李 晶，羅妙莎，秦 斌，王 琰，董 蕾

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西西安 710004)

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阿托伐他汀對胰腺癌細(xì)胞PANC-1增殖、侵襲能力的影響及機(jī)制

李 晶，羅妙莎，秦 斌，王 琰，董 蕾

(西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院消化內(nèi)科，陜西西安 710004)

目的 研究阿托伐他汀體外對胰腺癌細(xì)胞株P(guān)ANC-1的影響及其機(jī)制。方法 不同濃度阿托伐他汀干預(yù)胰腺癌PANC-1細(xì)胞后，MTT法檢測細(xì)胞的增殖、黏附作用，Transwell小室測定胰腺癌細(xì)胞的侵襲能力；RT-PCR方法測定MMP-2和VEGF的mRNA表達(dá)變化；Western blot方法檢測ERK1/2的蛋白表達(dá)水平。結(jié)果 不同濃度阿托伐他汀干預(yù)胰腺癌PANC-1細(xì)胞后，細(xì)胞的增殖能力降低，并呈劑量時間依賴性。此外，阿托伐他汀可以抑制PANC-1細(xì)胞的黏附、侵襲能力，檢測加藥后PANC-1細(xì)胞內(nèi)MMP-2、VEGF mRNA的相對表達(dá)量降低，與陰性對照組相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001 3，P=0.007)，ERK1/2蛋白的相對表達(dá)量降低(P=0.001 5)。結(jié)論 在體外細(xì)胞培養(yǎng)實驗中，阿托伐他汀能顯著抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲能力，其機(jī)制可能是通過調(diào)控MAPK/ERK1/2通路減少MMP-2及VEGF的表達(dá)而實現(xiàn)。

阿托伐他汀；胰腺癌；侵襲

胰腺癌是消化系統(tǒng)惡性程度最高的腫瘤之一，它具有發(fā)病隱匿、病程短、進(jìn)展快、病死率高的特點，預(yù)后極差。因此，新的治療研究方向?qū)τ谝认侔┑闹委熂邦A(yù)后顯得尤為重要。他汀類(statins)藥物是20世紀(jì)80年代后期開發(fā)的羥甲戊二酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶抑制劑，通過抑制羥甲基戊二酸單酰輔酶A(HMG-CoA)還原酶作用而影響細(xì)胞內(nèi)許多重要生物學(xué)功能如：細(xì)胞膜構(gòu)成、糖蛋白合成、細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細(xì)胞周期進(jìn)展等[1]。本研究通過MTT方法檢測阿托伐他汀在胰腺癌細(xì)胞增殖及黏附中的作用，采用Transwell小室檢測阿托伐他汀對胰腺癌細(xì)胞侵襲能力的影響，并采用Western blot和RT-RCR的方法探討其可能機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

人胰腺癌細(xì)胞PANC-1購于美國ATCC；阿托伐他汀(ATV，南京德寶生化器材有限公司)；吉西他濱(GEM，美國禮來公司)；DMEM(高糖型，美國Hyclone公司)；新生胎牛血清(杭州四季青生物技術(shù)公司)；四甲基偶氮唑鹽(MTT，美國Sigma公司)；二甲基亞砜(DMSO，美國Sigma公司)；Metrigel(美國BD公司)；總RNA快速提取試劑盒(Fastgen200，西安沃爾森技術(shù)有限公司)；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒(美國Fermentas公司)；ERK1/2抗體購自美國CST公司。

1.2 方法

1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng) 人胰腺癌細(xì)胞PANC-1培養(yǎng)于含100 mL/L胎牛血清、100 U/mL 青霉素和100 mg/L鏈霉素的DMEM高糖培養(yǎng)液中，置于含50 mL/L CO2的37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，2～3 d換液，細(xì)胞單層貼壁生長，至70%～80%融合時用胰蛋白酶消化傳代使用。

1.2.2 MTT法檢測細(xì)胞增殖 收集處于對數(shù)生長期的PANC-1細(xì)胞，以每孔5×103個細(xì)胞接種到96孔板，細(xì)胞貼壁后，加入不同濃度(100、10、1、0.1 μmol/L) 的阿托伐他汀分別培養(yǎng)12、24、48 h，對照組不加藥，加入含等量DMSO的DMEM培養(yǎng)液。每個濃度設(shè)6個復(fù)孔，培養(yǎng)完畢后每孔加入MTT(5 mg/L)20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄去上清液，每孔加入DMSO 150 μL終止反應(yīng)，以空白組調(diào)零，于波長490 nm處測定各孔吸光度值(A)，實驗重復(fù)3次。

