甲殼類疾病及其防治技術（2）
——蝦類疾?。ǘ?/h1>
2016-03-28 14:31:12汪建國
漁業(yè)致富指南 2016年15期
○汪建國
（中國科學院水生生物研究所 研究員 博導）
甲殼類疾病及其防治技術（2）
——蝦類疾病（二）
○汪建國
（中國科學院水生生物研究所研究員 博導）
3.黃頭病
對蝦傳染性疾病。該病急性感染的對蝦在染病2～4天時即出現(xiàn)停食等癥狀，死亡率高。瀕死蝦頭胸部因肝胰腺發(fā)黃而變成黃色，因此稱之為黃頭病。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。OIE將其列為必須申報的疾病。
【病原體】黃頭病毒（Yellow head virus，YHV）。
【流行與危害】黃頭病最先（1990）在泰國東部和中部地區(qū)的養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦中出現(xiàn)，隨后在印度、中國、馬來西亞、印度尼西亞、菲律賓、越南等亞洲地區(qū)和美洲國家流行和蔓延。自然或人工感染狀態(tài)下，可感染斑節(jié)對蝦、食用對蝦、日本囊對蝦、墨吉對蝦、凡納濱對蝦、細角對蝦、白對蝦、褐對蝦、桃紅對蝦、刀額新對蝦、綠尾新對蝦等多個對蝦品種。斑節(jié)對蝦為主要受感染者，可能是黃頭病毒的自然宿主。自然狀態(tài)下黃頭病毒還可感染日本囊對蝦、墨吉對蝦、白對蝦，試驗感染條件下感染斑節(jié)對蝦、凡納濱對蝦、細角對蝦、褐對蝦、桃紅對蝦、白對蝦，引起較高死亡率。該病嚴重影響?zhàn)B殖約50～70d的對蝦，感染后3～5天內(nèi)發(fā)病率高達100%，死亡率達80%～90%。
水平傳播是該病病原的主要傳播方式。鳥類也是傳播媒介之一，海鷗等鳥類攝食患病對蝦，然后通過排泄物將病毒傳播到鄰近的池塘中去。
【癥狀及病理變化】黃頭病能引起對蝦迅速大量死亡，常見患病蝦攝食量先增大然后突然停止，一般2～4天內(nèi)就會出現(xiàn)頭胸部發(fā)黃和全身發(fā)白的臨床癥狀。許多瀕死蝦聚集在池塘角落的水面，肝胰腺比正常蝦軟且發(fā)黃，與健康蝦肝胰腺的褐色有明顯區(qū)別。
黃頭病毒主要侵染外胚層和中胚層起源的組織器官，可感染血淋巴、造血組織、鰓瓣、皮下結(jié)締組織、腸、觸角腺、生殖腺、神經(jīng)束、神經(jīng)節(jié)等，出現(xiàn)全身性細胞壞死。組織壓片可觀察到中度到大量球形強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體；血淋巴涂片可觀察到中度到大量血細胞發(fā)生核固縮和破裂；組織切片可觀察到壞死區(qū)域有球形強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體，直徑為2μm或稍小，胃皮下組織和鰓是觀察特征性包涵體的最佳部位。
【診斷方法】根據(jù)流行病學、臨床特征和病理特征可以做出初步診斷，確診需通過實驗室檢查。
（l）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體、仔蝦取完整個體，幼蝦和成蝦取蝦的頭胸部，非對蝦的甲殼類動物參照對蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第l部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（2）組織及病理學檢查
① 組織壓片的快速染色法：取瀕死蝦鰓絲或表皮用Meyer's HE染色，觀察細胞內(nèi)球形強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體。該方法適用于對蝦活體中的黃頭病毒檢測，但不適于非感染性病毒攜帶樣品的診斷及對宿主進行組織病理學評價。
