單愛琴++肖潔++楊秀婧

摘要：通過室內(nèi)模擬試驗對土壤進行四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合染毒，采用直接吸收法（密閉靜置培養(yǎng)測二氧化碳法）研究四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響。結(jié)果表明，四氯化碳對土壤呼吸作用的影響隨時間呈先抑制、后恢復(fù)的過程，且四氯化碳體積分?jǐn)?shù)越高，抑制作用越強；四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合污染增強了對土壤呼吸作用的抑制，四氯乙烯高體積分?jǐn)?shù)組（0.40～1.60 mg/kg）與四氯化碳各質(zhì)量分?jǐn)?shù)復(fù)合處理的抑制作用均強于對照；四氯化碳與四氯乙烯的交互作用對土壤呼吸的影響主要表現(xiàn)為協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞：四氯化碳；四氯乙烯；復(fù)合污染；土壤呼吸率

中圖分類號： X53文獻標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2016）02-0364-04

收稿日期：2015-01-11

基金項目：住房和城鄉(xiāng)建設(shè)部項目（編號：2013-K7-11）；江蘇省自然科學(xué)基金（編號：BK2008134）。

作者簡介：單愛琴（1966—），女，山東諸城人，副教授，博士生導(dǎo)師，主要從事環(huán)境生物毒理及生態(tài)修復(fù)研究。E-mail：klsaq2003@163.com。氯代脂肪烴被廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，如四氯乙烯可作為織物的干洗劑、金屬的脫脂洗滌劑、干燥劑、驅(qū)蟲劑、有機合成中間體等[1-3]，四氯化碳常作為重要的化工原料和有機溶劑。但由于其性質(zhì)穩(wěn)定、不易降解，進入環(huán)境中的氯代脂肪烴會改變該環(huán)境的生態(tài)功能及組成，如進入土壤環(huán)境后將改變微生物群落結(jié)構(gòu)及土壤酶活性，使土壤呼吸作用降低。氯代脂肪烴是威脅生態(tài)系統(tǒng)最普遍的一類持久性有機污染物[4-5]。

氯代脂肪烴復(fù)合污染土壤及地下水的事件在國內(nèi)外均有發(fā)生，如我國北方某城市淺層地下水氯代烴污染已被證實[1，6-9]，其中三氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、四氯乙烯是污染區(qū)的主要污染物，且四氯化碳（CT）與四氯乙烯（PCE）常共存于污染場地。1999年至今10余年的連續(xù)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，某農(nóng)藥廠排放的四氯化碳對其所在巖溶水源地補給區(qū)的土壤造成污染，并從中檢測出四氯化碳的各種同系物[7]。

目前，國內(nèi)外學(xué)者已對土壤、地下水環(huán)境中的氯代脂肪烴污染進行了大量研究[9-12]。毒理學(xué)研究多集中于其動物醫(yī)學(xué)毒性特征[13-14]，大多僅考慮單一污染物水平的環(huán)境行為，對土壤中復(fù)合污染的研究極少，而實際情況中復(fù)合污染更為常見。

在土壤環(huán)境中，土壤呼吸作用強度是土壤肥力、微生物代謝旺盛程度、氮循環(huán)的重要指標(biāo)之一[15]，不僅關(guān)系到土壤中有機物的分解，且土壤呼吸所釋放的二氧化碳是植物同化二氧化碳的重要來源，與植物生長密切相關(guān)[16-17]。通過模擬試驗研究CT與PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響，探討復(fù)合污染對土壤微生態(tài)毒理效應(yīng)、保障生態(tài)安全、提高土壤質(zhì)量具有重要指示性意義。

1材料與方法

1.1供試土壤

取江蘇省校內(nèi)一處未經(jīng)污染的土壤，將其風(fēng)干后研磨，過2 mm篩備用。土壤的基本性質(zhì)見表1。

1.2土壤中四氯化碳及四氯乙烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置

四氯化碳的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置見表2，CT-PCE復(fù)合處理的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置見表3。