1.2.3 細(xì)胞黏附實驗 本實驗采用無血清DMEM以1∶8稀釋Metrigel基質(zhì)膠，100 μL/孔加入96孔板包被基底膜，4 ℃過夜，過夜后吸出培養(yǎng)板內(nèi)多余液體，每孔加入50 μL無血清冷DMEM，室溫放置30 min，使基底膜水化。以不同濃度阿托伐他汀100、10、1、0 μmol/L，以及吉西他濱20 μmol/L干預(yù)PANC-1細(xì)胞24 h后，胰酶消化收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度，以每孔5×103個細(xì)胞接種到水化基底膜后的96孔板，培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)3 h后取出，用PBS溶液沖洗兩遍，每孔加入MTT(5 mg/L)20 μL，繼續(xù)培養(yǎng)4 h后棄去上清液，最后每孔加入DMSO 150 μL終止反應(yīng)，以空白組調(diào)零，于波長490 nm處測定各孔吸光度值(A)，實驗重復(fù)3次。

1.2.4 細(xì)胞侵襲實驗 用100 μL稀釋至5 mg/mL的Matrigel基質(zhì)膠鋪于24孔Transwell小室的上室中，重建基底膜。100、10、0 μmol/L阿托伐他汀及20 μmol/L吉西他濱干預(yù)PANC-1細(xì)胞24 h后收集，調(diào)整細(xì)胞密度為5×103/mL。Transwell小室上室每孔加入200 μL細(xì)胞懸液，下室中加入600 μL含100 mL/L FBS的DMEM培養(yǎng)液。培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24 h，用結(jié)晶紫染色，倒置顯微鏡觀察并計數(shù)。取5個視野(上、中、下、左、右)，照相，計數(shù)取平均值。

1.2.5 RT-PCR檢測MMP-2及VEGF基因的表達(dá) 阿托伐他汀10 μmol/L及吉西他濱20 μmol/L作用PANC-1細(xì)胞24 h后收集，試劑盒提取細(xì)胞的總RNA，按照操作說明應(yīng)用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒合成cDNA，以β-actin作為內(nèi)參，Geneamp9600型PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增，β-actin引物上游序列為5′-ATCGTGCGTGACATTAAGGAGAAG-3′，下游序列為5′-AGGAAG-GAAGGCTGGAAGAGTG-3′，目的產(chǎn)物長度為179 bp；VEGF引物上游序列為5′-CGGCGAAGAGAAGA-GACACATTG-3′，下游序列為5′-CGGGAAGGGAAGGGAAGGAC-3′，目的產(chǎn)物長度224 bp；MMP-2引物上游5′-TTGGTGGGAACTCAGAA-GG-3′，下游5′-CTTGCGGTCATCATCGTA-3′，目的產(chǎn)物長度140 bp。MMP-2與β-actin反應(yīng)條件為：94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性60 s，退火54 ℃ 45 s，72 ℃延伸60 s，共30個循環(huán)；VEGF反應(yīng)條件為94 ℃預(yù)變性2 min，94 ℃變性60 s，退火60 ℃ 45 s，72 ℃延伸60 s，共30個循環(huán)。PCR產(chǎn)物于10 g/L瓊脂糖凝膠電泳檢測，MMP-2和VEGF的基因表達(dá)水平以目的基因與內(nèi)參β-actin吸光度的比值表示，并進(jìn)行校正。

1.2.6 Western blot蛋白印跡分析 阿托伐他汀10 μmol/L及吉西他濱20 μmol/L干預(yù)PANC-1細(xì)胞24 h后收集，裂解細(xì)胞提取總蛋白，用BCA法測定總蛋白濃度，分別取等量蛋白加上樣緩沖液于沸水中煮5 min，以100 mL/L SDS聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳分離，電泳完畢后將凝膠上的蛋白經(jīng)濕轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜儀以恒壓100 V轉(zhuǎn)至PVDF膜上，用含50 g/L脫脂奶粉的TBST溶液(137 mmol/L NaCl，2.7 mmol/L KCl，25 mmol/L Tris，1 mL/L Tween20，pH 7.4)封閉1～2 h，分別加入ERK1/2抗體及β-actin抗體，室溫孵育2～3 h或4 ℃孵育過夜，TBST洗膜后再用辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗室溫孵育2 h，TBST洗膜后ECL化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)顯色，以β-actin蛋白水平作為內(nèi)對照，最后對結(jié)果利用Image J測量灰度值進(jìn)行分析。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié) 果