② 組織病理學診斷：HE染色后觀察各種不同組織的病理變化和強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體。本法適用于對蝦感染黃頭病毒初步診斷或未知疾病樣品組織病理學評價，不適于非感染性病毒攜帶樣品的檢測。
③ 電鏡診斷：可對病蝦鰓、淋巴器官等的病毒粒子觀察和確診。
（3）病原學鑒定
① 原位雜交法：用YHV特異性的地高辛標記的cDNA探針進行，敏感性比病理組織學診斷法高，適用于黃頭病毒敏感宿主的感染程度及病毒擴增狀況的評估和疾病確診。
② RT-PCR檢測法：通過RT-PCR檢測YHV的特定基因。適用于對蝦各個生活期及其他生物或底泥等樣品的黃頭病毒情況進行定性檢測，也適合于病原篩查和疾病確診。
④ 免疫檢測技術：通過制備的抗黃頭病毒特異性抗體來檢測病毒?？扇』钗r血淋巴，采用Western blot、ELISA或免疫熒光等方法鑒定樣品是否有黃頭病毒感染，從而進行確診。
【防治方法】
（l）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。
（2）控制苗種繁殖場內(nèi)YHV檢疫陽性的親蝦和苗種應全部撲殺；病毒陽性的種用和商品養(yǎng)殖蝦必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
4.羅氏沼蝦白尾病
又稱羅氏沼蝦肌肉白濁病，是一種急性病毒性疾病，主要危害羅氏沼蝦苗種，以急性死亡、病蝦肌肉呈白斑或白濁狀為特征。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。OIE將其列為必須申報的疾病。
【病原體】羅氏沼蝦野田村病毒（Macrobrachium rosenbergiinodavirus，MrNV）及其衛(wèi)星病毒-超小病毒（Extra small virus，XSV）。
【流行與危害】本病最先在泰國被發(fā)現(xiàn)，隨后出現(xiàn)于中國及圭亞那。目前該病已在中國、泰國、印度、越南、緬甸、澳大利亞、加勒比海地區(qū)（法屬圭亞那等）等國家和地區(qū)發(fā)生并流行。浙江省近年采用無野田村病毒苗種培育技術，自2005年以來未檢出病毒。
羅氏沼蝦是病毒主要的易感宿主，日本沼蝦、秀麗白蝦、克氏原螯蝦等養(yǎng)殖品種未發(fā)現(xiàn)發(fā)生羅氏沼蝦野田村病毒的感染。病毒主要感染羅氏沼蝦蝦苗，淡化后3天至3周是疾病高發(fā)時期，嚴重時死亡率可高達90%以上，目前沒有有效控制措施。發(fā)病后部分苗種可存活并長至商品規(guī)格的成蝦，但有發(fā)病史的蝦可攜帶病毒，造成子代蝦苗的發(fā)病。成蝦及親蝦可查出病毒，但未發(fā)現(xiàn)MrNV感染引起的大規(guī)模流行。
病毒可通過水平和垂直傳播感染，其中帶毒種蝦垂直傳播是引起我國蝦苗發(fā)病的重要原因；帶病毒水體、餌料、工具、未徹底消毒的育苗池等均可傳播病毒；有學者報道帶病毒的輪蟲等生物餌料也可傳播疾病。
蝦苗池缺氧、水質(zhì)不良及營養(yǎng)因素等也可引起蝦體肌肉白濁，但這類白濁分布于整個腹部，無分散的白濁斑點，改用水質(zhì)良好的水后蝦苗的白濁可消退；病毒感染引起的白濁不能消退并可在蝦群中迅速傳播。
【癥狀及病理變化】發(fā)病蝦苗先在腹部出現(xiàn)白色或乳白色混濁塊，而后逐漸向其他部位擴展，最后除頭胸部外，全身肌肉呈乳白色。蝦甲殼不出現(xiàn)白斑，這一點可區(qū)別于對蝦白斑綜合征。