1.3土壤呼吸率的測定

采用直接吸收法（密閉靜置法）[18]滴定測定CO2釋放量。取50 g土壤置于100 mL干燥燒杯中，加入1 g葡萄糖及少量水，將燒杯放入（25±1） ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，取出燒杯后加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯代脂肪烴（表2、表3），并將土壤含水量調(diào)節(jié)為最大持水量的3/5。取35 mL 0.1 mol/L的NaOH溶液置于100 mL空燒杯中，將2個燒杯放入標(biāo)本瓶并密閉瓶口，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于1、2、4、6、9、13 d取出含NaOH溶液的燒杯，對剩余NaOH進行滴定（0.2 mol/L HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液），同時另取一燒杯加入35 mL 0.1 mol/L的NaOH溶液，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，按上述步驟如期進行測定。土壤呼吸率以每克土壤釋放的CO2量（mg/g）表示，每個處理至少重復(fù)2次。

1.4數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均設(shè)置不添加污染物的空白處理為對照，計算方法為平均變化百分?jǐn)?shù)=（處理土樣-對照土樣）/對照土樣×100%。采用Excel 2003軟件、SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理、方差分析等統(tǒng)計分析。

2結(jié)果與分析

2.1CT單一污染對土壤呼吸率的影響

由表4可知，CT對土壤呼吸率的影響隨時間呈先抑制、后恢復(fù)的過程，且CT質(zhì)量分?jǐn)?shù)越大，抑制作用越強。抑制作用除3#于2 d、5#于4 d達最大值外，其余樣本均于1 d達到最大值，經(jīng)檢驗，1#、2#樣本與空白對照無顯著差異，但2#樣本的抑制率為30.98%；3#至6#樣本的抑制率分別為 59.07%、67.19%、67.01%、71.91%。各處理樣本的呼吸率于2 d開始呈上升趨勢，至13 d 1#～4#樣本分別比空白對照高27.58%、26.20%、5.75%、1.39%，表明低質(zhì)量分?jǐn)?shù)CT（0.032～3.200 mg/kg）處理的呼吸率已恢復(fù)，而較高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的5#、6#樣本（6.40～9.60 mg/kg）在試驗期間內(nèi)恢復(fù)緩慢。這是因為四氯化碳對土壤中微生物的活性產(chǎn)生抑制，繼而使土壤呼吸率降低。隨著時間的延長、四氯化碳在土壤中揮發(fā)等原因，土壤中微生物適應(yīng)了四氯化碳污染環(huán)境，或有新的優(yōu)勢菌群增長，使土壤的呼吸作用逐步恢復(fù)。質(zhì)量分?jǐn)?shù)較大時，土壤中微生物受抑制程度高，難以在短期內(nèi)恢復(fù)至正常水平；而質(zhì)量分?jǐn)?shù)較小時，污染土壤中的微生物活性恢復(fù)較快。由表5可知，土壤呼吸率與CT質(zhì)量分?jǐn)?shù)之間存在顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

2.2CT與PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響

CT-PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響見表6。采用SPSS 13.0軟件交叉分組的雙因素方差分析，比較單一CT污染脅迫與CT-PCE復(fù)合污染脅迫下土壤呼吸率的均值，并采用LSD法進行多重比較。

摘要：通過室內(nèi)模擬試驗對土壤進行四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合染毒，采用直接吸收法（密閉靜置培養(yǎng)測二氧化碳法）研究四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響。結(jié)果表明，四氯化碳對土壤呼吸作用的影響隨時間呈先抑制、后恢復(fù)的過程，且四氯化碳體積分?jǐn)?shù)越高，抑制作用越強；四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合污染增強了對土壤呼吸作用的抑制，四氯乙烯高體積分?jǐn)?shù)組（0.40～1.60 mg/kg）與四氯化碳各質(zhì)量分?jǐn)?shù)復(fù)合處理的抑制作用均強于對照；四氯化碳與四氯乙烯的交互作用對土壤呼吸的影響主要表現(xiàn)為協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞：四氯化碳；四氯乙烯；復(fù)合污染；土壤呼吸率

中圖分類號： X53文獻標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2016）02-0364-04

收稿日期：2015-01-11

基金項目：住房和城鄉(xiāng)建設(shè)部項目（編號：2013-K7-11）；江蘇省自然科學(xué)基金（編號：BK2008134）。

作者簡介：單愛琴（1966—），女，山東諸城人，副教授，博士生導(dǎo)師，主要從事環(huán)境生物毒理及生態(tài)修復(fù)研究。E-mail：klsaq2003@163.com。氯代脂肪烴被廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，如四氯乙烯可作為織物的干洗劑、金屬的脫脂洗滌劑、干燥劑、驅(qū)蟲劑、有機合成中間體等[1-3]，四氯化碳常作為重要的化工原料和有機溶劑。但由于其性質(zhì)穩(wěn)定、不易降解，進入環(huán)境中的氯代脂肪烴會改變該環(huán)境的生態(tài)功能及組成，如進入土壤環(huán)境后將改變微生物群落結(jié)構(gòu)及土壤酶活性，使土壤呼吸作用降低。氯代脂肪烴是威脅生態(tài)系統(tǒng)最普遍的一類持久性有機污染物[4-5]。

