張 立，張 迪，周培華，王孝瓏，王 煒，陳南征，李孝彬，孫學(xué)軍

(西安交通大學(xué)：1. 第二附屬醫(yī)院普通外科，陜西西安 710004；2. 第一附屬醫(yī)院普通外科，陜西西安 710061)

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NRP-1在胃癌組織及細(xì)胞系中的表達(dá)及臨床意義

張 立1，張 迪1，周培華2，王孝瓏2，王 煒2，陳南征2，李孝彬2，孫學(xué)軍2

(西安交通大學(xué)：1. 第二附屬醫(yī)院普通外科，陜西西安 710004；2. 第一附屬醫(yī)院普通外科，陜西西安 710061)

目的 研究神經(jīng)纖毛蛋白1(NRP-1)在胃癌組織的表達(dá)，探討其與胃癌發(fā)生、發(fā)展及臨床病理因素的關(guān)系及可能的臨床意義。方法 應(yīng)用免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)180例胃癌患者的胃癌組織及癌旁組織標(biāo)本NRP-1表達(dá)，用免疫印跡方法檢測(cè)胃癌組織及不同分化程度的胃癌細(xì)胞NRP-1表達(dá)，K-M生存曲線(xiàn)和多因素回歸模型用于分析胃癌預(yù)后。結(jié)果 胃癌組織中NRP-1表達(dá)水平明顯高于癌旁組織(P<0.001)，胃癌組織中NRP-1高表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC分期、T分期呈正相關(guān)(P<0.05)。多因素生存分析表明高表達(dá)NRP-1是胃癌患者總生存期的獨(dú)立預(yù)后因子。結(jié)論 過(guò)表達(dá)NRP-1可能在胃癌進(jìn)展中發(fā)揮著重要作用，過(guò)表達(dá)NRP-1可作為生物標(biāo)志物預(yù)測(cè)胃癌患者的不良預(yù)后。

神經(jīng)纖毛蛋白-1(NRP-1)；胃癌；免疫組織化學(xué)；免疫印跡；生存曲線(xiàn)；多因素回歸模型

胃癌發(fā)病率在世界范圍內(nèi)排列第五位，其死亡率在腫瘤相關(guān)疾病中居第三位，嚴(yán)重危害人類(lèi)健康[1]。而胃癌患者半數(shù)分布在中國(guó)等東亞國(guó)家，中國(guó)胃癌的發(fā)病率和死亡率在所有腫瘤中排列第三位[2]。手術(shù)切除是治療胃癌的主要手段。但由于胃癌具有高增殖和高轉(zhuǎn)移的特點(diǎn)，患者就診時(shí)多已經(jīng)處于晚期，5年生存率僅為28%[3]。盡管已經(jīng)廣泛應(yīng)用傳統(tǒng)的臨床病理因素如胃癌的分級(jí)、分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等預(yù)測(cè)胃癌術(shù)后的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移，但是，在術(shù)前早期預(yù)測(cè)胃癌的生存預(yù)后，探索新的生物標(biāo)志物以指導(dǎo)臨床治療則迫在眉睫。

神經(jīng)纖毛蛋白1(neuropilin-1, NRP-1)是一種跨膜糖蛋白受體，表達(dá)于內(nèi)皮細(xì)胞、樹(shù)突細(xì)胞、某些正常和腫瘤細(xì)胞表面[4-6]。最近研究發(fā)現(xiàn)不僅NRP-1在多種腫瘤細(xì)胞表達(dá)，而且NRP-1的異常表達(dá)還與許多腫瘤的惡性發(fā)展和不良預(yù)后密切相關(guān)，其中包括膀胱癌、皮膚鱗癌、結(jié)直腸癌、胰腺癌、非小細(xì)胞肺癌、骨肉瘤等[7-12]。盡管NRP-1在胃癌細(xì)胞系中已有研究，如MicroRNA-338通過(guò)下調(diào)NRP-1的表達(dá)，抑制胃癌細(xì)胞生物學(xué)功能[13]，AKAGI等[14]發(fā)現(xiàn)表皮生長(zhǎng)因子受體(EGFR)的激活調(diào)控胃癌血管生成過(guò)程涉及到NRP-1調(diào)節(jié)機(jī)制，但是NRP-1的表達(dá)與胃癌臨床病理聯(lián)系和預(yù)后關(guān)系，目前尚未明確報(bào)道。本研究通過(guò)檢測(cè)NRP-1在胃癌組織、癌旁組織以及不同分化的胃癌細(xì)胞系的表達(dá)，初步探討胃癌組織中NRP-1的表達(dá)與患者臨床病理因素和預(yù)后的相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 組織標(biāo)本

