仉明亮 馬力克·艾則孜

（新疆自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊 830011）

犢牛大腸桿菌病的診斷鑒定與治療

仉明亮 馬力克·艾則孜

（新疆自治區(qū)動物衛(wèi)生監(jiān)督所，新疆烏魯木齊 830011）

采用羊大腸桿菌病的細(xì)菌學(xué)實驗方法，應(yīng)用細(xì)菌學(xué)分離技術(shù)，從病死犢牛的內(nèi)臟組織中分離到一株病原菌。經(jīng)觀察其細(xì)菌學(xué)形態(tài)，培養(yǎng)特性及生化特征結(jié)合臨床癥狀和流行病學(xué)特點，確診為犢牛大腸桿菌病，即犢牛痢疾。

犢牛；大腸桿菌；診斷治療

大腸桿菌病是一種人畜共患的大腸桿菌性腹瀉或犢牛白痢傳染病。其特征為敗血癥和劇烈腹瀉，發(fā)病急，致死率高。

1 發(fā)病情況及臨床癥狀

烏魯木齊縣永豐鄉(xiāng)某養(yǎng)殖戶的合作社飼養(yǎng)30頭奶牛，于 2015年 2～3月中陸續(xù)產(chǎn)犢牛新生犢牛開始生病死亡。當(dāng)?shù)孬F醫(yī)用青霉素，鏈霉素等抗生素進(jìn)行治療，但病情沒有能得到控制。在隨后的幾天病情逐步擴散。發(fā)病率、死亡率繼續(xù)上升，到接到病料為止，以死亡2頭犢牛。發(fā)病犢牛的主要臨床表現(xiàn)為病初體溫升高到42℃、精神委頓、結(jié)膜潮紅、呼吸困難、四肢僵硬、運步失調(diào)繼而臥地磨牙，臥地不起、頭向后仰、一肢或數(shù)肢呈游泳樣運動、食欲不振、發(fā)抖另還口吐泡漠、鼻流黏液，多數(shù)在發(fā)病后一天內(nèi)死亡。

2 剖檢變化

病死犢牛的胃、小腸、大地腸內(nèi)容物呈灰黃色，粘膜充血，微腫，腸系膜腫大充血，盲腸彭氣，淋巴結(jié)腫脹，肝質(zhì)脆，充血，色發(fā)黃，肺顯著充血腫大，有出血性壞死灶，腎皮質(zhì)充血，心包積液。其他器官病變不顯。

3 病原菌分離鑒定

3.1 病原菌的分離

（1）無菌取送檢病料組織分別進(jìn)行涂片。并用革蘭氏，減性美蘭法染色，并鏡檢，在肝、肺等組織涂片中可見大量革蘭氏陰性桿菌，且菌性較大，另可見少量革蘭氏陽性雙球菌。減性美蘭沒有發(fā)現(xiàn)明顯兩極著的色菌株。

（2）分別將心、肝、脾、肺、腎等組織分雖接種于羔通肉腸，厭氣肝湯在37℃培養(yǎng)24h，觀察生旗情況，結(jié)果內(nèi)湯明顯渾濁，厭氣肝湯微量產(chǎn)氣渾濁，分別進(jìn)行涂片、革蘭氏染色，鏡栓。在上述組織的肉湯培養(yǎng)物中都可見大量革蘭氏陰性桿菌，在肝組織培養(yǎng)物中細(xì)菌量最多。在厭氣肝湯培養(yǎng)物中可見到革蘭低陰性桿菌和少量革蘭氏陽性球菌。

（3）取生長較旺盛的肝組織培養(yǎng)物分別進(jìn)接種普通瓊脂和鮮血瓊脂上劃線進(jìn)行純分離，37℃培養(yǎng)24h。結(jié)果在普通培養(yǎng)基和鮮血瓊脂都長出圓形凸起、表面光滑、濕潤、半透明、色黃白色菌落、不容血，鮮血瓊佛上另還長出針尖大小淡灰白色，隆起，閃光的菌落、但不容血。

對上述兩種菌的單個菌落分別進(jìn)行涂片，革蘭氏染色、鏡檢。可見非常單一的革蘭氏陰性桿菌和革蘭氏陽性球菌、取革蘭氏陰性桿菌的單個菌落接種于肉湯培養(yǎng)基和SS瓊脂上，37℃培養(yǎng)24h，在SS瓊脂上長出紅色菌落染色、鏡檢、肉湯培養(yǎng)物，證明分離到純的革蘭氏陰性桿菌。

