牛　聰，姚　遠(yuǎn)，高　陽，錢偉東，張洪友，夏　成，徐　闖（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶163319）

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奶牛I型和Ⅱ型酮病的調(diào)查研究

牛聰，姚遠(yuǎn)，高陽，錢偉東，張洪友，夏成，徐闖
（黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院，黑龍江大慶163319）

酮病是由于動(dòng)物體內(nèi)碳水化合物以及脂肪代謝紊亂而引發(fā)能量負(fù)平衡的一種代謝性疾病，該病通常以精神沉郁，食欲減退，消化機(jī)能紊亂，體重減輕，產(chǎn)奶量下降，個(gè)別牛出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，奶牛呼出氣體以及乳汁帶有丙酮?dú)馕兜葹橹饕R床癥狀。以低血糖、高血酮和高游離脂肪酸為主要血液生化特點(diǎn)[1]。以往將奶牛酮病根據(jù)是否具有典型的酮病臨床特征將該病分為臨床和亞臨床型酮病[2]。然而，Holtenius[3]等人根據(jù)發(fā)病時(shí)間及體況的特殊型，同時(shí)結(jié)合血糖含量，將奶牛酮病分成I型酮病與Ⅱ型酮病。Ⅱ型酮病奶牛的發(fā)病特征為高酮體、高胰島素、高游離脂肪酸（Non-esterified fatty acids，NEFA）和血糖（Glccose，Glc）含量較高或者正常[4]。Ⅱ型酮病的發(fā)病原因可能與飼喂過度導(dǎo)致血糖和胰島素的水平升高有關(guān)[5]。

目前，盡管國內(nèi)外已有Ⅱ型酮病的研究報(bào)道，但因缺乏有效的、實(shí)用的檢測(cè)和診斷方法，以致Ⅱ型酮病的流行病學(xué)狀況仍不清楚。因此，在集約化奶牛場(chǎng)開展Ⅱ型酮病的流行病學(xué)調(diào)查研

1　材料與方法

1.1試驗(yàn)動(dòng)物及分組在黑龍江省兩不同區(qū)域的集約化牛場(chǎng)中，隨機(jī)選取分娩后0～28 d的泌乳奶牛92頭作為試驗(yàn)動(dòng)物，其中39頭奶牛來自牛場(chǎng)A，53頭奶牛來自牛場(chǎng)B。根據(jù)相關(guān)血液生化指標(biāo)，將其血漿BHBA＞1.2 mmol/L，Glc＜2.5 mmol/L，且NEFA＞0.5 mmol/L，被認(rèn)為I型酮?。↖）；血漿BHBA＞1.2 mmol/L，Glc＞2.5 mmol/L，且NEFA＞0.5 mmol/L，被認(rèn)為Ⅱ型酮?。↖I）；而血漿BHBA＜0.6 mmol/L，Glc＞3.75 mmol/L，且NEFA＜0.5 mmol/L，被作為健康對(duì)照奶牛（C）。

1.2樣品采集清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集試驗(yàn)?zāi)膛Ｎ察o脈血液10 mL和乳汁5 mL。血液樣品經(jīng)肝素抗凝后，一滴血用于怡成血酮儀檢測(cè)酮體水平，其余血液樣品室溫條件下，3 000 r/min離心10 min，吸取血漿分裝于EP管內(nèi)，-80℃保存待測(cè)。并記錄試驗(yàn)?zāi)膛５捏w況分?jǐn)?shù)、年齡、胎次和泌乳量等臨床資料。酮粉法檢測(cè)乳汁，記錄酮體陽性情況。

1.3檢測(cè)項(xiàng)目與方法利用血酮儀（購自北京怡成生物電子技術(shù)有限公司），對(duì)現(xiàn)場(chǎng)采集的血液樣品進(jìn)行檢測(cè)。

采用氧化酶法檢測(cè)Glc，酶速率法檢測(cè)BHBA，酶比色法測(cè)定檢測(cè)NEFA，以上所有檢測(cè)指標(biāo)均使用相應(yīng)的商品化試劑盒進(jìn)行檢測(cè)（購自北京九強(qiáng)公司）。

酮粉法[6]：檢測(cè)乳汁內(nèi)酮體含量，觀察其顏色反應(yīng)，酮粉變成紅紫色即為酮病陽性。

1.4統(tǒng)計(jì)分析應(yīng)用SPSS軟件（SPSS公司，芝加哥，IL，美國），對(duì)奶牛酮病的發(fā)病率，3組試驗(yàn)牛的年齡、胎次、體況、泌乳天數(shù)、泌乳量以及血液中BHBA、Glc和NEFA含量因素方差分析（Oneway ANOVA），當(dāng)P＜0.05時(shí)判定為差異顯著，當(dāng)P＜0.01時(shí)判定為差異極顯著，。