氯代脂肪烴復(fù)合污染土壤及地下水的事件在國內(nèi)外均有發(fā)生，如我國北方某城市淺層地下水氯代烴污染已被證實[1，6-9]，其中三氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、四氯乙烯是污染區(qū)的主要污染物，且四氯化碳（CT）與四氯乙烯（PCE）常共存于污染場地。1999年至今10余年的連續(xù)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，某農(nóng)藥廠排放的四氯化碳對其所在巖溶水源地補給區(qū)的土壤造成污染，并從中檢測出四氯化碳的各種同系物[7]。

目前，國內(nèi)外學(xué)者已對土壤、地下水環(huán)境中的氯代脂肪烴污染進行了大量研究[9-12]。毒理學(xué)研究多集中于其動物醫(yī)學(xué)毒性特征[13-14]，大多僅考慮單一污染物水平的環(huán)境行為，對土壤中復(fù)合污染的研究極少，而實際情況中復(fù)合污染更為常見。

在土壤環(huán)境中，土壤呼吸作用強度是土壤肥力、微生物代謝旺盛程度、氮循環(huán)的重要指標(biāo)之一[15]，不僅關(guān)系到土壤中有機物的分解，且土壤呼吸所釋放的二氧化碳是植物同化二氧化碳的重要來源，與植物生長密切相關(guān)[16-17]。通過模擬試驗研究CT與PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響，探討復(fù)合污染對土壤微生態(tài)毒理效應(yīng)、保障生態(tài)安全、提高土壤質(zhì)量具有重要指示性意義。

1材料與方法

1.1供試土壤

取江蘇省校內(nèi)一處未經(jīng)污染的土壤，將其風(fēng)干后研磨，過2 mm篩備用。土壤的基本性質(zhì)見表1。

1.2土壤中四氯化碳及四氯乙烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置

四氯化碳的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置見表2，CT-PCE復(fù)合處理的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置見表3。

1.3土壤呼吸率的測定

采用直接吸收法（密閉靜置法）[18]滴定測定CO2釋放量。取50 g土壤置于100 mL干燥燒杯中，加入1 g葡萄糖及少量水，將燒杯放入（25±1） ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，取出燒杯后加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯代脂肪烴（表2、表3），并將土壤含水量調(diào)節(jié)為最大持水量的3/5。取35 mL 0.1 mol/L的NaOH溶液置于100 mL空燒杯中，將2個燒杯放入標(biāo)本瓶并密閉瓶口，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于1、2、4、6、9、13 d取出含NaOH溶液的燒杯，對剩余NaOH進行滴定（0.2 mol/L HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液），同時另取一燒杯加入35 mL 0.1 mol/L的NaOH溶液，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，按上述步驟如期進行測定。土壤呼吸率以每克土壤釋放的CO2量（mg/g）表示，每個處理至少重復(fù)2次。

1.4數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均設(shè)置不添加污染物的空白處理為對照，計算方法為平均變化百分?jǐn)?shù)=（處理土樣-對照土樣）/對照土樣×100%。采用Excel 2003軟件、SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理、方差分析等統(tǒng)計分析。

2結(jié)果與分析

2.1CT單一污染對土壤呼吸率的影響

由表4可知，CT對土壤呼吸率的影響隨時間呈先抑制、后恢復(fù)的過程，且CT質(zhì)量分?jǐn)?shù)越大，抑制作用越強。抑制作用除3#于2 d、5#于4 d達最大值外，其余樣本均于1 d達到最大值，經(jīng)檢驗，1#、2#樣本與空白對照無顯著差異，但2#樣本的抑制率為30.98%；3#至6#樣本的抑制率分別為 59.07%、67.19%、67.01%、71.91%。各處理樣本的呼吸率于2 d開始呈上升趨勢，至13 d 1#～4#樣本分別比空白對照高27.58%、26.20%、5.75%、1.39%，表明低質(zhì)量分?jǐn)?shù)CT（0.032～3.200 mg/kg）處理的呼吸率已恢復(fù)，而較高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的5#、6#樣本（6.40～9.60 mg/kg）在試驗期間內(nèi)恢復(fù)緩慢。這是因為四氯化碳對土壤中微生物的活性產(chǎn)生抑制，繼而使土壤呼吸率降低。隨著時間的延長、四氯化碳在土壤中揮發(fā)等原因，土壤中微生物適應(yīng)了四氯化碳污染環(huán)境，或有新的優(yōu)勢菌群增長，使土壤的呼吸作用逐步恢復(fù)。質(zhì)量分?jǐn)?shù)較大時，土壤中微生物受抑制程度高，難以在短期內(nèi)恢復(fù)至正常水平；而質(zhì)量分?jǐn)?shù)較小時，污染土壤中的微生物活性恢復(fù)較快。由表5可知，土壤呼吸率與CT質(zhì)量分?jǐn)?shù)之間存在顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

