賀坤華，馬麗瓊，崔會(huì)芬，沈　俊，胡映峰

(云南省曲靖市第一人民醫(yī)院輸血科，云南曲靖 655000)

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臨床研究·

高效價(jià)Rh系統(tǒng)抗體致新生兒溶血病研究

賀坤華，馬麗瓊，崔會(huì)芬，沈俊，胡映峰

(云南省曲靖市第一人民醫(yī)院輸血科，云南曲靖 655000)

摘要:目的調(diào)查Rh系統(tǒng)抗體引起新生兒溶血病(HDN)患兒的抗體特異性和效價(jià)，探討直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT)陽性在血清學(xué)檢測(cè)中的重要性。方法對(duì)新生兒鑒定母嬰血型，做HDN三項(xiàng)試驗(yàn)(DAT、游離抗體試驗(yàn)和放散試驗(yàn))和間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)，并檢測(cè)母嬰紅細(xì)胞放散液中可致敏新生兒紅細(xì)胞的血型抗體特異性和效價(jià)。結(jié)果2例新生兒DAT均呈強(qiáng)陽性；患兒1 IAT陽性、患兒2陰性。2例新生兒均檢出高效價(jià)致敏紅細(xì)胞的抗體，分別為：患兒1檢出抗-Ce，其中抗-C效價(jià)為128，抗-e為64；患兒2檢出抗-D，效價(jià)為256。結(jié)論DAT陽性對(duì)確診新生兒Rh溶血病具有決定性作用，對(duì)HDN試驗(yàn)的后續(xù)展開分析具有方向性作用。

關(guān)鍵詞:新生兒溶血病；直接抗人球蛋白試驗(yàn)；Rh系統(tǒng)；抗-Ce；抗-D

新生兒溶血病(HDN)是因母嬰血型不合，母體內(nèi)免疫球蛋白G(IgG)類血型抗體經(jīng)胎盤進(jìn)入胎兒體內(nèi)引起的免疫性溶血性貧血。Rh系統(tǒng)較ABO系統(tǒng)引起的HDN病情重、進(jìn)展快，且多見于Rh陰性婦女[1]。在Rh溶血病的發(fā)生中，母親為Rh(D)陰性的患兒中Rh(D)陽性者以抗-D引起的最為多見，其他Rh系統(tǒng)抗體的發(fā)生頻率由高到低依次為抗-E、抗-c、抗-C和抗-e[2]。為了確診新生兒Rh溶血病，現(xiàn)將工作中發(fā)現(xiàn)的2例高效價(jià)抗-Ce、抗-D引起的HDN報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料患兒1：患兒母親22歲，孕2產(chǎn)2，孕39+4周足月，無輸血史，第1胎出生后3 d死亡；患兒出生后全身皮膚、鞏膜重度黃染伴有嚴(yán)重貧血，經(jīng)檢測(cè)患兒系抗-Ce引起的Rh系統(tǒng)HDN?；純?：患兒母親20歲，孕2產(chǎn)2，孕40+2周足月，無輸血史；患兒出生后全身皮膚、鞏膜黃染伴有嚴(yán)重貧血，排除因葡萄糖-6-磷酸脫氫酶(G-6-PD)缺乏引起，經(jīng)檢測(cè)患兒系抗-D引起的Rh系統(tǒng)HDN。

1.2儀器與試劑A、B、O 標(biāo)準(zhǔn)紅細(xì)胞，篩檢細(xì)胞，譜紅細(xì)胞(批號(hào)：20141021)及2-巰基乙醇均為上海市血液生物醫(yī)藥有限公司生產(chǎn)；ABO、Rh 血型鑒定卡，不規(guī)則抗體篩檢卡，HDN不完全抗體檢測(cè)卡均為長(zhǎng)春博訊生物有限公司生產(chǎn)；KA-2200型臺(tái)式離心機(jī)為日本久保田公司生產(chǎn)；TD-3A型血型血清學(xué)用離心機(jī)、FYQ型免疫微柱孵育器均為長(zhǎng)春博研科學(xué)儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)。

1.3方法(1)血型鑒定、抗體篩選及鑒定均按文獻(xiàn)[3]方法進(jìn)行鑒定。(2)血清中不規(guī)則抗體鑒定：抗體篩查提示有不規(guī)則抗體者，將血清經(jīng)2-Me處理與譜細(xì)胞反應(yīng)，其中細(xì)胞譜中有C和e抗原的細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，進(jìn)一步對(duì)患兒紅細(xì)胞進(jìn)行吸收放散試驗(yàn)。吸收放散試驗(yàn)：用(O，CCDEE)、(O，ccDee)紅細(xì)胞分別吸收產(chǎn)婦血清，吸收后的血清及乙醚放散液分別再與(O，CCDEE)及(O,ccDee)2種細(xì)胞進(jìn)行反應(yīng)。

