黃曉燕，范　晴，唐群力

(上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院檢驗(yàn)科,上海 201499)

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·臨床研究·

斑禿患者外周血白細(xì)胞介素-17與T淋巴細(xì)胞亞群的變化及意義

黃曉燕，范晴，唐群力△

(上海交通大學(xué)附屬第六人民醫(yī)院南院檢驗(yàn)科,上海 201499)

摘要:目的分析斑禿患者外周血白細(xì)胞介素-17(IL-17)和T淋巴細(xì)胞亞群的變化及其意義，以探討該病的發(fā)病機(jī)制，為臨床治療方案的制訂提供依據(jù)。方法選取2014年7月至2015年5月該院確診的斑禿患者86例，另選取40例健康者作為對(duì)照組，采用雙抗體夾心法和流式細(xì)胞學(xué)方法檢測(cè)外周血IL-17和T淋巴細(xì)胞亞群,并進(jìn)行比較分析。結(jié)果局限性斑禿組CD3+T淋巴細(xì)胞與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；普禿、全禿組CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；普禿、全禿組CD3+T淋巴細(xì)胞與CD8+T淋巴細(xì)胞百分比均低于局限性斑禿組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；對(duì)照組40例(100.00%)IL-17百分含量均小于1%，斑禿組僅44例(51.16%)小于1%，IL-17百分含量為1%～<3%、3%～<5%、≥5%的患者分別占18.60%、12.79%、17.44%，明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論斑禿患者反映體內(nèi)總淋巴水平的CD3+T淋巴細(xì)胞低于健康人群，局限性斑禿以CD4+T淋巴細(xì)胞為主，全禿、普禿由CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞共同作用所致。

關(guān)鍵詞:斑禿；白細(xì)胞介素-17；T淋巴細(xì)胞亞群

斑禿是一種突然發(fā)生的局限性脫發(fā)，患者局部皮膚正常，無(wú)疼痛等自覺癥狀，為皮膚科常見疾病[1-3]。斑禿既可見于成年人群，又可見于兒童，兩性發(fā)病率無(wú)明顯差異，少數(shù)患者可見散在的大面積脫發(fā)，當(dāng)斑禿的面積達(dá)一半以上時(shí)為難治性斑禿。目前，對(duì)于斑禿的病因及發(fā)病機(jī)制尚未探究清楚，多認(rèn)為是遺傳因素、機(jī)體免疫系統(tǒng)平衡失調(diào)為主，同時(shí)摻雜環(huán)境因素、精神壓力等因素共同作用所致[4]。斑禿患者具有明顯的遺傳易感性和家族聚集性，在外界環(huán)境、精神刺激等多種激發(fā)刺激因素作用下，發(fā)生針對(duì)自身生長(zhǎng)期毛囊的細(xì)胞免疫反應(yīng)。本文研究斑禿患者外周血白細(xì)胞介素-17(IL-17)和T淋巴細(xì)胞亞群的變化，并分析其所具有的意義。

1資料與方法

1.1一般資料2014年7月至2015年5月本院確診斑禿患者86例納入斑禿組，男47例，女39例；年齡18～52歲，平均(28.5±2.5)歲；發(fā)病時(shí)間1周至36個(gè)月；其中活動(dòng)期斑禿(皮損區(qū)周圍毛發(fā)輕拉試驗(yàn)陽(yáng)性)38例，穩(wěn)定期斑禿48例。根據(jù)發(fā)病類型將患者進(jìn)一步分為：局限性斑禿組(54例)，普禿、全禿組(32例)。病例納入排除標(biāo)準(zhǔn)參照文獻(xiàn)[5-8]。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)符合《中國(guó)臨床皮膚病學(xué)》診斷標(biāo)準(zhǔn)；(2)年滿17周歲的患者，性別不限；(3)入選患者至少兩個(gè)月前未接受全身皮質(zhì)醇類激素，以及其他免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑治療，至少4周內(nèi)未接受局部皮質(zhì)醇類激素治療，也沒有接受其他生發(fā)類藥物治療；(4)患者積極參與和配合，有較好的依從性，便于隨訪和收集結(jié)果。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)癥狀相似的其他類型脫發(fā)，例如先天性脫發(fā)、假性脫發(fā)、瘢痕性脫發(fā)、頭蘚、盤狀紅斑狼瘡、扁平苔蘚及其他內(nèi)分泌系統(tǒng)或免疫系統(tǒng)失調(diào)等導(dǎo)致的脫發(fā)；(2)孕婦及哺乳期婦女；(3)合并惡性進(jìn)行性高血壓者，心功能、腎功能、肝功能不全等嚴(yán)重的重要臟器器質(zhì)性疾病者、惡性腫瘤者及精神或智力障礙者；(4)合并其他不能脫離皮質(zhì)醇類激素治療，以及其他免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑治療疾病者；(5)局部有細(xì)菌、真菌感染或者有糜爛、滲出者。另于健康人群中選取40例作為對(duì)照組，男20例，女20例；年齡17～51歲，平均(29.2±3.4)歲；均無(wú)免疫相關(guān)性疾病，也無(wú)近期感染史。兩組年齡、性別等一般資料比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2方法[9-10]