發(fā)病蝦苗腹部肌纖維、肝胰腺、血細胞、心臟和鰓組織胞漿內(nèi)可觀察到嗜堿性包涵體；超微病理觀察可發(fā)現(xiàn)肌纖維間線粒體腫脹、變形，肌質(zhì)網(wǎng)變性、壞死和空泡化，表明細胞處于缺氧和鈣代謝紊亂狀態(tài)；肌細胞包涵體內(nèi)存在大量晶格排列、無囊膜、大小為26納米的球狀病毒顆粒。用病毒核酸探針或抗MrNV單抗進行免疫酶染色，可發(fā)現(xiàn)肌肉及組織間隙細胞內(nèi)存在大量病毒顆粒。
【診斷方法】
（1）初步診斷可根據(jù)蝦苗腹部出現(xiàn)白色或乳白色混濁塊、肌肉白濁、個別蝦苗腹部存在分散的白濁點，排除水質(zhì)因素引起的肌肉白濁后作出初步診斷。應與對蝦傳染性肌肉壞死病相區(qū)別。
（2）樣品采集發(fā)病蝦苗應采集150尾以上，正常蝦500尾以上，取完整個體，用于病毒核酸提取或ELISA測定；種蝦應采集病蝦10尾，用于病毒測定。
（3）組織和病理學檢查典型病例切片經(jīng)HE染色后，可發(fā)現(xiàn)嗜酸性包涵體，為本病重要特征，但此方法費時，且觀察難度較大，診斷意義不大。
（4）實驗室診斷和病原學鑒定
①RT-PCR檢測法：用MrNV特異性的引物進行RT-PCR檢測，適用于對蝦各種樣品、環(huán)境生物和餌料生物的各種樣品以及其他非生物樣品中MrNV的定性檢測，具有高靈敏度和高特異性，適用于病原篩查和疾病確診。
②三抗體夾心ELISA法：其過程是先用兔抗MrNV抗體預包被酶標板，然后加入待測樣品、陽性及陰性對照，通過預包被抗體捕捉待測樣品中的MrNV，再加入小鼠抗MrNV單抗，洗脫后最后加入抗小鼠單抗的酶標抗體，然后進行顯色，有病毒的樣品可顯示較深的顏色。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。并加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種，提高抗病能力。加強飼養(yǎng)管理，降低發(fā)病幾率。在疾病發(fā)生流行時，未發(fā)病苗種場可采用嚴格消毒、控制外來人員進入苗種生產(chǎn)車間等辦法，防止疾病的傳播。使用抗病毒藥及微生物制劑可延緩疾病過程，減少死亡，但養(yǎng)成的成蝦可能攜帶病毒。
（2）控制病毒檢出陽性的苗種場應停止生產(chǎn)，繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部撲殺，并按有關規(guī)定對發(fā)病養(yǎng)殖區(qū)、用具和種蝦作無害化處理；檢疫陽性蝦禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料。
5.對蝦桿狀病毒病
對蝦桿狀病毒病是威脅對蝦幼體、仔蝦和幼蝦階段的疾病。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。
【病原體】對蝦桿狀病毒（Baculovirus penaei）。
【流行與危害】該病毒主要感染西半球的養(yǎng)殖及野生對蝦。目前已發(fā)現(xiàn)3個地方株，分別分布在東南大西洋、美國、墨西哥沿岸和加勒比海、美國南、中北部太平洋沿岸及夏威夷。該病毒宿主廣泛，可感染濱對蝦屬、美對蝦屬、明對蝦屬和溝對蝦屬等在內(nèi)的所有對蝦品種，以幼體、仔蝦和早期幼蝦對病毒最為敏感。病毒主要經(jīng)對蝦相互殘食以及糞-口途徑經(jīng)口傳播。親蝦產(chǎn)卵時排泄帶毒糞便也可使病毒傳給下一代種群。試驗表明輪蟲和鹵蟲可將該病毒傳給對蝦幼體。
【癥狀及病理變化】病蝦嗜睡厭食，體色呈藍灰色或藍黑色，胃附近白濁化，浮頭，停滯岸邊，鰓和體表有固著類纖毛蟲、絲狀細菌、附生硅藻等生物附著，容易并發(fā)褐斑病等細菌性疾病，最終側(cè)臥于池底死亡。解剖后可發(fā)現(xiàn)肝胰腺腫大、軟化、發(fā)炎或萎縮硬化，腸道發(fā)炎等。