2.1 阿托伐他汀對胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖能力具有抑制作用

我們首先觀察阿托伐他汀對人胰腺癌細(xì)胞PANC-1增殖能力的影響，以不同濃度阿托伐他汀作用于PANC-1細(xì)胞，在不同孵育時間點收集細(xì)胞，采用MTT法檢測阿托伐他汀對胰腺癌細(xì)胞增殖能力的影響(圖1)。阿托伐他汀誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞死亡呈劑量和時間依賴性關(guān)系，在48 h時間點不同濃度之間進(jìn)行t檢驗分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。

圖1 MTT法檢測ATV對胰腺癌PANC-1細(xì)胞增殖的影響

Fig.1 The effect of ATV on the proliferation of PANC-1 cells determined by MTT assay

2.2 阿托伐他汀對胰腺癌細(xì)胞與基底膜的黏附能力的影響

腫瘤細(xì)胞與基底膜的黏附性與腫瘤的侵襲

及遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。本研究采用不同濃度阿托伐他汀干預(yù)后收集細(xì)胞，接種于含Matrigel的96孔板，MTT法檢測黏附于基底膜上細(xì)胞的吸光度(圖2)。與對照組相比，ATV干預(yù)組黏附于基底膜上的細(xì)胞減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，ATV不同濃度組之間進(jìn)行t檢驗分析，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。提示阿托伐他汀可以抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞與基底膜的黏附能力，并呈劑量依賴性。

圖2 ATV對PANC-1細(xì)胞黏附能力的影響

Fig.2 The effect of ATV on the adhesion ability of PANC-1 cells
與對照組比較，*P<0.05，與對照組比較，**P<0.01。

2.3 阿托伐他汀可以抑制PANC-1細(xì)胞的侵襲能力

本實驗采用Matrigel重建基底膜的Transwell小室檢測PANC-1細(xì)胞的侵襲能力(圖3)。不同濃度阿托伐他汀干預(yù)后，細(xì)胞的侵襲能力降低，與對照組相比，ATV干預(yù)后PANC-1細(xì)胞水解Matrigel穿過基底膜的數(shù)量明顯減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001 3，0.000 3)，提示阿托伐他汀可以抑制PANC-1細(xì)胞水解細(xì)胞外基質(zhì)，運動穿過基底膜至下室的能力，兩組不同濃度ATV干預(yù)結(jié)果之間進(jìn)行t檢驗分析，隨劑量增加，侵襲抑制效應(yīng)增強(qiáng)(P=0.043，圖4)。

圖3 穿過基底膜到達(dá)下室的細(xì)胞

Fig.3 The pictures of cells that crossed the basement membrane (×100)
A：對照組；B：ATV 10 μmol/L；C：ATV 100 μmol/L；D：GEM 20 μmol/L。

圖4 ATV干預(yù)可抑制PANC-1細(xì)胞的侵襲能力

Fig.4 The effect of ATV in inhibiting the invasion capability of PANC-1 cells
與陰性對照組比較，**P<0.01。

2.4 阿托伐他汀可以抑制PANC-1細(xì)胞MMP-2及VEGF mRNA的表達(dá)

通過前面的實驗可以看出，阿托伐他汀可以抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲能力。本實驗進(jìn)一步研究這些現(xiàn)象發(fā)生的分子機(jī)制，采用熒光定量PCR方法檢測ATV干預(yù)后細(xì)胞內(nèi)MMP-2及VEGF mRNA的表達(dá)(圖5、圖6)：與對照組相比，ATV干預(yù)后，MMP-2及VEGF mRNA的表達(dá)均降低(P=0.001 3，0.007)，MMP-2與VEGF的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞侵襲與轉(zhuǎn)移的發(fā)生密切相關(guān)，提示阿托伐他汀可能通過調(diào)控MMP-2及VEGF的表達(dá)而抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的侵襲及轉(zhuǎn)移能力。

