周 棟，王新宏，周 娟，樊 艷，萬招飛，劉 洋，袁祖貽

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，陜西西安 710061)

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◇臨床研究◇

炎癥小體Nod樣受體蛋白3及胱天蛋白酶募集域蛋白8基因多態(tài)性與急性冠脈綜合征的相關(guān)性

周 棟，王新宏，周 娟，樊 艷，萬招飛，劉 洋，袁祖貽

(西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，陜西西安 710061)

目的 探討Nod樣受體蛋白3(NLRP3)rs10754558位點C>G和胱天蛋白酶募集域蛋白8(CARD8)rs2043211位點A>T多態(tài)性與急性冠脈綜合征(ACS)發(fā)病的關(guān)系。方法 入選450例ACS患者和380例對照組人群，使用ABI Snapshot方法分析NLRP3 rs10754558位點和CARD8 rs2043211位點多態(tài)性；冠狀動脈造影后以Gensini評分評價冠脈狹窄程度；Elisa測定血清白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)濃度。結(jié)果 NLRP3 rs10754558位點對照組和ACS組基因型頻率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.64，P=0.022)，NLRP3 rs10754558位點G等位基因與ACS發(fā)病相關(guān)(AOR=1.334，95%CI=1.085～1.642，P=0.006)。而CARD8 rs2043211位點兩組間基因型頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.08，P=0.582)，且與ACS發(fā)病無明顯關(guān)系(AOR=1.168，95%CI=0.942～1.449，P=0.156)。ACS患者NLRP3 rs10754558位點GG基因型Gensini評分高于CC基因型(74.07±2.13vs. 42.91±1.80，P<0.001)；IL-1β質(zhì)量濃度GG基因型顯著高于CC基因型[(3.21±2.68)pg/mLvs. (1.37±1.36)pg/mL,P<0.001]。結(jié)論 NLRP3 rs10754558位點C>G基因多態(tài)性與中國漢族人群ACS發(fā)病及冠狀動脈狹窄程度有關(guān)；G等位基因是ACS發(fā)病的危險等位基因，其作用與IL-1β濃度升高有關(guān)。

冠狀動脈疾??；Nod樣受體蛋白3(NLRP3)；胱天蛋白酶募集域蛋白8(CARD8)；多態(tài)性；危險因素

急性冠狀動脈綜合征(acute coronary syndrome, ACS)是以不穩(wěn)定動脈粥樣硬化(atherosclerosis, AS)斑塊進(jìn)展及(或)斑塊破裂以及冠狀動脈內(nèi)血栓形成為病理學(xué)特點、引起急性心肌缺血發(fā)作并最終導(dǎo)致心血管事件發(fā)生的一類疾病[1]，目前已成為世界范圍內(nèi)影響人類身心健康的重要社會公共衛(wèi)生問題。ACS的AS斑塊進(jìn)展及活動與脂質(zhì)代謝紊亂及全身或血管局部的炎癥反應(yīng)有密切關(guān)系。脂質(zhì)有明確的致炎作用[2]，膽固醇結(jié)晶被巨噬細(xì)胞吞噬后導(dǎo)致溶酶體破裂，釋放蛋白酶類物質(zhì)，發(fā)生炎癥反應(yīng)[3]，形成AS并使斑塊活動。在這一過程中，釋放的溶酶體導(dǎo)致Nod樣受體蛋白3(Nodlike receptor protein 3, NLRP3)炎癥小體激活，使后者在致AS的炎癥反應(yīng)中扮演及其重要角色。作為激活的NLRP3炎癥小體發(fā)揮作用的重要成分，NLRP3與胱天蛋白酶募集域蛋白8(caspase recruitment domain-containing protein 8, CARD8)通過活化半胱天冬酶-1(caspase-1)激活NFkb介導(dǎo)的白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1β, IL-1β)的轉(zhuǎn)錄[4]，局部或全身增多的IL-1β發(fā)揮強(qiáng)烈促炎效果，促使AS炎癥反應(yīng)進(jìn)展，冠狀動脈局部AS斑塊活動、破裂，導(dǎo)致ACS發(fā)病。