180例胃腺癌組織標(biāo)本取自2009年1月至2011年12月在西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院普通外科行手術(shù)切除的胃癌組織及癌旁組織(規(guī)定距癌組織2 cm以上)，所有標(biāo)本分為兩部分，分別保存于液氮或40 g/L多聚甲醛固定，后常規(guī)石蠟包埋，切片保存。

所有標(biāo)本均經(jīng)術(shù)后病理證實(shí)，術(shù)前均未接受抗腫瘤治療。其中，男118例，女62例，年齡60歲及以上101例，60歲以下79例。腫瘤原發(fā)部位上1/3部(U區(qū))32例，中1/3部(M區(qū))98例，下1/3部(L區(qū))50例；腫瘤直徑<3 cm者82例，≥3 cm者98例；高分化癌26例，中分化癌62例，低分化癌92例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者124例，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者56例；Lauren分型腸型109例，彌漫型71例；淋巴結(jié)切除數(shù)目25個(gè)以下67例，25個(gè)以上113例；采用美國(guó)癌癥聯(lián)合會(huì)(AJCC)制定的第7版胃癌TNM分期：Ⅰ期63例，Ⅱ期49例，Ⅲ期60例，Ⅳ期8例。本實(shí)驗(yàn)經(jīng)西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，嚴(yán)格遵照《赫爾辛斯基宣言》醫(yī)學(xué)倫理道德準(zhǔn)則實(shí)施，與所有患者或家屬進(jìn)行充分溝通并簽署試驗(yàn)知情同意書(shū)。

1.2 細(xì)胞株及細(xì)胞培養(yǎng)

胃癌細(xì)胞系N87、SGC7901、AGS、HGC27購(gòu)置于中國(guó)科學(xué)院上海細(xì)胞庫(kù)。HGC27細(xì)胞培養(yǎng)于DMEM細(xì)胞培養(yǎng)液(Gibco，含2 mmol/L L-谷氨酰胺、100 mL/L血清、100 U/mL青霉素、100 U/mL鏈霉素)中。3株細(xì)胞N87、SGC7901、AGS培養(yǎng)在RPMI 1640細(xì)胞培養(yǎng)液中(均加入100 mL/L胎牛血清)。將對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的細(xì)胞懸液均勻地分布于25 cm×25 cm細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，其中含5 mL培養(yǎng)液，細(xì)胞密度為5×104個(gè)/mL，每周傳代2次，置于37 ℃、50 mL/L CO2孵箱中培養(yǎng)。

1.3 免疫組織化學(xué)檢測(cè)

切片經(jīng)二甲苯脫蠟、梯度乙醇水化后進(jìn)行抗原修復(fù)、封閉內(nèi)源性過(guò)氧化物酶及正常山羊血清封閉抗原，依據(jù)試劑說(shuō)明滴加稀釋后(1∶100稀釋)兔抗人NRP-1單克隆抗體(北京中杉金橋公司)4 ℃冰箱過(guò)夜，濕盒室溫復(fù)溫1 h后滴加生物素標(biāo)記二抗，37 ℃孵育30 min，PBS沖洗后DAB顯色，蘇木紫襯染，重新脫水透明，封片，顯微鏡下觀察。所有染色采用已知陽(yáng)性癌組織切片作為陽(yáng)性對(duì)照，磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗作為陰性對(duì)照。