病毒主要侵害肝胰腺腺管、中腸等上皮細胞。感染病毒后可在肝胰腺和中腸上皮細胞中形成細胞核內(nèi)核型多角包涵體，少量包涵體也可在糞便中游離存在。肝胰腺和中腸上皮細胞核內(nèi)存在數(shù)量不等的金字塔狀包涵體，包涵體為具有明顯折射性的四面體，高度約20μm。受感染的對蝦肝胰腺小管和前中腸的上皮細胞的細胞核肥大，核內(nèi)有1個至幾個角錐形包涵體。核仁被擠到一邊，并退化或消失，染色質(zhì)分布于核的邊緣，呈環(huán)狀排列。
【診斷方法】根據(jù)流行病學、臨床特征和病理特征可以做出初步診斷，確診需進行實驗室診斷。診斷時應注意與斑節(jié)對蝦桿狀病毒病相區(qū)別。
（1）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體取完整個體，仔蝦取頭胸部，幼蝦和成蝦取小塊肝胰腺或小截中腸組織。糞便樣品采集：將幼蝦或成蝦暫養(yǎng)于水族箱中，待數(shù)小時直至水族箱底部出現(xiàn)糞便，用干凈的塑料虹吸管吸取排泄物，注入玻璃試管中。
樣品采集的要求參照SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒病診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（2）診斷方法
① 壓片顯微鏡檢查法：取病蝦肝胰腺和中腸進行濕片壓片，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)角錐形包涵體基本可診斷。結(jié)果可疑時根據(jù)組織病理或PCR結(jié)果確認。
②組織病理學診斷法：觀察組織切片經(jīng)H＆ E染色后細胞核內(nèi)角錐形包涵體。適用于對蝦感染對蝦桿狀病毒情況的初步診斷或未知疾病樣品的組織病理學評價，不適用于非感染性攜帶病毒的樣品檢測。
③透射電鏡診斷法：制備病蝦中腸腺超薄切片，透射電鏡檢查包涵體和核質(zhì)中有無許多桿狀病毒顆粒，從而確診。
④原位雜交法：采用地高辛標記eDNA探針進行病毒檢測，敏感性高于病理組織診斷法，適用于對蝦桿狀病毒敏感宿主組織細胞的感染程度及病毒擴增狀況的評估和疾病的確診。
⑤PCR檢測法：通過聚合酶鏈式反應，檢測病毒特定基因。適用于大量樣品的病毒篩查和疾病確診，可檢測對蝦活體、糞便、冰凍和冰鮮蝦產(chǎn)品的對蝦桿狀病毒的篩查和疾病診斷，但單獨使用不能對病毒劑量、感染活性及宿主感染程度作出評估。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源以及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。加強親蝦及幼體的檢疫，及時銷毀受病毒污染的對蝦，染疫場的池塘、用具徹底消毒。改善水質(zhì)和采取合理的養(yǎng)殖密度，可降低本病的發(fā)生。
（2）控制繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部捕殺；種用和商品養(yǎng)殖蝦檢疫陽性的必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作餌料使用。
6.傳染性皮下和造血器官壞死病
對蝦的一種傳染性疾病，主要感染細角對蝦和凡納濱對蝦。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。OIE將其列為必須申報的疾病。
【病原體】傳染性皮下和造血組織壞死病毒 （infctioushypodernmm and haematopoietic necrosis virus，IHHNV），又名“細角對蝦濃核病毒”（Penaeus stylirostris densovirus，PstDNV）。