2結(jié)果

2.1患兒及其父母紅細(xì)胞血型見表1。

表1　　患兒及其父母紅細(xì)胞血型

表2　　患兒及產(chǎn)婦抗體篩查試驗(yàn)

S：篩選細(xì)胞；+：陽性；-：陰性。

2.2患兒及產(chǎn)婦抗體篩查試驗(yàn)患兒1、產(chǎn)婦1、產(chǎn)婦2血清和紅細(xì)胞放散液與S1、S2、S3篩選細(xì)胞反應(yīng)均呈陽性，提示有不規(guī)則抗體存在；患兒2血清抗體篩查試驗(yàn)陰性，但直接抗人球蛋白試驗(yàn)(DAT)強(qiáng)陽性，不能排除不規(guī)則抗體的存在，患兒2紅細(xì)胞乙醚放散液抗篩陽性，進(jìn)一步檢測(cè)證實(shí)為抗-D，考慮為患兒血清中的抗-D已完全致敏紅細(xì)胞，因此患兒血清抗篩陰性，而放散液抗篩陽性。見表2。

2.3患兒DAT、游離抗體試驗(yàn)和放散試驗(yàn)見表3。

表3　　患兒DAT、游離抗體試驗(yàn)和放散試驗(yàn)結(jié)果

+：陽性；-：陰性。

2.4患兒及產(chǎn)婦血清中不規(guī)則抗體鑒定患兒1及產(chǎn)婦抗體篩查提示有不規(guī)則抗體，將患兒1及產(chǎn)婦血清經(jīng)2-Me處理與譜細(xì)胞反應(yīng)，其中細(xì)胞譜中有C和e抗原的細(xì)胞均呈陽性反應(yīng)，進(jìn)一步對(duì)患兒紅細(xì)胞進(jìn)行吸收放散試驗(yàn)。在患兒1及產(chǎn)婦血清和紅細(xì)胞放散液中均檢出抗-Ce；在患兒2紅細(xì)胞乙醚放散液中和產(chǎn)婦血清中均檢出抗-D。見表4。

表4　　產(chǎn)婦及患兒紅細(xì)胞乙醚放散液與譜細(xì)胞反應(yīng)結(jié)果

①：患兒1血清；②：患兒1紅細(xì)胞乙醚放散液；③：產(chǎn)婦1血清；④：患兒2紅細(xì)胞乙醚放散液；⑤：產(chǎn)婦2血清；/：無數(shù)據(jù)；+：陽性。

2.5吸收放散試驗(yàn)為進(jìn)一步確證抗-Ce為獨(dú)立抗體抗-C或抗-e還是聯(lián)合抗體抗-Ce，對(duì)產(chǎn)婦1血清進(jìn)行吸收放散試驗(yàn)，經(jīng)試驗(yàn)證實(shí)只有聯(lián)合抗體抗-Ce，無獨(dú)立的抗-C和抗-e抗體。結(jié)果證明患者細(xì)胞被抗-Ce聯(lián)合抗體所致敏。見表5。

2.6抗體效價(jià)測(cè)定抗人球法：產(chǎn)婦1抗-C為256，抗-e為128；患兒1抗-C為128，抗-e為64；產(chǎn)婦2抗-D為512；患兒2抗-D為256；產(chǎn)婦抗體效價(jià)高于患兒。

2.7輸注紅細(xì)胞制品選擇患兒1應(yīng)選擇表型為ccDEE的O型紅細(xì)胞輸注；患兒2應(yīng)選擇O型Rh陰性的紅細(xì)胞輸注。

表5　　產(chǎn)婦1血清與(O，CCDEE)及(O，ccDee)紅細(xì)胞

+：陽性；-：陰性。

3討論

HDN是新生兒黃疸中常見的一種疾病，黃疸常發(fā)生于新生兒出生后24 h內(nèi)，且進(jìn)展快，伴有貧血、肝脾腫大，重者可伴有水腫和心力衰竭。在國內(nèi)以ABO-HDN 為主，其次為 Rh-HDN。引起該病的血型抗體主要為ABO、Rh血型系統(tǒng)抗體，亦可見于其他血型系統(tǒng)抗體[4]?？贵w主要由輸血或妊娠免疫刺激產(chǎn)生。