NLRP3和CARD8的表達(dá)及功能受其上游基因調(diào)控。遺傳變異會影響NLRP3和CARD8功能，使不同基因型人群患病情況存在差異。許多研究已經(jīng)證實，NLRP3和CARD8基因多態(tài)性與眾多慢性炎癥性疾病的易感性關(guān)聯(lián)，如腹主動脈瘤[5]、阿司匹林誘發(fā)哮喘[6]等。然而，NLRP3 的rs10754558位點C>G和CARD8 的rs2043211位點A>T多態(tài)性與ACS的關(guān)系尚不清楚?；谝陨锨闆r，我們擬在中國漢族人群中研究NLRP3 rs10754558 C>G位點和CARD8 rs2043211 A>T位點基因多態(tài)性與ACS發(fā)病的關(guān)系。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究為病例對照研究，實施方案按照赫爾辛基準(zhǔn)則宣言經(jīng)西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院倫理委員會同意并經(jīng)充分告知、征得研究對象同意后實施。本研究樣本量估計符合評價樣本量估計公式計算要求,公式為N=Uα2ρ(1-ρ)/δ2。根據(jù)病史、心電圖改變和冠狀動脈造影術(shù)結(jié)果等將入選人群分為對照組或ACS組。對照組樣本量由特異性估計，ACS組樣本量由敏感性估計。最終入選的830例患者為2012年1月至2014年4月在西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院心內(nèi)科因胸痛等原因診治的中國漢族人。其中對照組有380人，男性226人，女性154人，年齡25～75歲，平均年齡(57.49±10.50)歲，被診斷為神經(jīng)官能癥、更年期綜合征和反流性食管炎。ACS組450人，男性325人，女性125人，年齡26～81歲，平均年齡(59.30±11.61)歲。入院時即測量體質(zhì)量(千克)和身高(米)并根據(jù)公式計算身體質(zhì)量指數(shù)(BMI)。具有下列任一項即從本研究中排除：急、慢性感染性疾病，嚴(yán)重的肝臟或腎臟疾病，急性或慢性心臟衰竭，惡性腫瘤，急性中風(fēng)，甲狀腺功能低下或慢性消耗性疾病。

1.2 冠狀動脈造影術(shù)及ACS的判定

冠狀動脈造影采用Judkins技術(shù)進(jìn)行。根據(jù)冠狀動脈造影顯示超過一個主要冠狀動脈≥50%管腔狹窄來確定為冠心病，無任何冠狀動脈狹窄超過50%則可排除冠心病，納入對照組。狹窄冠狀動脈數(shù)量和狹窄程度通過Gensini積分反映[7]。由不知曉研究設(shè)計的兩位心臟病專家判讀冠狀動脈造影的結(jié)果。兩位專家的統(tǒng)一意見用于確定冠狀動脈狹窄分級。ACS定義為發(fā)生冠心病患者心絞痛發(fā)作頻率、程度、持續(xù)時間、緩解方式惡化或冠心病患者確診發(fā)生急性心肌梗死[1]。

1.3 血標(biāo)本采集及血清生化指標(biāo)、IL-1β濃度的測定

抽取入選人群肘靜脈空腹血10 mL至含有EDTA抗凝的試管中，以3 000 r/min離心血標(biāo)本10 min，將分離的血清和白細(xì)胞分別儲存于-80 ℃。血清超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)、空腹血糖(FBS)、總膽固醇(TC)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)和甘油三酯(TG)均在西安交通大學(xué)第一附屬醫(yī)院實驗室測定。低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)用Friedewald公式計算獲得。血清IL-1β濃度通過ELISA試劑盒(R&D Systems, Minneapolis, MN, USA)測定獲得。

1.4 DNA提取及基因分型

1.4.1 DNA提取 使用全血基因組提取試劑盒(離心柱型，型號DP318-03，天根生化科技，北京，中國)，根據(jù)制造商提供的說明書在常溫下從白細(xì)胞中提取基因組DNA。

1.4.2 基因分型 使用ABI Snapshot方法(Applied Biosystems, 美國)進(jìn)行基因分型。

人們常說，一個謊言要用一百個謊言來彌補(bǔ)、掩蓋。而這一百個用來“論證”前一個謊言的謊言，又將出現(xiàn)多少漏洞？又將拉動多少個新的謊言的產(chǎn)生？這是一個連鎖反應(yīng)，讓你沒完沒了地應(yīng)付。處于這種生活狀態(tài)的人，能不累嗎？哪天撐不住時，說不定就崩潰了。由此，我們不禁對A君心生同情，真希望他能夠換一種輕松點的生活方式。