【流行與危害】IHHNV可感染世界各地的養(yǎng)殖對蝦，主要感染太平洋東部沿岸野生對蝦、太平洋島嶼（包括夏威夷群島、法屬波利尼西亞、關島和新卡里多尼亞）的養(yǎng)殖對蝦。近年來在東南亞和中東地區(qū)的養(yǎng)殖和野生對蝦中存在該病的流行，該病在我國也有較高的發(fā)病率。細角對蝦、凡納濱對蝦、斑節(jié)對蝦等大部分對蝦品種都可被感染，細角對蝦死亡率可達90%以上，稚蝦受危害最為嚴重。該病毒主要通過帶毒蝦及其他甲殼類受病毒污染水體傳播，蝦類同類殘食或海鳥也可傳播病毒。發(fā)病后存活的對蝦仍帶毒，可以通過垂直傳播方式傳播該病。
【癥狀及病理變化】細角對蝦的稚蝦患急性傳染性皮下和造血組織壞死病后，攝食量明顯減少，繼而出現(xiàn)行為及外觀異常?；疾ξr可緩緩上升到水面，靜止不動，然后翻轉(zhuǎn)后腹部向上并緩慢沉到水底，這種行為可反復進行并持續(xù)數(shù)小時，直到無力繼續(xù)下去或被其他蝦吞食。此感染期的細角對蝦表皮上皮層（尤其是腹部背板接合處）常出現(xiàn)白色或淺黃色斑點，使整個蝦體呈現(xiàn)斑駁的外觀。在瀕死的細角對蝦中，這些斑點會有所褪色，導致蝦體色偏藍。在感染的末期，細角對蝦和斑節(jié)對蝦瀕死時體色明顯變藍，腹部肌肉不透明。
在凡納濱對蝦中，由IHHNV引起的“傳染性皮下和造血組織壞死病”存在一種慢性表現(xiàn)形式，即“矮小殘缺綜合征（runt-deformity syndrome，RDS）”。RDS病蝦生長緩慢、體型畸形，患病稚蝦還出現(xiàn)額角彎曲、變形、觸角鞭毛皺起、表皮粗糙或殘缺。患RDS的凡納濱對蝦稚蝦群體中，體長普遍偏小，且個體之間體長差異很大。可用體長變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）來評估凡納濱對蝦和細角對蝦稚蝦群體是否患有RDS：RDS群體的CV值多大于30%，甚至達到90%；而未患病群體的。CV值通常為10%～30%。
在組織病理學方面，IHHNV主要感染起源于外胚層和中胚層的組織細胞，主要有表皮、前腸和后腸上皮、性腺、淋巴器官和結(jié)締組織細胞，基本不感染肝胰腺細胞。靶組織細胞核內(nèi)可觀察到嗜酸性包涵體，即典型的考德里A型（Cowdry type A）包涵體。
【診斷方法】在本病嚴重暴發(fā)流行時，可根發(fā)病史、臨床特征及病理特征做出初步診斷，確診需要通過實驗室檢查。
（1）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體、仔蝦取完整個體，幼蝦和成蝦取頭胸部，非對蝦的甲殼類動物參照對蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（2）組織及病理學檢查
① 組織病理診斷法：組織切片經(jīng)HE染色后，觀察細胞核內(nèi)是否存在Cowdry A型包涵體，從而進行診斷。該方法適用于有癥狀對蝦的初步診斷或未知樣品的組織病理學評價，不適用于無癥狀帶病毒標本的病毒檢測。
② 電鏡診斷：通過超薄切片，觀察靶組織細胞核內(nèi)有無IHHNV病毒粒子進行確診。
（3）病原學鑒定
① 分子雜交技術：采用地高辛標記的IHHNV eDNA探針進行病毒檢測，靈敏度高于病理組織診斷法。適用于成蝦、幼蝦、仔蝦、幼體和受精卵活體、冰鮮或冰凍產(chǎn)品和其他甲殼類動物的病毒篩查、有臨床病癥病蝦的確診。