1.2.1標(biāo)本采集無(wú)菌采集斑禿患者及健康人外周靜脈血2 mL，添加肝素防止血液凝固，血標(biāo)本應(yīng)在4 h之內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

1.2.2檢測(cè)方法(1)外周血T淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)：50 μL斑禿患者外周血加入5 μL 異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD45(CD45-FITC)/藻紅蛋白標(biāo)記CD4(CD4-RD1)/藻紅蛋白-德州紅-X標(biāo)記CD8(CD8-ECD)/藻紅蛋白-花青苷5標(biāo)記的CD3(CD3-PC5)抗體，室溫避光保存15 min后，加入溶血素300 μL，繼續(xù)室溫避光保存15 min，再加500 mL 0.9%生理鹽水，10 min后上流式細(xì)胞儀檢測(cè)。每次檢測(cè)前，儀器均經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)熒光微球校正，且其誤差率低于2%。(2)IL-17的測(cè)定：采用雙抗體夾心法。操作：以純化的人IL-17抗體包被微孔板，制成固相抗體，再向微孔中依次加入IL-17，再與生物素標(biāo)記的IL-17抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體雙抗體復(fù)合物，經(jīng)徹底洗滌加底物顯色。最終顏色的深淺和樣品中IL-17水平呈正相關(guān)。然后用酶標(biāo)儀在450 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)吸光度值，進(jìn)而通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中人IL-17的濃度[11]。

1.3觀察指標(biāo)對(duì)比局限性斑禿組和對(duì)照組，普禿、全禿組和對(duì)照組，局限性斑禿組和普禿、全禿組的CD3+T淋巴細(xì)胞、CD4+T淋巴細(xì)胞、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比，以及斑禿組和對(duì)照組外周血IL-17百分含量分布。

2結(jié)果

2.1各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較與對(duì)照組比較，局限性斑禿組CD3+T淋巴細(xì)胞百分比與CD4+T淋巴細(xì)胞百分比均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=2.208，P=0.030；t=3.171，P=0.002)，而CD8+T淋巴細(xì)胞百分比比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.598，P=0.551)；普禿、全禿組CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比及CD8+T淋巴細(xì)胞百分比均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=6.376，P=0.000；t=3.713，P=0.000；t=6.823，P=0.000)。普禿、全禿組CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD8+T淋巴細(xì)胞百分比均明顯低于局限性斑禿組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=3.835，P=0.000；t=4.863，P=0.000)，而兩組CD4+T淋巴細(xì)胞百分比比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t=0.913，P=0.364)。見表1。

表1　　各組外周血T淋巴細(xì)胞亞群比較±s，%)

*：P<0.05，與對(duì)照組比較；#：P<0.05，與局限性斑禿組比較。

2.2斑禿組與對(duì)照組外周血IL-17百分含量分布比較對(duì)照組40例(100.00%)IL-17所占百分比均小于1%，而斑禿組只有44例(51.16%)小于1%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；斑禿組IL-17百分含量為1%～<3%、3%～<5%、≥5%的患者分別占18.60%、12.79%、17.44%，明顯高于對(duì)照組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