結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：NRP-1主要表達(dá)在細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，根據(jù)腫瘤細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)的染色程度和染色細(xì)胞百分率分析評(píng)分。以出現(xiàn)淡黃-棕褐色顆粒作為陽(yáng)性結(jié)果，由2名副高級(jí)職稱(chēng)病理醫(yī)師進(jìn)行獨(dú)立雙盲評(píng)分。每張病理切片隨機(jī)選取5個(gè)10×40倍光學(xué)顯微鏡視野，將NRP-1的染色范圍及染色強(qiáng)度依據(jù)以下標(biāo)準(zhǔn)半定量化，結(jié)果取平均值。標(biāo)準(zhǔn)如下：A染色范圍：染色陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占總細(xì)胞數(shù)的比率按≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，≥76%為4分；B染色強(qiáng)度：按照未染色為0分、淡黃色為1分，棕色為2分，棕褐色為3分。將染色范圍與染色強(qiáng)度計(jì)分相乘得出結(jié)果：0～4分為低表達(dá)，5～12分為高表達(dá)。

1.4 免疫印跡法檢測(cè)NRP-1表達(dá)

常規(guī)方法抽提胃癌細(xì)胞和組織標(biāo)本蛋白，以每個(gè)泳道20 μg上樣，經(jīng)SDS-PAGE電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜，用50 g/L牛血清白蛋白(BSA)封閉PVDF膜，加入封閉液稀釋的一抗NRP-1(Abcam 1∶1 000)、β-actin(1∶5 000)4 ℃孵育過(guò)夜，洗膜后再加入二抗(1∶5 000)孵育2 h，洗膜后采用超敏ECL試劑盒進(jìn)行顯色，在暗房中進(jìn)行X光顯影獲得顯示條帶的膠片并照相保存。Image J分析軟件將每個(gè)條帶灰度數(shù)字化，以β-actin為參照，計(jì)算蛋白表達(dá)的相對(duì)強(qiáng)度，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.5 隨訪(fǎng)

所有患者術(shù)后進(jìn)行3年定期隨訪(fǎng)，開(kāi)始時(shí)間為接受手術(shù)的時(shí)間，截至日期為2014年12月31日。采用門(mén)診隨訪(fǎng)及電話(huà)隨訪(fǎng)，平均每6月1次，規(guī)定死亡患者死亡時(shí)間為終止時(shí)間，中途失訪(fǎng)者的終止時(shí)間為最后1次隨訪(fǎng)時(shí)間，亦納入生存分析。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

采用Pearsonχ2檢驗(yàn)計(jì)算NRP-1的表達(dá)與不同臨床病理特征的關(guān)系，運(yùn)用Kaplan-Meier法進(jìn)行生存分析，Log-rank檢驗(yàn)分析曲線(xiàn)有無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異?？尚艆^(qū)間為95%，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行。

2 結(jié) 果

2.1 NRP-1的表達(dá)情況

NRP-1陽(yáng)性染色主要位于細(xì)胞膜和細(xì)胞質(zhì)中，呈棕色、棕黃色顆粒樣，在胃癌組織中，47.78%(86/180)染色結(jié)果低表達(dá)，52.22%(94/180)高表達(dá)，在癌旁組織中，所有染色結(jié)果NRP-1為低表達(dá)(圖1)。

2.2 NRP-1表達(dá)與胃癌臨床病理因素的關(guān)系

NRP-1在胃癌組織中的表達(dá)與患者性別、年齡、Lauren分型、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、胃癌大小和切除淋巴結(jié)數(shù)目等因素?zé)o關(guān)，胃癌組織中NRP-1高表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC分期、T分期呈正相關(guān)(表1)。