2　結(jié)果

2.1酮病的發(fā)生狀況由表1可見，兩個(gè)牛場(chǎng)Ⅰ型和Ⅱ型酮病的發(fā)病率接近。其中A牛場(chǎng)酮病總發(fā)病率為17.95%，Ⅰ型酮病為10.26%，Ⅱ型酮病為7.69%；而B牛場(chǎng)的酮病總發(fā)病率為64.15%，Ⅰ型酮病為28.30%，Ⅱ型酮病為35.84%，B牛場(chǎng)的酮病發(fā)病率極顯著（P＜0.01），高于A牛場(chǎng)。

表1　奶牛酮病的發(fā)病率

2.2酮病奶牛的臨床資料狀況由表2可見，A牛場(chǎng)：Ⅰ型、Ⅱ型酮病奶牛年齡、胎次與C組（健康對(duì)照組）相比，差異不顯著；Ⅱ型酮病體況極顯著高于Ⅰ型酮病與健康組（P＜0.01），Ⅰ型酮病奶牛體況不顯著低于健康組（P＞0.05）；Ⅰ型酮病的泌乳量極顯著低于健康組（P＜0.01），Ⅱ型酮病的泌乳量顯著低于健康組（P＜0.05），Ⅰ型酮病與Ⅱ型酮病之間無顯著性差異。B牛場(chǎng)：Ⅰ型、Ⅱ型酮病奶牛與健康組相比，兩組奶牛在年齡、胎次上均無顯著性差異；Ⅱ型酮病奶牛體況極顯著高于Ⅰ型酮病組與健康組（P＜0.01）；Ⅰ型酮病奶牛與Ⅱ型酮病奶牛的泌乳量顯著低于健康組（P＜0.05）。

表2　試驗(yàn)?zāi)膛５呐R床資料

2.3酮病奶牛的能量代謝狀況由表3可見，血漿BHBA的結(jié)果顯示，A牛場(chǎng)與B牛場(chǎng)結(jié)果相近，均呈現(xiàn)Ⅰ型酮病的BHBA濃度極顯著（P＜0.01）高于Ⅱ型酮病，Ⅰ型組與Ⅱ型組極顯著高于C組。血漿Glc的結(jié)果顯示，A牛場(chǎng)與B牛場(chǎng)相似，均呈現(xiàn)Ⅰ型酮病血糖含量顯著低于Ⅱ型酮病組與健康組（P＜0.01），Ⅱ型酮病奶牛的血糖含量與健康奶牛相比無顯著性差異（P＞0.05）。血漿NEFA的結(jié)果顯示，A場(chǎng)與B場(chǎng)的結(jié)果相近，均呈現(xiàn)Ⅰ型酮病的NEFA含量顯著高于C組，Ⅱ型酮病的NEFA含量極顯著高于C組（P＜0.01），Ⅰ型組與Ⅱ型組之間差異不顯著（P＞0.05）。

表3　試驗(yàn)?zāi)膛Ｄ芰看x的狀況

3　討論

3.1奶牛Ⅱ型酮病的發(fā)病情況近年的研究顯示，酮病在我國的發(fā)病率為15%～30%[7]，而在國外酮病最高可達(dá)70%。然而，對(duì)于Ⅱ型酮病的發(fā)病狀況國內(nèi)鮮有報(bào)道。本研究對(duì)于兩個(gè)高產(chǎn)的集約化牛場(chǎng)酮病發(fā)病率的調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，A場(chǎng)酮病發(fā)病率為17.95%，其中Ⅰ型酮病發(fā)病率10.26%，Ⅱ型酮病發(fā)病率為7.69%；而B牛場(chǎng)酮病率發(fā)病率則高達(dá)64.15%，其中Ⅰ型酮病為28.30%，Ⅱ型酮病為35.84%。上述結(jié)果顯示，兩個(gè)牛場(chǎng)Ⅱ型酮病的發(fā)病率高于Ⅰ型酮病。而當(dāng)奶牛發(fā)生Ⅱ型酮病時(shí)，無明顯的臨床癥狀，因此對(duì)不同類型酮病奶牛采取不同的監(jiān)測(cè)和防治方法，能夠更加有效的防治奶牛酮病。