表2　　斑禿組與對(duì)照組外周血IL-17百分含量

3討論

T淋巴細(xì)胞受體(TCR)γδT淋巴細(xì)胞是近十幾年發(fā)現(xiàn)的免疫細(xì)胞亞群，研究發(fā)現(xiàn)其在斑禿患者外周血或其他相應(yīng)組織的分布和數(shù)量異常。TCR由γ、δ兩條鏈組成，兩者的差異使得γδT淋巴細(xì)胞分為幾個(gè)亞群。IL-17是一類T淋巴細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子，目前已知的包括IL-17A、IL-17B、IL-17C、IL-17D、IL-17E、IL-17F 6種，具有強(qiáng)大的致炎作用，此外，還可以誘導(dǎo)某些白細(xì)胞介素類、干擾素類、反應(yīng)蛋白類及前炎性細(xì)胞因子的表達(dá)，進(jìn)一步促進(jìn)T淋巴細(xì)胞活化和局部頭皮毛囊組織的浸潤(rùn)，加重自身免疫反應(yīng)，擴(kuò)大斑禿范圍及疾病發(fā)展速度，給患者身心帶來(lái)痛苦[12]。

本研究發(fā)現(xiàn)， 局限性斑禿組CD3+T淋巴細(xì)胞百分比、CD4+T淋巴細(xì)胞百分比明顯低于對(duì)照組，與范晴等[13]的研究結(jié)果一致，CD4+T淋巴細(xì)胞減少可能與局部自身免疫反應(yīng)導(dǎo)致成熟淋巴細(xì)胞消耗、損傷、凋亡快于生成有關(guān)。首先，CD4+T淋巴細(xì)胞聚集于斑禿局部皮損處，通過(guò)分泌干擾素、腫瘤壞死因子等細(xì)胞因子抑制皮囊生長(zhǎng)，打破免疫耐受而進(jìn)行自身攻擊造成CD4+T淋巴細(xì)胞的過(guò)度消耗；另一方面，外周活化的CD4+T淋巴細(xì)胞啟動(dòng)Fas/FasL等凋亡程序，加快自身凋亡。CD3分子與TCR以非共價(jià)鍵結(jié)合，形成TCR-CD3復(fù)合物，為所有T淋巴細(xì)胞表面的特征性標(biāo)志，故CD3+T淋巴細(xì)胞水平代表了總淋巴細(xì)胞水平，CD4+T淋巴細(xì)胞減少必然會(huì)導(dǎo)致CD3+T淋巴細(xì)胞的減少；普禿、全禿組總淋巴細(xì)胞及各細(xì)胞亞群百分比均明顯低于對(duì)照組，與王琳等[14]的報(bào)道一致。正常情況下，主要組織相容性復(fù)合物(MHC)低表達(dá)，CD8+T淋巴細(xì)胞不被激活導(dǎo)致自身攻擊，使毛囊處于免疫豁免狀態(tài)，但當(dāng)生長(zhǎng)期低位毛囊上皮人類白細(xì)胞抗原(HLA)表達(dá)上調(diào)時(shí)，CD8+T淋巴細(xì)胞被活化，導(dǎo)致外周血CD8+T淋巴細(xì)胞減少。本研究還顯示，普禿、全禿組CD3+T淋巴細(xì)胞及CD8+T淋巴細(xì)胞百分比明顯低于局限性斑禿組，與相關(guān)研究報(bào)道一致[15-16]；此外，斑禿患者IL-17百分含量明顯高于健康人，荊月藜[17]也有過(guò)同樣的報(bào)道，表明斑禿的發(fā)生與IL-17水平升高有關(guān)，導(dǎo)致斑禿患者體內(nèi)或局部組織內(nèi)產(chǎn)生具有促進(jìn)炎性反應(yīng)的IL-17家族，IL-17介導(dǎo)的免疫調(diào)節(jié)作用啟動(dòng)，患者的頭皮局部甚至大片毛囊區(qū)發(fā)生了針對(duì)自身成分的免疫攻擊，表現(xiàn)為局限性或彌漫性的脫發(fā)。

綜上所述，斑禿發(fā)病中IL-17的炎性作用極其重要，局限性斑禿以CD4+T淋巴細(xì)胞為主，全禿、普禿患者為CD4+T淋巴細(xì)胞和CD8+T淋巴細(xì)胞共同作用所致，應(yīng)針對(duì)不同發(fā)病機(jī)制采取不同的治療方案。

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(收稿日期：2015-10-11)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.036

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0661-03

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