新生兒Rh溶血病很少發(fā)生在第1胎。分析原因?yàn)椋?1)第1胎所產(chǎn)生抗-D抗體效價(jià)較低，一般對(duì)胎兒無明顯影響；(2)自然界中少有與人類紅細(xì)胞上Rh血型抗原相同或相似的抗原存在,以至孕婦血清中Rh血型系統(tǒng)抗體很少存在天然抗體或免疫性抗體[5]。RhD陰性孕婦妊娠次數(shù)的增加會(huì)導(dǎo)致抗-D的產(chǎn)生概率明顯增加[6]，且妊娠胎次越多，溶血越嚴(yán)重。因此，對(duì)曾有過生產(chǎn)史、流產(chǎn)史或輸血史的孕婦，應(yīng)高度重視Rh血型系統(tǒng)及其他血型系統(tǒng)引起的HDN。

本研究結(jié)果顯示，2例患兒均系母嬰Rh血型不合，無ABO血型不合，可以排除合并ABO-HDN。2例患兒DAT均呈強(qiáng)陽性，值得注意的是患兒1間接抗人球蛋白試驗(yàn)(IAT)陽性、患兒2陰性，曾一度懷疑是否有繼續(xù)試驗(yàn)的價(jià)值。繼續(xù)試驗(yàn)患兒2紅細(xì)胞乙醚放散液IAT陽性，為后續(xù)試驗(yàn)的展開分析提供了幫助，2例患兒均檢出高效價(jià)致敏紅細(xì)胞的抗體。駱宏等[7]報(bào)道過1例IgG抗-D合并IgG抗-B引起的HDN。因此，在做溶血試驗(yàn)時(shí)，O型Rh陽性的HDN患兒不能以血型排除溶血病的可能，單一IAT陰性并不能排除患兒有不規(guī)則抗體，單一血型抗體或多系統(tǒng)血型抗體合并均會(huì)導(dǎo)致HDN。

由于新生兒的A(B)抗原密度較成人低，被結(jié)合的抗體也很少，因此許多ABO-HDN直抗通常為陰性或弱陽性。而Rh-HDN的直抗都相當(dāng)強(qiáng)，一般大于或等于2+，因此新生兒直抗強(qiáng)弱是區(qū)別ABO-HDN和Rh-HDN的重要標(biāo)志[8]。并可依據(jù)直抗強(qiáng)弱決定放散方法，直抗大于或等于2+時(shí)常用乙醚放散，反之則常用熱放散。患兒經(jīng)血清學(xué)檢測(cè)鑒定了抗體的特異性，檢測(cè)排除其他診斷，綜合所有試驗(yàn)結(jié)果分析，2例患兒均系高效價(jià)Rh系統(tǒng)抗體引起的HDN。立即聯(lián)系臨床醫(yī)生，制訂患兒的輸血策略，為患兒進(jìn)行了換血療法和綜合治療，黃疸逐漸消退，貧血糾正，病愈出院。

綜上所述，DAT陽性時(shí)要警惕Rh血型系統(tǒng)和其他血型系統(tǒng)引發(fā)的溶血病， DAT陽性對(duì)HDN試驗(yàn)的后續(xù)展開分析具有方向性作用。為了確診新生兒Rh溶血病，應(yīng)結(jié)合HDN三項(xiàng)試驗(yàn)和IAT試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行綜合分析，避免漏檢影響診療效果。

參考文獻(xiàn)

[1]陳蕤，穆士杰，張獻(xiàn)清，等．抗-cE聯(lián)合抗體致新生兒溶血病1例[J]．臨床血液學(xué)雜志:輸血與檢驗(yàn)版，2011，24(1)：119-120．

[2]張欽輝，高峰，朱永明．臨床輸血學(xué)[M]．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2000：97-102．

[3]劉達(dá)莊．免疫血液學(xué)[M]．上海：上海科學(xué)技術(shù)出版社，2002：128-144．

[4]寇麗筠，陳宏礎(chǔ)，叢玉隆，等．臨床基礎(chǔ)檢驗(yàn)學(xué)[M]．北京：人民衛(wèi)生出版社，1999：79．

[5]朱碎永，朱燕英，林甲進(jìn)．新生兒Rh溶血病的檢查分析及預(yù)防[J]．中國優(yōu)生與遺傳雜志，2007，15(3)：68-69．

[6]徐華，葉世輝，邵超鵬，等．Rh陰性孕婦血型D抗原同種免疫反應(yīng)研究[J]．中國輸血雜志，2010，23(4)：276-279．

[7]駱宏，汪傳喜，羅廣平，等．IgG抗-D合并IgG抗-B所致新生兒溶血病的試驗(yàn)診斷[J]．中國輸血雜志，2009，22(10)：799-801．

[8]高峰．臨床輸血與檢驗(yàn)[M]．2版．北京：人民衛(wèi)生出版社，2007：114．

(收稿日期：2015-11-29)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.05.032

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)05-0654-03