2.2CT與PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響

CT-PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響見表6。采用SPSS 13.0軟件交叉分組的雙因素方差分析，比較單一CT污染脅迫與CT-PCE復(fù)合污染脅迫下土壤呼吸率的均值，并采用LSD法進行多重比較。

摘要：通過室內(nèi)模擬試驗對土壤進行四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合染毒，采用直接吸收法（密閉靜置培養(yǎng)測二氧化碳法）研究四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響。結(jié)果表明，四氯化碳對土壤呼吸作用的影響隨時間呈先抑制、后恢復(fù)的過程，且四氯化碳體積分?jǐn)?shù)越高，抑制作用越強；四氯化碳與四氯乙烯復(fù)合污染增強了對土壤呼吸作用的抑制，四氯乙烯高體積分?jǐn)?shù)組（0.40～1.60 mg/kg）與四氯化碳各質(zhì)量分?jǐn)?shù)復(fù)合處理的抑制作用均強于對照；四氯化碳與四氯乙烯的交互作用對土壤呼吸的影響主要表現(xiàn)為協(xié)同作用。

關(guān)鍵詞：四氯化碳；四氯乙烯；復(fù)合污染；土壤呼吸率

中圖分類號： X53文獻標(biāo)志碼： A文章編號：1002-1302（2016）02-0364-04

收稿日期：2015-01-11

基金項目：住房和城鄉(xiāng)建設(shè)部項目（編號：2013-K7-11）；江蘇省自然科學(xué)基金（編號：BK2008134）。

作者簡介：單愛琴（1966—），女，山東諸城人，副教授，博士生導(dǎo)師，主要從事環(huán)境生物毒理及生態(tài)修復(fù)研究。E-mail：klsaq2003@163.com。氯代脂肪烴被廣泛應(yīng)用于工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，如四氯乙烯可作為織物的干洗劑、金屬的脫脂洗滌劑、干燥劑、驅(qū)蟲劑、有機合成中間體等[1-3]，四氯化碳常作為重要的化工原料和有機溶劑。但由于其性質(zhì)穩(wěn)定、不易降解，進入環(huán)境中的氯代脂肪烴會改變該環(huán)境的生態(tài)功能及組成，如進入土壤環(huán)境后將改變微生物群落結(jié)構(gòu)及土壤酶活性，使土壤呼吸作用降低。氯代脂肪烴是威脅生態(tài)系統(tǒng)最普遍的一類持久性有機污染物[4-5]。

氯代脂肪烴復(fù)合污染土壤及地下水的事件在國內(nèi)外均有發(fā)生，如我國北方某城市淺層地下水氯代烴污染已被證實[1，6-9]，其中三氯甲烷、四氯化碳、三氯乙烯、四氯乙烯是污染區(qū)的主要污染物，且四氯化碳（CT）與四氯乙烯（PCE）常共存于污染場地。1999年至今10余年的連續(xù)監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，某農(nóng)藥廠排放的四氯化碳對其所在巖溶水源地補給區(qū)的土壤造成污染，并從中檢測出四氯化碳的各種同系物[7]。

目前，國內(nèi)外學(xué)者已對土壤、地下水環(huán)境中的氯代脂肪烴污染進行了大量研究[9-12]。毒理學(xué)研究多集中于其動物醫(yī)學(xué)毒性特征[13-14]，大多僅考慮單一污染物水平的環(huán)境行為，對土壤中復(fù)合污染的研究極少，而實際情況中復(fù)合污染更為常見。