2.5 阿托伐他汀干預(yù)后PANC-1細(xì)胞內(nèi)ERK1/2蛋白的表達(dá)降低

ERK1/2蛋白是MAPK信號通路的重要轉(zhuǎn)導(dǎo)因子之一，它的激活與細(xì)胞的增殖、分化密切相關(guān)。本實驗采用Western blot方法檢測ATV干預(yù)后胰腺癌PANC-1細(xì)胞ERK1/2蛋白的表達(dá)(圖7)。與對照組相比，阿托伐他汀干預(yù)后ERK1/2蛋白的表達(dá)明顯降低，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001 5)，提示阿托伐他汀可以抑制PANC-1細(xì)胞ERK1/2蛋白的表達(dá)，ATV可能具有抑制MAPK/ERK1/2通路的作用，這可能與本實驗中ATV干預(yù)后PANC-1細(xì)胞的黏附、侵襲能力降低有關(guān)。

圖5 RT-PCR檢測PANC-1細(xì)胞MMP-2及VEGF mRNA的表達(dá)

Fig.5 MMP-2 and VEGF mRNA expressions of PANC-1 cells detected by RT-PCR assay
A：MMP-2 mRNA的表達(dá)；B：VEGF mRNA的表達(dá)；C：內(nèi)參β-actin；1：對照組；2：GEM 20 μmol/L；3：ATV 10 μmol/L。

圖6 胰腺癌PANC-1細(xì)胞MMP-2及VEGF mRNA相對表達(dá)的比較

Fig.6 Relative expressions of MMP-2 and VEGF mRNA of PANC-1 cells
A：MMP-2 mRNA相對表達(dá)量；B：VEGF mRNA相對表達(dá)量；與陰性對照組比較，**P<0.01。

圖7 胰腺癌PANC-1細(xì)胞ERK1/2蛋白相對表達(dá)量的比較

Fig.7 Comparison of the expression of ERK1/2 protein of PANC-1 cells
1：對照組；2：GEM 20 μmol/L；3：ATV 10 μmol/L；與陰性對照組比較，**P<0.01。

3 討 論

胰腺癌是消化系統(tǒng)常見惡性腫瘤，是目前病死率最高的惡性腫瘤之一，腫瘤的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移是導(dǎo)致臨床上胰腺癌患者死亡的主要原因。近來研究表明，他汀類作為羥甲基戊二酸單酰輔酶抑制劑，對很多腫瘤細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)分化或凋亡、抑制血管生成的作用[2-3]。在胰腺癌動物實驗研究中，阿托伐他汀通過抑制Kras等蛋白的異戊烯化，抑制腫瘤的生長，增加存活率[4]。

本研究采用體外浸潤模型模擬腫瘤細(xì)胞對周圍相連組織的浸潤特性，實驗中鋪于Transwell上室的Matrigel基質(zhì)膠，其中含有LN、IV型膠原、接觸蛋白和肝素硫酸多糖，可以模擬細(xì)胞外基質(zhì)環(huán)境。細(xì)胞必須分泌水解酶，降解基質(zhì)成分，通過變形運動才能穿過，這與體內(nèi)侵襲遷移情況較為相似[5]，阿托伐他汀干預(yù)后，能夠水解細(xì)胞外基質(zhì)并穿過基底膜的細(xì)胞數(shù)量減少，提示PANC-1細(xì)胞降解細(xì)胞外基質(zhì)的侵襲能力明顯下降。此外，鋪有Matrigel的培養(yǎng)板可以檢測胰腺癌細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力，結(jié)果也顯示阿托伐他汀可以降低PANC-1細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)的黏附能力。本實驗?zāi)M腫瘤細(xì)胞轉(zhuǎn)移過程中的增殖、黏附及侵襲步驟，提示阿托伐他汀有可能控制胰腺癌腫瘤細(xì)胞的生長并減少侵襲及轉(zhuǎn)移的發(fā)生。

腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的發(fā)生包含多種分子機(jī)制，過程非常復(fù)雜，其中組織基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)可以通過蛋白分解途徑水解細(xì)胞外基質(zhì)及非蛋白分解途徑參與腫瘤的侵襲及轉(zhuǎn)移[6]，MMP-2是MMPs家族中的重要成員之一。有研究發(fā)現(xiàn)，MMP-2在臨床胰腺癌標(biāo)本中的表達(dá)率可達(dá)到93%，而它幾乎不表達(dá)于正常組織，胰腺癌組織中MMP-2的陽性表達(dá)率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和向周圍組織器官浸潤有關(guān)[7]，可見MMP-2對胰腺癌的發(fā)展具有重大影響，并與預(yù)后密切相關(guān)[8]。因此，MMPs的表達(dá)與腫瘤細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的發(fā)生密切相關(guān)。VEGF是目前所知主要的血管內(nèi)皮生長因子，在胰腺癌研究中發(fā)現(xiàn)VEGF表達(dá)與腫瘤微血管密度有關(guān)，VEGF高表達(dá)以及腫瘤新生血管豐富的患者預(yù)后不良[9]。本研究在mRNA水平上研究阿托伐他汀干預(yù)PANC-1細(xì)胞后細(xì)胞內(nèi)MMP-2及VEGF的變化，發(fā)現(xiàn)MMP-2與VEGF mRNA的表達(dá)降低，這恰好解釋了阿托伐他汀的侵襲抑制作用，而對于VEGF表達(dá)的抑制，我們推測其可能抑制腫瘤的血管生成能力。