①PCR擴(kuò)增及產(chǎn)物的純化。引物由Invitrogen公司設(shè)計并合成。NLRP3 rs10754558位點多態(tài)性引物序列為：正向引物為5′-CCTGAGCTGACCGTCGTCTT-3′；反向引物為5′-ATGAGGTCACCAAGAGGAACATC-3′；SNaPshot引物序列為ttttttttttttttttttttttttttttttACAGCATCGGGTGTT-GTT；CARD8 rs20432111位點多態(tài)性引物序列為：正向引物為5′-ATTGAGACACAGCGTCCAATAG-3′；反向引物為5′-ATGCTATCATCAGGCACCTACC-3′；SNaPshot引物序列為ttttttttttttttttttt-tttttACTCAGGAACAGCACGGA。體系為25 μL，包括10×PCR緩沖液2.5 μL，MgCl2(50 mmol/L)0.8 μL，dNTP(10 mmol/L)0.5 μL，PCR上、下游引物各0.5 μL，DNA模板1 μL，DNA聚合酶0.5 μL，超純水19 μL。PCR擴(kuò)增程序為：95 ℃變性5 min，95 ℃變性30 s，56 ℃退火30 s，72 ℃延伸30 s，共33個循環(huán)，最后72 ℃延伸5 min；持續(xù)4 ℃。15 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測，電泳條帶清晰，大小正確。用蝦堿酶法純化PCR產(chǎn)物，配制試劑組分及用量如下：在2 μL PCR產(chǎn)物中加入蝦堿酶(1 U/μL)0.3 μL、外切酶(20 U/μL)0.2 μL和超純水7.5 μL，震蕩混勻，37 ℃保溫1 h 30 min，75 ℃保溫15 min滅活蝦堿酶和外切酶，4 ℃保存24 h。

②SNaPshot反應(yīng)。延伸反應(yīng)包括SNaPshot Multiplex Kit(Applied Biosystems，美國)1.5 μL、純化后PCR 1 μL、延伸引物混合物0.5 μL，延伸反應(yīng)程序為：96 ℃ 10 s，51 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，共25個循環(huán)，持續(xù)4 ℃。延伸產(chǎn)物的純化為延伸產(chǎn)物3 μL加入蝦堿酶0.3 μL及超純水1.7 μL震蕩混勻，37 ℃保溫1 h，75 ℃保溫15 min滅活蝦堿酶，4 ℃保存24 h。96孔板中加入1 μL上述純化延伸產(chǎn)物，與GenescanTM-120LIZ Size Standard 0.2 μL(Applied Biosystems, 美國)和去離子甲酰胺8.8 μL混合均勻后，95 ℃變性5 min，直接進(jìn)行ABI PRISM 3730 DNA 測序儀(Applied Biosystems, 美國)掃板。結(jié)果用GeneMapper3.0軟件(Applied Biosystems)進(jìn)行分析。為確定Snapshot的結(jié)果，隨機(jī)選擇40個樣本并且通過使用BigDye終止儀(Applied Biosystem)直接測序再基因分型。所有測定100%一致。

1.5 統(tǒng)計學(xué)分析

分類變量以N(%)表示，連續(xù)變量以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示。所有組的分類變量數(shù)據(jù)比較采用χ2檢驗分析，連續(xù)變量比較采用t檢驗分析。使用多因素Logistic回歸計算比值比(Odds Ratio,OR)和95%置信區(qū)間(95%CI)計算不同的基因型的ACS的相對風(fēng)險。所有的計算用SPSS17.0軟件進(jìn)行。使用雙尾檢驗P<0.05認(rèn)為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 入選人群的臨床特征

兩組左室射血分?jǐn)?shù)、空腹血糖水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義；在ACS組冠心病危險因素如男性、高齡、吸煙、糖尿病和高血壓比例顯著高于對照組。與對照組相比，ACS組的血清HS-CRP和總膽固醇顯著升高，但HDL-C水平較低(表1)。