3.2 動物實驗

取革蘭氏陰性桿菌的純培養(yǎng)物、經(jīng)腹 腔分別注射兩只小白鼠，各0.3ml（16～18g小白鼠由新疆醫(yī)科大學(xué)動物室提供），觀察發(fā)病性況，在16h內(nèi)兩只小鼠都死亡。剖檢死亡小白鼠，可見肺出血性環(huán)死、小腸出血、腸道 內(nèi)容物變黃、肝脾腫大，肝臟有條狀壞死灶，無菌取小白鼠的心、肝、脾、肺、腎等組織涂片，革蘭氏染色、鏡檢，可見于注射菌株相同的細(xì)菌。

3.3 生化實驗

取致病菌的普通瓊脂培養(yǎng)物進(jìn)行氧化酶實驗，結(jié)果為陰性。取培養(yǎng)物接種ATB EXPRESSTON（細(xì)菌自動鑒定及藥敏測試儀）的ID 32E麻條上37℃培養(yǎng)24h，其結(jié)查如下：

ATB 鑒定系統(tǒng) 編號：11-03-18-04

ID 32E V2.0

ODC（鳥氨酸脫羧酶） +ADH（精氨酸雙水解酶）-LDC（賴氨酸脫羧酶）+URE（脲酶） — LARL（L-阿拉泊糖醇）—GAT（半乳糖酸鹽）+SKG（5-銅基-葡萄糖酸鈉）— LIP（脂肪酶）—RP（酚紅）+BGLU（B-葡萄糖甙酶）—MAN（甘露醇）+MAL（麥芽糖）+IND（吲哚產(chǎn)生）+BNAG（N-乙酰-B葡萄糖甙酶）—BGAL（B—半乳糖甙酶）+GLU（葡萄糖）+SAC（蔗糖）——LARA（L —阿拉伯糖）—+KARL（D—阿拉伯糖醇）-AGUL（a-葡萄）—AGAL（a—半乳糖甙酶）+ TRE（海藻糖）+RHA（鼠李糖）+INO（肌醇）—ADD（側(cè)金盞花醇）—PLE—BGUR（B-葡萄糖酸酶）+CEL（纖維二糖）—SOR（山梨醇）？

AMAL（a- 麥芽糖甙酶）—MNT（酸丙二）—ASPA（L-天門冬素芳胺酶）

極好鑒定結(jié)果

大腸埃細(xì)菌…………………………………%I D=9 9.9

亞利桑那沙門菌……………………………%I D=0.1

4 藥敏實驗

取上述革蘭氏陰性致病菌的純培養(yǎng)物作藥敏實驗（藥敏紙片由北京紜生物技術(shù)開發(fā)公司提供，批號：201501）。結(jié)查，該病菌對諾氯沙星，環(huán)丙沙星、氯霉素，慶大霉素等高度敏感，對新霉素，頭孢氨芐，卡那霉素，阿莫西林等敏感小。

5 治療

加強奶牛飼養(yǎng)管理，同時用慶大霉素、環(huán)丙沙星，諾氯沙星，氯霉素等藥預(yù)防治療假定健康犢牛2d，并用上述藥物配合使用強心補液給每個病戸重的犢牛連用2～3d，情連用2d治療后病情轉(zhuǎn)好。第3天后在沒有新的病情出現(xiàn)。

6 討論

經(jīng)實驗室細(xì)菌學(xué)檢驗，生化鑒定，結(jié)合犢牛流行病學(xué)調(diào)查，臨床癥狀，剖栓變化確診為犢牛大腸桿菌病。

7 結(jié)論

根據(jù)對奶牛進(jìn)行的現(xiàn)場綜合（臨床癥狀，體剖檢）診斷和實驗室檢驗表明：該養(yǎng)殖戶發(fā)生的疾病可以確診為大腸桿菌病。根據(jù)藥敏試驗選擇對本養(yǎng)殖戶內(nèi)發(fā)生的大腸桿菌病高度敏感的恩諾沙星進(jìn)行治療，同時配合使用腸泰克飲水，做好牛或羊宿的通風(fēng)和消毒，療效較好基本治愈。

[1]許蘭菊，胡功政，寧長申，等.犢牛大腸桿菌病的診斷及防治[J].河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2003，37（2）：181-183.