MAPK信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路存在于大多數(shù)細(xì)胞內(nèi)，被認(rèn)為是許多信號通路的共同通路[10]。ERK1/2是MAPK信號通路的重要信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子之一。有研究表明，抑制MAPK/ERK1/2細(xì)胞信號通路能夠下調(diào)VEGF表達(dá)，進(jìn)而抑制腫瘤新生血管的生成及浸潤轉(zhuǎn)移能力[11]。在體外動物實驗中阿托伐他汀可以通過抑制ERK1/2的表達(dá)，抑制裸鼠胰腺癌移植瘤的生長[12]，而MMPs的表達(dá)也受到多種細(xì)胞因子及生長因子的調(diào)節(jié)，這些因子常常可以通過激活細(xì)胞內(nèi)的MAPK信號通路來發(fā)揮作用[13]。本實驗進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，阿托伐他汀干預(yù)后，PANC-1細(xì)胞內(nèi)ERK1/2蛋白的表達(dá)降低，提示阿托伐他汀可以通過調(diào)控MAPK/ERK1/2通路抑制胰腺癌細(xì)胞PANC-1的生長、黏附、侵襲能力。有研究表明，ERK可通過活化核轉(zhuǎn)錄因子AP-1[14]或Ets[15]調(diào)節(jié)MMP-9的表達(dá)，并通過刺激核轉(zhuǎn)錄因子AP-2蛋白的表達(dá)[16]或活化核轉(zhuǎn)錄因子Sp1[17]調(diào)節(jié)MMP-2的表達(dá)。因此，推測阿托伐他汀可能通過抑制MAPK/ERK1/2通路而減少MMPs及VEGF的表達(dá)。由于體外細(xì)胞實驗本身的局限性，也不排除其他信號傳導(dǎo)通路的參與，其他可能參與的信號傳導(dǎo)通路以及這些通路間是否相互影響仍有待探討。

總之，本實驗結(jié)果表明阿托伐他汀可以抑制胰腺癌PANC-1細(xì)胞的增殖、黏附、侵襲能力，其可能的機(jī)制是通過抑制MAPK/ERK1/2通路下調(diào)MMP-2及VEGF的表達(dá)，但具體機(jī)制尚需要進(jìn)一步研究。胰腺癌的侵襲轉(zhuǎn)移與預(yù)后密切相關(guān)，阿托伐他汀有可能成為抑制胰腺癌細(xì)胞侵襲、轉(zhuǎn)移的發(fā)生，改善預(yù)后的治療方案之一。

[1] AKIRA E. A historical perspective on the discovery of statins[J]. Proc Jpn Acad Ser B Phys Biol Sci, 2010, 86(5):484.

[2] HINDLER K, CLELAND CS, RIVERA E, et al. The role of statins in cancer therapy[J]. Oncologist, 2006, 11(3):306-315.

[3] SASSANO A, PLATANIAS L C. Statins in tumor suppression [J]. Cancer Lett, 2008, 260(1):11-19.

[4] LIAO J, CHUNG YT, YANG AL, et al. Atorvastatin inhibits pancreatic carcinogenesis and increases survival in LSL-KrasG12D-LSL-Trp53R172H-Pdx1-Cre mice[J]. Mol Carcinog, 2013, 52(9):739-750.

[5] TOLBOOM TC, HUIZINGA TW.Invitromatrigel fibroblast invasion assay[J]. Methods Mol Med, 2007, 135:413-421.

[6] KESSENBROCK K, PLAKS V, WERB Z. Matrix metalloproteinases: regulators of the tumor microenvironment[J]. Cell, 2010, 141(1):52-67.

[7] 李月光，馬波，李文林，等. 胰腺癌組織中胰腺星狀細(xì)胞的活化和基質(zhì)金屬蛋白酶-2的表達(dá)[J]. 鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2008, 43(1):134-136.