圖1 胃癌組織中NRP-1的表達(dá)

Fig.1 The expression of NRP-1 in gastric cancer tissues
A：陰性表達(dá)；B：弱陽(yáng)性表達(dá)；C：中陽(yáng)性表達(dá)；D：強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)。

表1 胃癌組織中NRP-1表達(dá)水平與患者臨床病理因素之間的相關(guān)性

Tab.1 The correlation between NRP-1 expression level in gastric cancer and clinicopathological factors

臨床病理因素例數(shù)(%)NRP-1低表達(dá)高表達(dá)P值性別 女62(34.44)3329 男118(65.56)53650.289年齡(歲) <6079(43.89)4138 ≥60101(56.11)45560.328分化水平 高+中分化88(48.88)5335 低分化92(51.12)33590.001Lauren分型 腸型109(65.56)5653 彌漫型71(36.44)30410.231T分期 T1+T2122(67.78)6656 T3+T458(32.22)20380.014淋巴結(jié) N056(31.11)3521 N1+N2+N3124(68.89)51730.008轉(zhuǎn)移 是6(3.34)42 否174(96.66)82920.346TNM分期 Ⅰ+Ⅱ112(62.22)6250 Ⅲ+Ⅳ68(37.78)24440.009腫瘤大小(cm) <382(45.56)3646 ≥398(54.44)50480.341切除淋巴結(jié)數(shù)目 <2567(37.22)3631 ≥25113(62.77)50630.218

2.3 生存分析

所有患者隨訪(fǎng)1～36月，平均隨訪(fǎng)時(shí)間為16月，中途失訪(fǎng)20例，中途失訪(fǎng)患者亦納入生存分析。NRP-1低表達(dá)患者術(shù)后3年生存率為31.1%，平均生存時(shí)間為28月，中位生存時(shí)間為26月；NRP-1高表達(dá)患者術(shù)后3年生存率為20.3%，平均生存時(shí)間為21月，中位生存時(shí)間為20月。NRP-1高表達(dá)患者平均生存時(shí)間顯著短于低表達(dá)者，兩者差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(Log-rank檢驗(yàn)，P<0.05，圖2)。

圖2 根據(jù)NRP-1的表達(dá)用Kaplan-Meier統(tǒng)計(jì)分析術(shù)后生存曲線(xiàn)

Fig.2 Based on the expression of NRP-1, the survival curves were analyzed by Kaplan-Meier

對(duì)胃癌患者生存時(shí)間的單因素和多因素分析結(jié)果表明，NRP-1的表達(dá)、腫瘤分化程度、AJCC分期、T分期等與胃癌的生存時(shí)間相關(guān)(表2)。

2.4 在胃癌組織和細(xì)胞系中檢測(cè)NRP-1的表達(dá)

提取3例胃癌患者不同分化程度的胃癌組織(高分化胃癌、中分化胃癌、低分化胃癌)，檢測(cè)NRP-1的表達(dá)情況。3組胃癌患者NRP-1在胃癌癌組織比對(duì)應(yīng)癌旁組織NRP-1表達(dá)高(圖3A)。低分化的胃癌組織NRP-1的表達(dá)比高中分化胃癌組織表達(dá)量高(圖3B)。在NCI-N87高分化胃癌細(xì)胞、SGC7901中分化胃癌細(xì)胞、AGS低分化胃癌細(xì)胞、HGC27未分化胃癌中，HGC27細(xì)胞NRP-1表達(dá)量最高，NCI-N87細(xì)胞NRP-1表達(dá)量最低(圖3C)。

表2 影響180例胃癌患者生存時(shí)間的單因素和多因素分析

Tab.2 Single factor and multi-factor analysis of the survival time of 180 patients with gastric cancer