表1 對照組和ACS組的基線資料

Tab.1 Baseline characteristics of the controls and ACS subjects

組別對照組(n=380)ACS組(n=450)χ2tP男性[n(%)]226(59.47)325(72.22)15.01 -<0.001年齡(歲)57.49±10.5059.30±11.61 --2.340.020高血壓[n(%)]183(48.16)263(58.44)8.77 -0.003糖尿病[n(%)]64(16.84)119(26.44)11.05 -0.001吸煙[n(%)]137(36.05)219(48.67)13.38 -<0.001BMI(kg/m2)24.01±2.8024.33±1.91--1.980.055LVEF(%)58.77±10.1957.65±12.12- 1.420.150Hs-CRP(mg/L)2.71±0.983.19±1.51--5.36<0.001FBS(mmol/L)5.75±1.395.92±1.35--1.810.070TC(mmol/L)3.63±0.913.75±0.72--2.200.028TG(mmol/L)1.47±0.691.55±0.52--1.940.053HDL-C(mmol/L)0.99±0.240.95±0.22- 2.280.023LDL-C(mmol/L)2.13±0.772.21±0.60--1.780.081

ACS：急性冠脈綜合征；BMI：體質(zhì)量指數(shù)；LVEF：左室射血分?jǐn)?shù)；Hs-CRP：超敏C反應(yīng)蛋白；FBS：空腹血糖；TC：總膽固醇；TG：甘油三酯；HDL-C：高密度脂蛋白膽固醇；LDL-C：低密度脂蛋白膽固醇。

2.2 對照組、ACS組NLRP3 rs10754558位點和CARD8 rs2043211位點基因型分布及與ACS發(fā)病的關(guān)系

χ2檢驗證實，對照組NLRP3rs10754558位點和CARD8rs2043211位點基因型頻率符合Hardy-Weinberg遺傳平衡定律。NLRP3rs10754558位點對照組和ACS組之間各基因型頻率比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=7.64，P=0.022)，而CARD8 rs2043211位點兩組間各基因型頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=1.08，P=0.582)。在校正了年齡、性別、高血壓、糖尿病、吸煙、Hs-CRP、TC和HDL-C后，ACS患者和對照組人群NLRP3 rs10754558位點的基因型分布顯著不同(GG對CC：AOR 1.749，95%CI1.136～2.691；CC對CG+GG：AOR 1.577，95%CI1.146～2.170；CC+CG對GG：AOR 1.374，95%CI0.939～2.012；G等位基因?qū)等位基因：AOR 1.334，95%CI1.085～1.642)。而CARD8 rs20432111位點在對照組和ACS組之間分布頻率比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(表2)。

表2 對照組和ACS組NLRP3 rs10754558位點和CARD8 rs2043211位點基因頻率的比較

Tab.2 Genotype frequencies of NLRP3 rs10754558 and CARD8 rs2043211 SNPs in the controls and ACS subjects

基因頻率對照組(n=380)ACS組(n=450)AOR(95%CI)PNLRP3rs10754558 CC130(34.21%)131(29.11%)1.000(參考) CG191(50.26%)216(48.00%)1.511(1.075～2.123)0.018 GG59(15.53%)103(22.89%)1.749(1.136～2.691)0.011 顯性模型(CCvs.CG+GG)1.577(1.146～2.170)0.005 隱性模型(CC+CGvs.GG)1.374(0.939～2.012)0.102 C等位基因456(59.34%)488(53.11%)1.000(參考) G等位基因304(40.66%)412(46.89%)1.334(1.085～1.642)0.006 HWEχ20.660.59 HWEP0.420.44CARD8rs2043211 AA158(41.58%)183(40.67%)1.000(參考) AT185(48.68%)213(47.33%)1.258(0.919～1.722)0.152 TT37(9.74%)54(12.00%)1.320(0.798～2.185)0.279 顯性模型(AAvs.AT+TT)1.270(0.941～1.713)0.118 隱性模型(AA+ATvs.TT)1.170(0.728～1.880)0.517 A等位基因509(65.92%)579(64.33%)1.000(參考) T等位基因251(34.08%)321(35.67%)1.168(0.942～1.449)0.156 HWEχ22.650.44 HWEP0.100.50