[8] SCHNEIDERHAN W, DIAZ F, FUNDEL M, et al. Pancreatic stellate cells are an important source of MMP-2 in human pancreatic cancer and accelerate tumor progression in a murine xenograft model and CAM assay[J]. J Cell Sci, 2007, 120(3): 512-519.

[9] NIEDERGETHMAN M, HILDENBRAND R, WOSTBROCK B, et al. High expression of vascular endothelial growth factor predicts early recurrence and poor prognosis after curative resection for ductal adenocarcinoma of the pancreas[J]. Pancreas, 2002, 25(2):122-129.

[10] CARGNELLO M, ROUX P. Activation and function of the MAPKs and their substrates, the MAPK-activated protein kinases[J]. Microbiol Mol Biol Rev, 2011, 75(1):50-83.

[11] 張涓娟，蒲宇，李勇，等. PI3K/AKT和MAPK/ERK1/2信號通路對胰腺癌PANC-1細(xì)胞VEGF表達(dá)的影響[J]. 川北醫(yī)學(xué)院學(xué)報, 2014, 29(1): 44-48.

[12] DING N, CUI X X, GAO Z, et al. A triple combination of atorvastatin, celecoxib and tipifarnib strongly inhibits pancreatic cancer cells and xenograft pancreatic tumors[J]. Int J Oncol, 2014, 44(6):2139-2145.

[13] CHEN WP, XIONG Y, HU PF, et al. Baicalein inhibits MMPs expression via a MAPK-dependent mechanism in chondrocytes[J]. Cell Physiol Biochem, 2015, 36(1):325-333.

[14] YANG CM, LEE IT, LIN CC, et al. c-Src-dependent MAPKs/AP-1 activation is involved in TNF-α-induced matrix metalloproteinase-9 expression in rat heart-derived H9C2 cells[J]. Biochem Pharmacol, 2013, 85(8):1115-1123.

[15] HAHNE JC, OKUDUCU AF, KAMINSKI A, et al. Ets-1 expression promotes epithelial cell transformation by inducing migration, invasion and anchorage-independent growth[J]. Oncogene, 2005, 24:5384-5388.

[16] GUAN H, CAI J, ZHANG N, et al. Sp1 is upregulated in human glioma, promotes MMP-2 mediated cell invasion and predicts poor clinical outcome[J]. Int J Cancer, 2012, 130(3):593-601.

[17] KUO LY, CHANG HC, LEU TH, et al. Src oncogene activates MMP-2 expression via the ERK/Sp1 pathway[J]. J Cell Physiol, 2006, 207(3):729-734.

(編輯 韓維棟)

Effects of atorvastatin on the proliferation and invasion of human pancreatic cancer cell PANC-1 and its mechanism study

LI Jing, LUO Miao-sha, QIN Bin, WANG Yan, DONG Lei

(Department of Gastroenterology, the Second Affiliated Hospital of Xi’an Jiaotong University, Xi’an 710004, China)

Objective To investigate the effects of atorvastatin on the invasion and proliferation abilities of pancreatic cancer cell PANC-1. Methods PANC-1 cells were exposed to different concentrations of atorvastatin. We used MTT assay to detect the proliferation and adhesion capabilities of PANC-1 cells. Transwell chamber was used to detect the invasion ability of PANC-1 cells. The expressions of MMP-2 and VEGF mRNA were assayed by RT-PCR while the expression of ERK1/2 protein was assayed by Western blot. Results Different concentrations of atorvastatin could inhibit the proliferation, adhesion and invasion abilities of PANC-1 cells in a dose-dependent manner. Atorvastatin of 10 μmol/L inhibited the expressions of MMP-2 (P=0.001 3), VEGF mRNA (P=0.007) and ERK1/2 protein (P=0.001 5) significantly. Conclusion Atorvastatin significantly inhibits the proliferation, adhesion and invasion capabilities of PANC-1 cellsinvitro. The mechanism may be related to inhibiting MAPK/ERK1/2 pathway and suppressing the expressions of MMP-2 and VEGF.

atorvastatin; pancreatic cancer; invasion

2015-05-27

2015-09-30

“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國家科技計劃課題(No.2012BAJ18B00) The planning subject ofthe Twelfth Five-year Planin National Science and Technology for Rural Development in China (No.2012BAJ18B00)

董蕾. E-mail: dong556@126.com

R737.33

A

10.7652/jdyxb201601006

優(yōu)先出版：http://www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20151209.1647.018.html(2015-12-09)