變量單因素分析HR95%CIP值多因素生存分析HR95%CIP值NRP-1表達(dá)2.7211.289～4.6710.0012.6871.184～4.5210.005年齡1.1210.602～2.1120.8671.2060.657～1.9820.894性別1.0230.523～1.9870.7711.2130.672～1.7780.821分化程度2.6731.337～5.3290.0152.8961.245～4.5770.011AJCC分期3.3111.871～8.5120.0013.1251.388～8.7210.018Lauren分型1.2430.734～1.8770.7821.3120.886～2.1090.865腫瘤大小1.1410.672～2.3340.8211.2350.532～2.5210.712淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移1.0650.567～1.8660.7341.2760.601～2.1890.698

圖3 免疫印跡方法檢測(cè)胃癌組織及不同分化程度的胃癌細(xì)胞NRP-1表達(dá)

Fig.3 The expression of NRP-1 in gastric cancer tissue and gastric cancer cells with different differentiation degrees detected by Western blot
A：胃癌組織(Ca)和癌旁(N)NRP-1的表達(dá)；B：不同分化程度的胃癌組織NRP-1的表達(dá)；C：不同分化程度的胃癌細(xì)胞系中NRP-1的表達(dá)。

3 討 論

臨床上許多臨床病理因素如腫瘤TNM分期、腫瘤病理類(lèi)型及分化程度都相同的胃癌患者，其預(yù)后結(jié)局仍然差異很大。目前，這種異質(zhì)性機(jī)制仍未闡明，因此，迫切需要研究者發(fā)現(xiàn)新的生物標(biāo)志物來(lái)判斷胃癌的生存預(yù)后，指導(dǎo)臨床治療。

NRP家族包括NRP-1和NRP-2，是細(xì)胞膜糖蛋白家族成員可以與血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)配體家族反應(yīng)[15]。NRP-1首次發(fā)現(xiàn)是作為信號(hào)受體參與神經(jīng)元成熟[16-17]，先前研究已經(jīng)發(fā)現(xiàn)NRP-1過(guò)表達(dá)與多種腫瘤惡性進(jìn)展及不良預(yù)后相關(guān)[7,11-12,18-19]。已經(jīng)有研究報(bào)道了NRP-2的表達(dá)可作為判斷胃癌預(yù)后的指標(biāo)[20]，但未有報(bào)道NRP-1在胃癌中的表達(dá)情況及與胃癌的臨床病理因素間的聯(lián)系和生存預(yù)后情況。本研究首先通過(guò)免疫組化檢測(cè)了NRP-1在180例胃癌患者的胃癌及其配對(duì)癌旁組織的表達(dá)情況，發(fā)現(xiàn)癌組織相對(duì)于癌旁組織高表達(dá)NRP-1，這提示NRP-1在胃癌發(fā)生過(guò)程中有重要作用，可能是胃癌的癌基因。進(jìn)一步分析了NRP-1的表達(dá)和胃癌臨床病理因素的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)胃癌組織中NRP-1高表達(dá)與腫瘤分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AJCC分期、T分期呈正相關(guān)(P<0.05)。研究發(fā)現(xiàn)NRP-1作為促血管形成因子，參與構(gòu)成血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體1(VEGFR1)及血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體2(VEGFR2)，進(jìn)而提高了血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165(VEGF165)結(jié)合到血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子受體家族(VEGFRs)，促進(jìn)了VEGF165介導(dǎo)的腫瘤血管形成，細(xì)胞侵襲及腫瘤發(fā)生進(jìn)展[21]。因此，推測(cè)NRP-1高表達(dá)的胃癌患者惡性進(jìn)展可能與此有關(guān)。