在土壤環(huán)境中，土壤呼吸作用強度是土壤肥力、微生物代謝旺盛程度、氮循環(huán)的重要指標(biāo)之一[15]，不僅關(guān)系到土壤中有機物的分解，且土壤呼吸所釋放的二氧化碳是植物同化二氧化碳的重要來源，與植物生長密切相關(guān)[16-17]。通過模擬試驗研究CT與PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響，探討復(fù)合污染對土壤微生態(tài)毒理效應(yīng)、保障生態(tài)安全、提高土壤質(zhì)量具有重要指示性意義。

1材料與方法

1.1供試土壤

取江蘇省校內(nèi)一處未經(jīng)污染的土壤，將其風(fēng)干后研磨，過2 mm篩備用。土壤的基本性質(zhì)見表1。

1.2土壤中四氯化碳及四氯乙烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置

四氯化碳的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置見表2，CT-PCE復(fù)合處理的質(zhì)量分?jǐn)?shù)設(shè)置見表3。

1.3土壤呼吸率的測定

采用直接吸收法（密閉靜置法）[18]滴定測定CO2釋放量。取50 g土壤置于100 mL干燥燒杯中，加入1 g葡萄糖及少量水，將燒杯放入（25±1） ℃生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，取出燒杯后加入不同質(zhì)量分?jǐn)?shù)的氯代脂肪烴（表2、表3），并將土壤含水量調(diào)節(jié)為最大持水量的3/5。取35 mL 0.1 mol/L的NaOH溶液置于100 mL空燒杯中，將2個燒杯放入標(biāo)本瓶并密閉瓶口，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于1、2、4、6、9、13 d取出含NaOH溶液的燒杯，對剩余NaOH進行滴定（0.2 mol/L HCl標(biāo)準(zhǔn)溶液），同時另取一燒杯加入35 mL 0.1 mol/L的NaOH溶液，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)，按上述步驟如期進行測定。土壤呼吸率以每克土壤釋放的CO2量（mg/g）表示，每個處理至少重復(fù)2次。

1.4數(shù)據(jù)處理

所有數(shù)據(jù)均設(shè)置不添加污染物的空白處理為對照，計算方法為平均變化百分?jǐn)?shù)=（處理土樣-對照土樣）/對照土樣×100%。采用Excel 2003軟件、SPSS 13.0軟件進行數(shù)據(jù)處理、方差分析等統(tǒng)計分析。

2結(jié)果與分析

2.1CT單一污染對土壤呼吸率的影響

由表4可知，CT對土壤呼吸率的影響隨時間呈先抑制、后恢復(fù)的過程，且CT質(zhì)量分?jǐn)?shù)越大，抑制作用越強。抑制作用除3#于2 d、5#于4 d達最大值外，其余樣本均于1 d達到最大值，經(jīng)檢驗，1#、2#樣本與空白對照無顯著差異，但2#樣本的抑制率為30.98%；3#至6#樣本的抑制率分別為 59.07%、67.19%、67.01%、71.91%。各處理樣本的呼吸率于2 d開始呈上升趨勢，至13 d 1#～4#樣本分別比空白對照高27.58%、26.20%、5.75%、1.39%，表明低質(zhì)量分?jǐn)?shù)CT（0.032～3.200 mg/kg）處理的呼吸率已恢復(fù)，而較高質(zhì)量分?jǐn)?shù)的5#、6#樣本（6.40～9.60 mg/kg）在試驗期間內(nèi)恢復(fù)緩慢。這是因為四氯化碳對土壤中微生物的活性產(chǎn)生抑制，繼而使土壤呼吸率降低。隨著時間的延長、四氯化碳在土壤中揮發(fā)等原因，土壤中微生物適應(yīng)了四氯化碳污染環(huán)境，或有新的優(yōu)勢菌群增長，使土壤的呼吸作用逐步恢復(fù)。質(zhì)量分?jǐn)?shù)較大時，土壤中微生物受抑制程度高，難以在短期內(nèi)恢復(fù)至正常水平；而質(zhì)量分?jǐn)?shù)較小時，污染土壤中的微生物活性恢復(fù)較快。由表5可知，土壤呼吸率與CT質(zhì)量分?jǐn)?shù)之間存在顯著的劑量-效應(yīng)關(guān)系。

2.2CT與PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響

CT-PCE復(fù)合污染對土壤呼吸率的影響見表6。采用SPSS 13.0軟件交叉分組的雙因素方差分析，比較單一CT污染脅迫與CT-PCE復(fù)合污染脅迫下土壤呼吸率的均值，并采用LSD法進行多重比較。