備及其配套試劑檢測(cè)TG-Ab及TPO-Ab的可靠性，筆者參照美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)(CLSI)制訂的方案對(duì)其精密度、準(zhǔn)確度、線性范圍、攜帶污染率等指標(biāo)進(jìn)行評(píng)價(jià)分析，以驗(yàn)證主要指標(biāo)性能是否滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

1材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源高、低值濃度的血清來(lái)自2015年1～5月在本院住院的患者。均在基礎(chǔ)狀態(tài)下采集新鮮血液標(biāo)本，2 h內(nèi)送檢，2 500 r/min離心分離血清備用，標(biāo)本要求無(wú)溶血、黃疸和脂血。

1.2儀器與試劑鄭州安圖生物工程股份有限公司生產(chǎn)的A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀及相關(guān)配套試劑(TPO-Ab批號(hào)：20150430；TG-Ab批號(hào)：20150119)，標(biāo)準(zhǔn)品(TPO-Ab批號(hào)：2015040801；TG-Ab批號(hào)：2014121503)，質(zhì)控品(批號(hào)：2015040801)。

1.3方法在儀器狀態(tài)良好的情況下，按照CLSI制訂的驗(yàn)證方案對(duì)TG-Ab及TPO-Ab進(jìn)行性能驗(yàn)證。

1.3.1精密度批內(nèi)不精密度：準(zhǔn)備高值、低值兩個(gè)水平血清樣品分別連續(xù)檢測(cè)20次，每次各重復(fù)測(cè)定2個(gè)結(jié)果，計(jì)算參數(shù)的批內(nèi)不精密度；批間不精密度：把血清隨機(jī)插入日常標(biāo)本中進(jìn)行測(cè)定，重復(fù)測(cè)定20 d，計(jì)算參數(shù)的批間不精密度。

1.3.2準(zhǔn)確度分別測(cè)定不同于當(dāng)前校準(zhǔn)品批號(hào)的另一種校準(zhǔn)品，稀釋成高、低值濃度，連續(xù)測(cè)定5 d，與靶值相比較，并計(jì)算其相對(duì)偏差(Bias)[3]。

1.3.3攜帶污染率試驗(yàn)按照中國(guó)行標(biāo)推薦的方法，選擇滿足高低條件的新鮮血清樣品，連續(xù)測(cè)定3次高值樣品，結(jié)果記為：H1、H2、H3；立即連續(xù)測(cè)定3次低值樣品，結(jié)果記為：L1、L2、L3；分別計(jì)算各項(xiàng)指標(biāo)的攜帶污染率，攜帶污染率=(L1-L3)/(H3-L3)×100%。

1.3.4線性范圍取高值血清樣品進(jìn)行梯度稀釋為10%、20%、40%、60%、80%、100%。然后從低值到高值測(cè)定不同稀釋度的樣品，每份重復(fù)測(cè)定2次，通過(guò)線性回歸方程，得出決定系數(shù)(R2)。

2結(jié)果

2.1精密度

2.1.1批內(nèi)不精密度選擇高、低值兩個(gè)濃度的新鮮樣品進(jìn)行測(cè)定，統(tǒng)計(jì)TPO-Ab和TG-Ab的批內(nèi)不精密度，分別分析其CV均在允許范圍內(nèi)(CV≤15.0%)。見(jiàn)表1。

2.1.2批間不精密度隨機(jī)抽取3個(gè)不同批號(hào)的試劑，分別對(duì)濃度為高、低值的樣品進(jìn)行檢測(cè)，統(tǒng)計(jì)TPO-Ab和TG-Ab的批間不精密度，分別分析其CV均在允許范圍內(nèi)(CV≤15.0%)。見(jiàn)表2。

表1　　批內(nèi)不精密度試驗(yàn)結(jié)果

表2　　批間不精密度試驗(yàn)結(jié)果

2.2準(zhǔn)確度測(cè)定不同于當(dāng)前校準(zhǔn)品批號(hào)的另一種校準(zhǔn)品，稀釋成高、低值濃度，分別與靶值相比較，并計(jì)算Bias，檢測(cè)高、低值樣品TPO-Ab的Bias分別為7.55%、8.30%，檢測(cè)高、低值樣品TG-Ab的Bias分別為-8.95%、6.92%，均在±10%范圍內(nèi)，表明檢測(cè)系統(tǒng)準(zhǔn)確度高。見(jiàn)表3。

表3　　準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

2.3攜帶污染率連續(xù)測(cè)定3次高值血清樣品，結(jié)果記為：H1、H2、H3；立即連續(xù)測(cè)定3次低值血清樣本，結(jié)果記為：L1、L2、L3；分別計(jì)算樣本攜帶污染率，均符合要求。見(jiàn)表4。

2.4線性范圍線性范圍較好，且濃度與稀釋率具有良好的線性關(guān)系，結(jié)果顯示TG-Ab線性范圍為11.0～1 800.0 IU/mL，TPO-Ab線性范圍為0～380 IU/mL，與廠家注明的線性范圍基本相符。見(jiàn)表5。

表4　　攜帶污染率結(jié)果

表5　　線性范圍測(cè)定結(jié)果

3討論

TG-Ab常存在于患有自身免疫甲狀腺疾病的患者體內(nèi)，大約10%的健康人有低水平的TG-Ab；30%的Grave′s患者和85%的Hashimoto′s甲狀腺患者存在較高水平的TG-Ab[4]。然而在這些疾病中，高水平的TPO-Ab比高水平的TG-Ab更為常見(jiàn)[5]。因此，兩種抗體的同時(shí)檢測(cè)可提高甲狀腺自身抗體的陽(yáng)性檢出率。微粒子化學(xué)發(fā)光法檢測(cè)TG-Ab和TPO-Ab采用間接法，用抗原包被磁微粒，辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記抗人IgG抗體制備酶結(jié)合物。通過(guò)免疫反應(yīng)，形成抗原-抗體-酶標(biāo)二抗復(fù)合物，該復(fù)合物催化發(fā)光底物發(fā)出光子，發(fā)光強(qiáng)度與抗體水平成正比。

保證檢驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性是實(shí)驗(yàn)室工作人員不懈追求的目標(biāo)，本次驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)中TG-Ab和TPO-Ab的精密度與準(zhǔn)確度都在儀器允許范圍之內(nèi)，樣品攜帶污染率基本符合要求，線性范圍基本能覆蓋臨床標(biāo)本濃度范圍，檢測(cè)濃度與稀釋倍數(shù)呈線性相關(guān)。與傳統(tǒng)的酶聯(lián)免疫法、RIA法相比較，微粒子化學(xué)發(fā)光法具有可全自動(dòng)化、操作簡(jiǎn)便、靈敏度高、線性寬、無(wú)放射性污染等優(yōu)點(diǎn)。

通過(guò)系統(tǒng)驗(yàn)證A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀檢測(cè)TG-Ab和TPO-Ab的基本分析性能的主要性能指標(biāo)，表明A2000微粒子化學(xué)發(fā)光儀及其配套試劑檢測(cè)TG-Ab和TPO-Ab的性能良好，測(cè)定結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可對(duì)批量標(biāo)本實(shí)現(xiàn)快速處理，基本能滿足實(shí)驗(yàn)室需要。

參考文獻(xiàn)

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[2]姚韓．血清促甲狀腺激素受體抗體(TRAb)測(cè)定在甲狀腺疾病臨床診斷中的應(yīng)用價(jià)值[J]．吉林醫(yī)學(xué)，2013，34(31)：6513-6514．

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(收稿日期：2015-10-16)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.043

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0674-03