進(jìn)一步通過(guò)免疫印跡方法的檢測(cè)結(jié)果顯示胃癌中NRP-1的表達(dá)也顯著高于配對(duì)癌旁組織的表達(dá)，低分化的胃癌組織標(biāo)本高表達(dá)NRP-1；在胃癌細(xì)胞系中，NRP-1的表達(dá)水平與細(xì)胞的分化程度之間具有一定的相關(guān)性，未分化HGC27細(xì)胞NRP-1表達(dá)量最高。我們通過(guò)生存分析發(fā)現(xiàn)高表達(dá)NRP-1的胃癌患者生存期顯著低于低表達(dá)NRP-1的胃癌患者，多因素分析發(fā)現(xiàn)NRP-1可作為胃癌預(yù)后的獨(dú)立預(yù)測(cè)因子。因此，通過(guò)檢測(cè)NRP-1表達(dá)水平可作為一個(gè)輔助工具判斷胃癌患者進(jìn)展及預(yù)后，推測(cè)NRP-1在胃癌發(fā)生發(fā)展的生物學(xué)機(jī)制中扮演著重要角色，NRP-1參與胃癌的發(fā)生機(jī)制需要更多實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。

本實(shí)驗(yàn)證明了胃癌組織中NRP-1的表達(dá)增加，高表達(dá)NRP-1與胃癌分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，臨床分期顯著相關(guān)。并且過(guò)表達(dá)NRP-1預(yù)示著胃癌患者的惡性進(jìn)展及不良預(yù)后，NRP-1可作為重要的生物標(biāo)志物判斷胃癌患者的預(yù)后，有助于指導(dǎo)臨床進(jìn)行個(gè)體化腫瘤治療和監(jiān)控。

[1] FERLAY J, SOERJOMATARAM I, DISKSHIT R, et al. Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns in GLOBOCAN 2012[J]. Int J Cancer, 2015, 36(5):359-386.

[2] CHEN W, ZHENG RS, ZENG HM, et al. Annual report on status of cancer in China, 2011[J]. Chin J Cancer Res, 2015, 27(1):2-12.

[3] DESANTIS CE, LIN CC, MARIOTTO AB, et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2014[J]. CA Cancer J Clin, 2014,64(4):252-271.

[4] BAGRI A, TESSIER-LAVIGNE MR. Watts Neuropilins in tumor biology[J]. Clin Cancer Res, 2009, 15(6):1860-1864.

[5] ELLIS LM. The role of neuropilins in cancer[J]. Mol Cancer Ther, 2006, 5(5):1099-1107.

[6] PELLET-MANY C, FRANKEL P, JIA H et al. Neuropilins:structure, function and role in disease[J]. Biochem J, 2008, 411(2):211-26.

[7] CHENG W, FU D, WEI ZF, et al. NRP-1 expression in bladder cancer and its implications for tumor progression[J]. Tumour Biol, 2014, 35(6):6089-6094.

[8] SHOKOUFEH SF, LILI W, ZWAANS BMM, et al. Neuropilin 1 expression correlates with differentiation status of epidermal cells and cutaneous squamous cell carcinomas[J]. Lab Invest, 2014, 94(7):752-765.

[9] KAMIYA T, KAWAKAMI T, ABE Y, et al. The preserved expression of neuropilin (NRP) 1 contributes to a better prognosis in colon cancer[J]. Oncol Rep, 2006, 15(2):369-373.

[10] BEN Q, ZHENG J, FEI J, et al. High neuropilin 1 expression was associated with angiogenesis and poor overall survival in resected pancreatic ductal adenocarcinoma[J]. Pancreas, 2014, 43(5):744-749.

[11] DING M, LIU L, HU C, et al. Expression of VEGFR2 and NRP-1 in non-small cell lung cancer and their clinical significance[J]. Chin J Cancer Res, 2014, 26(6):669-677.

[12] ZHU H, CAI H, TANG M,et al. Neuropilin-1 is overexpressed in osteosarcoma and contributes to tumor progression and poor prognosis[J]. Clin Transl Oncol, 2014, 16(8):732-738.

[13] PENG Y, LIU YM, LI LC, et al. MicroRNA-338 inhibits growth, invasion and metastasis of gastric cancer by targeting NRP1 expression[J]. PLoS One, 2014, 9(4):e94422.