ACS：急性冠脈綜合征；AOR：校正的比值比；HWE：Hardy-Weinberg平衡定律；95%CI：95%可信區(qū)間。

Gensini評分系統(tǒng)是基于冠狀動脈造影結(jié)果廣泛使用的反應(yīng)冠狀動脈粥樣硬化嚴(yán)重程度的測定方法。NLRP3 rs10754558位點，131個樣本為CC基因型，216個樣品為CG基因型，103個樣品為GG基因型。CC基因型平均Gensini積分為42.91±1.80，CG基因型平均Gensini積分為59.90±1.64，GG基因型平均Gensini積分為74.07±2.13(圖1A)。CARD8 rs2043211位點，數(shù)據(jù)中183樣本為AA基因型，213樣本為AT基因型，54個樣品為TT基因型。AA基因型平均Gensini積分為58.27±1.98，AT基因型平均Gensini積分為60.10±1.77，TT基因型平均Gensini積分為57.97±3.07(圖1B)。圖1A所示，GG基因型的Gensini評分明顯高于CC基因型和CG基因型Gensini評分(P<0.001)，CG基因型Gensini評分亦顯著高于CC基因型(P<0.001)。而CARD8 rs20432111位點各基因型之間沒有顯著差異。說明攜帶NLRP3 rs10754558位點G等位基因患者冠狀動脈狹窄程度更重。

2.4 NLRP3 rs10754558位點多態(tài)性與血清IL-1β水平的關(guān)系

為進(jìn)一步明確NLRP3 rs10754558位點多態(tài)性影響ACS發(fā)病的病理機(jī)制，通過Elisa方法測定了111位對照組入選者及148位ACS患者血清IL-1β濃度。結(jié)果顯示，ACS組IL-1β濃度明顯高于對照組[(2.18±1.92)pg/mLvs.(1.67±1.32)pg/mL，P=0.017，圖2A]。在對照組中GG基因型(n=27)IL-1β濃度顯著高于CC基因型(n=28)濃度[(2.33±1.42)pg/mLvs. (0.74±0.49)pg/mL，P<0.001，圖2B]。在ACS組中GG基因型(n=37)IL-1β濃度顯著高于CC基因型(n=39)IL-1β濃度[(3.21±2.68)pg/mLvs. (1.37±1.36)pg/mL，P<0.001，圖2C]。

圖1 急性冠脈綜合征組不同基因型冠狀動脈狹窄Gensini評分

Fig.1 The Gensini scores in ACS patients with different genotypes
A：NLRP3 rs10754558位點不同基因型Gensini評分；B：CARD8 rs20432111位點不同基因型Gensini評分。***P<0.001；NSP>0.05。

圖2 不同人群血IL-1β濃度的比較

Fig.2 Comparison of the serum levels of IL-1β (pg/mL) in different groups
A：ACS組和對照組IL-1β濃度；B：對照組NLRP3 rs10754558位點不同基因型IL-1β濃度；C：ACS組NLRP3 rs10754558位點CC、CG、GG基因型IL-1β濃度。ACS：急性冠脈綜合征；***P<0.001，*P<0.05。

3 討 論

本研究的目的是確定中國人群NLRP3和CARD8基因多態(tài)性與ACS發(fā)病關(guān)系。據(jù)我們所知，這是首次關(guān)于NLRP3和CARD8多態(tài)性與中國人ACS發(fā)病風(fēng)險之間關(guān)系的研究。本研究結(jié)果表明，NLRP3 rs10754558位點基因多態(tài)性與ACS發(fā)病有明顯的相關(guān)性。攜帶NLRP3 rs10754558位點的G等位基因的人群比未攜帶G等位基因人群有更高的患ACS的風(fēng)險(AOR：1.085～1.642)；進(jìn)一步對冠狀動脈病變嚴(yán)重程度分析顯示，攜帶NLRP3 rs10754558位點的G等位基因的人群比未攜帶G等位基因人群冠狀動脈病變狹窄程度更重。同時，攜帶NLRP3 rs10754558位點的G等位基因人群血清中IL-1β濃度更高。我們研究結(jié)果也顯示，CARD8 rs10754558位點基因多態(tài)性與ACS發(fā)病無關(guān)。