3.2奶牛Ⅱ型酮病的發(fā)病特點(diǎn)從酮病奶牛的年齡、胎次的調(diào)查結(jié)果發(fā)現(xiàn)，酮病易發(fā)于1～4胎奶牛，患有Ⅰ型與Ⅱ型酮病的奶牛年齡和胎次無顯著性差異。奶牛體況是能夠直觀、迅速評(píng)價(jià)奶牛體內(nèi)脂肪含量的宏觀目標(biāo)，體況能夠間接的衡量奶牛機(jī)體的營養(yǎng)狀態(tài)。以5分制作為奶牛體況的評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)，最先由美國Vermont大學(xué)的Wildman Jones E E及Wiseonsin大學(xué)的Rodenburg J共同提出，該項(xiàng)評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)廣泛應(yīng)用于北美一些國家。奶牛過肥過瘦對(duì)機(jī)體均能產(chǎn)生不利的影響。研究證明，奶牛較為理想的體況為2.4～4，然而，奶牛過度肥胖會(huì)使泌乳量明顯降低，體況在4以上的奶牛的泌乳量明顯低于體況為3.1～3.9的奶牛，奶牛過于消瘦同樣也不利于圍產(chǎn)期泌乳能量的供應(yīng)[8]。本試驗(yàn)調(diào)查研究發(fā)現(xiàn)，患Ⅱ型酮病的奶牛體況較好，Ⅱ型酮病奶牛的體況明顯高于Ⅰ型酮病與健康組，Ⅱ型酮病易發(fā)于體況較好的奶牛。

3.3奶牛Ⅱ型酮病的能量代謝狀況奶牛分娩后，由于采食高峰晚于泌乳高峰，因此，泌乳早期的奶牛最易發(fā)生能量負(fù)平衡狀態(tài)[9]。本研究對(duì)試驗(yàn)?zāi)膛Ｑ獫{BHBA、Glc、NEFA的研究發(fā)現(xiàn)，奶牛發(fā)生酮病后，機(jī)體的BHBA含量顯著增加。酮病奶牛存在的高血糖現(xiàn)象，與低血糖酮病的發(fā)病機(jī)理不同，認(rèn)為Ⅱ型酮病奶牛血糖維持較高濃度可能與機(jī)體存在胰島素抵抗有關(guān)[10]。熊桂林[11]在對(duì)圍產(chǎn)期奶牛血清的研究指出，機(jī)體脂解作用加強(qiáng)，能夠引起機(jī)體氧化與抗氧化系統(tǒng)失衡，機(jī)體呈現(xiàn)氧化應(yīng)激狀態(tài)。Azevedo-Martins A K的研究報(bào)道證實(shí)，機(jī)體NEFA增加，體內(nèi)抗氧化酶活性降低，機(jī)體處于氧化應(yīng)激狀態(tài)[12]。Schonfeld P的研究發(fā)現(xiàn)，NEFA的β-氧化不僅能夠產(chǎn)生ATP，還能生成大量的ROS和RNS，促進(jìn)機(jī)體進(jìn)一步氧化[13]。本試驗(yàn)對(duì)酮病奶牛血漿中NEFA濃度高低的研究發(fā)現(xiàn)，Ⅱ型酮病奶牛血漿中NEFA顯著高于Ⅰ型酮病與健康奶牛。從兩個(gè)牛場(chǎng)奶牛的泌乳天數(shù)來看，Ⅱ型酮病發(fā)生在泌乳后6～10 d，早于Ⅰ型酮病的泌乳后17～18 d。

本試驗(yàn)調(diào)查了奶牛發(fā)生酮病后奶牛泌乳量的變化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，兩個(gè)牛場(chǎng)Ⅰ型和Ⅱ型酮病奶牛的泌乳量均下降。因此，及時(shí)發(fā)現(xiàn)奶牛酮病，盡早采取有效的防治措施，將會(huì)更大的降低牛場(chǎng)的經(jīng)濟(jì)損失。

綜上所述，Ⅱ型酮病的發(fā)病率較高，與Ⅰ型酮病的發(fā)病率相似。因此，現(xiàn)場(chǎng)應(yīng)重視Ⅰ型和Ⅱ型酮病的檢測(cè)和鑒別診斷，為了更好的防治奶牛酮病提供科學(xué)的依據(jù)。Ⅰ型酮病奶牛體況較差，呈現(xiàn)低血糖癥；Ⅱ型酮病奶牛體況較好，血糖維持正常或較高水平，二者能量代謝調(diào)節(jié)存在差異，仍需進(jìn)一步探究。

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通訊作者：張洪友，E-mail：zhy478@163.com究，對(duì)豐富和發(fā)展奶牛酮病理論和知識(shí)，提供相應(yīng)的預(yù)防與治療措施具有重要的理論和現(xiàn)實(shí)意義。

作者簡(jiǎn)介：牛聰（1989-），男，碩士生，研究方向?yàn)榕R床獸醫(yī)學(xué)，E-mail：1247509823@qq.com

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金（31072181）；國家科技支撐計(jì)劃課題（2012BAD12B03-2）

收稿日期：2014-06-01

中圖分類號(hào)：S858.23

文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B

文章編號(hào)：0529- 6005（2016）01- 0057- 03