[14] AKAGI M, KAWAGUCHI M, LIU W, et al. Induction of neuropilin-1 and vascular endothelial growth factor by epidermal growth factor in human gastric cancer cells[J]. Br J Cancer, 2003, 88(5):796-802.

[15] CAO Y, E GQ, WANG EF, et al. VEGF exerts an angiogenesis-independent function in cancer cells to promote their malignant progression[J]. Cancer Res, 2012, 72(16):3912-3918.

[16] HE Z, TESSIER-LAVIGNE M. Neuropilin is a receptor for the axonal chemorepellent Semaphorin III[J]. Cell, 1997, 90(4):739-751.

[17] KOLODKIN AL, LEVENGOOD DV, ROWE EG, et al. Neuropilin is a semaphorin III receptor[J]. Cell, 1997, 90(4):753-762.

[18] OSADA H, TOKUNAGA T, NISHI M, et al. Overexpression of the neuropilin 1 (NRP1) gene correlated with poor prognosis in human glioma[J]. Anticancer Res, 2004, 24(2b):547-552.

[19] FAKHARI M, DIETER PMS, ABRAHAM D,et al. Selective upregulation of vascular endothelial growth factor receptors neuropilin-1 and -2 in human neuroblastoma[J]. Cancer, 2002, 94(1): 258-263.

[20] 徐衛(wèi)國(guó)，劉云，賈純亮，等. 胃癌組織中神經(jīng)纖毛蛋白2表達(dá)與腫瘤淋巴管新生和臨床病理因素的相關(guān)性[J]. 中華醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 94(14):1067-1070.

[21] GLINKA Y, STOILOVA S, MOHAMMED N,et al. Neuropilin-1 exerts co-receptor function for TGF-beta-1 on the membrane of cancer cells and enhances responses to both latent and active TGF-beta[J]. Carcinogenesis, 2011, 32(4):613-621.

(編輯 國(guó) 榮)

Clinical significance of the expression NRP-1 in gastric cancer

ZHANG Li1, ZHANG Di1, ZHOU Pei-hua2, WANG Xiao-long2, WANG Wei2, CHEN Nan-zheng2, LI Xiao-bin2, SUN Xue-jun2

(1. Department of General Surgery, the Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710004; 2. Department of General Surgery,the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China)

Objective To analyze the expression of neuropilin-1 (NRP-1) in gastric cancer tissues and assess its clinicopathological parameters and prognostic significance. Methods NRP-1 expression was determined by immunohistochemistry in specimens of primary cancer tissues and the adjacent non-cancerous tissues in 180 patients with gastric cancer. NRP-1 expression was analyzed by Western blot in gastric cancer tissues and different gastric cancer cell line. Kaplan-Meier plots and Cox’s proportional hazards regression model were used to analyze the prognosis of gastric cancer. Results By immunohistochemistry, the expression of NRP-1 was significantly higher in gastric cancer than that in adjacent noncancerous tissues (P<0.001). High expression of NRP-1 was positively associated with histologic grade, tumor stage, lymph node metastasis and tumor T stage (P<0.05). Multivariate analysis showed that the high expression of NRP-1 was an independent prognostic factor for overall survival. Conclusion Overexpression of NRP-1 may play an important role in the progression of gastric cancer, and NRP-1 overexpression may serve as a biomarker for poor prognosis of gastric cancer patients.

neuropilin-1 (NRP-1); gastric cancer; immunohistochemistry; Western blot; survival curve; multi-factor regression model

2015-06-26

2015-09-09

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81172362,No.81172359) Supported by the National Natural Science Foundation of China (No.81172362, No.81172359)

孫學(xué)軍. E-mail: sunxy@mail.xjtu.edu.cn

R735.2

A

10.7652/jdyxb201601016

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20151208.1659.008.html(2015-12-08)