AS及其形成的斑塊活動是ACS的基本病理學(xué)特征，炎癥反應(yīng)在AS的進(jìn)展中起重要作用。促炎細(xì)胞因子，如IL-1β，參與了AS相關(guān)炎癥反應(yīng)。炎癥小體可以促使許多炎癥介質(zhì)產(chǎn)生并激活，從而參與到血管壁的慢性炎癥反應(yīng)中[8-9]。活化的NLRP3炎癥小體包括NLRP3、CARD8、Caspase-1和凋亡相關(guān)微粒蛋白(ASC)適配器，炎癥小體的活化是AS相關(guān)的炎癥進(jìn)程中重要一步[9-10]。NLRP3控制了NLRP3炎癥小體形成復(fù)合體的組裝，使其成為Caspase-1激活的平臺從而使IL-1β生成[8]。臨床研究已經(jīng)證實，人外周血單個核細(xì)胞NLRP3的mRNA水平與血清中IL-1β濃度呈正相關(guān)，而IL-1β參與了AS進(jìn)程[11]。敲除NLRP3可明顯降低IL-1β的產(chǎn)生[12]。因此，NLRP3在加速AS進(jìn)程并導(dǎo)致斑塊活動、促使ACS發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用。

許多研究表明，NLRP3 rs10754558位點多態(tài)性與炎性疾病發(fā)病有關(guān)[5-6]。在本研究中，我們分析了NLRP3 rs10754558位點多態(tài)性和ACS之間的關(guān)系。對照組和ACS組基因型和臨床數(shù)據(jù)的比較表明，ACS組G等位基因頻率高于對照組人群。ACS組男性、高齡、吸煙、糖尿病和高血壓比例顯著高于對照組，同時Hs-CRP、TC較高而HDL-C低，雖然這些因素作為冠心病危險因素可能影響ACS發(fā)病，但統(tǒng)計學(xué)分析經(jīng)校正這些因素后，NLRP3 rs10754558位點為GG基因型人群仍更易患ACS，GG基因型增加了ACS的發(fā)病風(fēng)險，AOR為1.749(95%CI為1.136～2.691)，G等位基因?qū)等位基因OR值是1.334(95%CI：1.085～1.642)。對所有ACS患者冠狀動脈造影結(jié)果評價表明，攜帶NLRP3 rs10754558位點的G等位基因的人群比未攜帶G等位基因人群冠狀動脈病變狹窄程度更重。這些結(jié)果表明，NLRP3 rs10754558位點的G等位基因與中國漢族人群ACS發(fā)病相關(guān)。Elisa結(jié)果提示，攜帶NLRP3 rs10754558位點的G等位基因人群血清中IL-1β濃度更高。由此我們推斷，NLRP3 rs10754558位點G等位基因可能通過對NLRP3功能影響使IL-1β產(chǎn)生增多，從而參與到AS進(jìn)展及活動，導(dǎo)致ACS發(fā)生。

人類NLRP3 rs10754558位點的可通過改變NLRP3 mRNA穩(wěn)定性影響NLRP3 mRNA的表達(dá)。rs10754558多態(tài)性位點的G等位基因可提高NLRP3 mRNA的的穩(wěn)定性，進(jìn)一步研究表明包含rs10754558位點G等位基因的等位基因特異性構(gòu)建體比含rs10754558的C等位基因的構(gòu)建體活性高1.3倍[6]。NLRP3 rs10754558位點的基因影響炎癥小體的激活，因此改變了不同基因型人群ACS發(fā)病狀況。據(jù)我們所知，還沒有研究證明NLRP3 rs10754558多態(tài)性在中國ACS患者中的作用。我們的研究結(jié)果表明，rs10754558多態(tài)性與ACS易感性有關(guān)，而G等位基因攜帶者易于發(fā)生ACS。

已證明CARD8與多種炎癥疾病相關(guān)聯(lián)[5]。以前的研究報道與來自移植供體的對照組織相比，在人類AS斑塊中CARD8的mRNA顯著增高，增加的CARD8表達(dá)與AS性疾病過程相關(guān)[13]。然而，敲除CARD8并不影響IL-1β和IL-Ra mRNA的表達(dá)[11]。進(jìn)一步研究證明，CARD8 rs20432111位點多態(tài)性和IL-1β、TNF或IL-18的mRNA表達(dá)水平之間無關(guān)[13]。以前有關(guān)CARD8 rs20432111的多態(tài)性和慢性炎性疾病之間的關(guān)系的研究存在爭議。CARD8 rs20432111位點的T等位基因在強(qiáng)制性脊柱炎中發(fā)揮潛在的保護(hù)作用[14]。另一方面，rs20432111T等位基因與炎性腸病的發(fā)病風(fēng)險增加有關(guān)[15]。我們的觀察結(jié)果顯示，CARD8 rs20432111位點多態(tài)性和ACS發(fā)病之間沒有關(guān)聯(lián)性。這與以前已經(jīng)提示的rs20432111多態(tài)性與心血管風(fēng)險之間沒有找到相關(guān)性的研究結(jié)果相一致[13-16]。

盡管我們努力全面分析，證明NLRP3 rs10754558位點多態(tài)性與ACS之間的關(guān)系，但本研究存在一些不足：第一，本研究是單中心研究；第二，本研究入選人群均為中國漢族。因此，后續(xù)多中心、多種族、更詳細(xì)的研究可更深入評估NLRP3 rs10754558和CARD8 rs20432111位點多態(tài)性對ACS的影響。

總之，本研究表明，在中國漢族人群中NLRP3 rs10754558基因多態(tài)性與ACS發(fā)病相關(guān)聯(lián)；在中國人群中NLRP3 rs10754558的G等位基因加重冠狀動脈狹窄程度；G等位基因這一作用可能與促進(jìn)IL-1β產(chǎn)生有關(guān)。

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(編輯 卓選鵬)

Association of NLRP3 rs10754558 and CARD8 rs2043211 polymorphisms with the occurrence of acute coronary syndrome

ZHOU Dong, WANG Xin-hong, ZHOU Juan, FAN Yan, WAN Zhao-fei, LIU Yang, YUAN Zu-yi

(Department of Cardiovascular Medicine, the First Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710061, China)

Objective To investigate the potential association of the Nodlike receptor protein 3 (NLRP3) rs10754558 and caspase recruitment domain-containing protein 8 (CARD8) rs2043211 SNPs with the occurrence of acute coronary syndrome (ACS). Methods The NLRP3 rs10754558 and CARD8 rs2043211 SNPs were analyzed using the ABI PRISM-Snapshot multiplex method in 450 Chinese Han patients with ACS and 380 controls in the case-control study. Coronary angiography was performed to evaluate the severity of coronary atherosclerosis by Gensini score. The content of IL-1β in serum was determined by ELISA. Results The difference in rs10754558 allele frequency between the control group and the ACS group was significant (χ2= 7.64,P=0.022). The NLRP3 rs10754558 G allele was significantly associated with the occurrence of ACS (AOR=1.334, 95%CI=1.085-1.642,P=0.006), while CARD8 rs2043211 polymorphism was not involved (χ2=1.08,P=0.582). Patients with GG genotype of NLRP3 rs10754558 had a higher Gensini score than those with CC genotype (74.07±2.13vs. 42.91±1.80,P<0.001). There was no significant difference in Gensini score among ACS patients with different genotypes of CARD8 rs2043211. In the ACS group, the level of IL-1β in patients with GG genotype of NLRP3 rs10754558 was significantly higher than those patients with CC genotype (3.21±2.68vs. 1.37±1.36 pg/mL,P<0.001). Conclusion The NLRP3 rs10754558 polymorphism is involved in the occurrence of ACS and the severity of coronary atherosclerosis in the Chinese Han population. G allele is the risk allele of ACS. The role of G allele may be associated with elevated level of IL-1β.

coronary artery disease; Nodlike receptor protein 3 (NLRP3); caspase recruitment domain-containing protein 8 (CARD8); polymorphism; risk factor

2015-03-22

2015-05-07

國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81025002) Supported by the National Natural Science Foundation of China(No.81025002)

袁祖貽. E-mail：zuyiyuan@mail.xjtu.edu.cn.

R541.4

A

10.7652/jdyxb201601013

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20151209.1716.022.html(2015-12-09)