② PCR檢測法：通過聚合酶鏈式反應檢測IHHNV特定基因。適用于各種對蝦樣品、環(huán)境生物和餌料生物樣品以及其他各種非生物樣品的IHHNV帶毒的高靈敏度定性檢測。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源以及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。有效的預防措施主要是加強對蝦、特別是進口對蝦的檢疫，并銷毀染疫對蝦，對發(fā)病蝦場及其設施要進行徹底消毒。用SPF親蝦進行繁育。
（2）控制繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部撲殺；種用和商品養(yǎng)殖蝦檢疫陽性的必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
（未完待續(xù)）
（通聯(lián)：430072，中國科學院水生生物研究所 武漢市武昌東湖南路7號）
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○汪建國
（中國科學院水生生物研究所 研究員 博導）
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——蝦類疾病（二）
○汪建國
（中國科學院水生生物研究所研究員 博導）
3.黃頭病
對蝦傳染性疾病。該病急性感染的對蝦在染病2～4天時即出現(xiàn)停食等癥狀，死亡率高。瀕死蝦頭胸部因肝胰腺發(fā)黃而變成黃色，因此稱之為黃頭病。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。OIE將其列為必須申報的疾病。
【病原體】黃頭病毒（Yellow head virus，YHV）。
【流行與危害】黃頭病最先（1990）在泰國東部和中部地區(qū)的養(yǎng)殖斑節(jié)對蝦中出現(xiàn)，隨后在印度、中國、馬來西亞、印度尼西亞、菲律賓、越南等亞洲地區(qū)和美洲國家流行和蔓延。自然或人工感染狀態(tài)下，可感染斑節(jié)對蝦、食用對蝦、日本囊對蝦、墨吉對蝦、凡納濱對蝦、細角對蝦、白對蝦、褐對蝦、桃紅對蝦、刀額新對蝦、綠尾新對蝦等多個對蝦品種。斑節(jié)對蝦為主要受感染者，可能是黃頭病毒的自然宿主。自然狀態(tài)下黃頭病毒還可感染日本囊對蝦、墨吉對蝦、白對蝦，試驗感染條件下感染斑節(jié)對蝦、凡納濱對蝦、細角對蝦、褐對蝦、桃紅對蝦、白對蝦，引起較高死亡率。該病嚴重影響?zhàn)B殖約50～70d的對蝦，感染后3～5天內(nèi)發(fā)病率高達100%，死亡率達80%～90%。
水平傳播是該病病原的主要傳播方式。鳥類也是傳播媒介之一，海鷗等鳥類攝食患病對蝦，然后通過排泄物將病毒傳播到鄰近的池塘中去。
【癥狀及病理變化】黃頭病能引起對蝦迅速大量死亡，常見患病蝦攝食量先增大然后突然停止，一般2～4天內(nèi)就會出現(xiàn)頭胸部發(fā)黃和全身發(fā)白的臨床癥狀。許多瀕死蝦聚集在池塘角落的水面，肝胰腺比正常蝦軟且發(fā)黃，與健康蝦肝胰腺的褐色有明顯區(qū)別。
黃頭病毒主要侵染外胚層和中胚層起源的組織器官，可感染血淋巴、造血組織、鰓瓣、皮下結(jié)締組織、腸、觸角腺、生殖腺、神經(jīng)束、神經(jīng)節(jié)等，出現(xiàn)全身性細胞壞死。組織壓片可觀察到中度到大量球形強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體；血淋巴涂片可觀察到中度到大量血細胞發(fā)生核固縮和破裂；組織切片可觀察到壞死區(qū)域有球形強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體，直徑為2μm或稍小，胃皮下組織和鰓是觀察特征性包涵體的最佳部位。
【診斷方法】根據(jù)流行病學、臨床特征和病理特征可以做出初步診斷，確診需通過實驗室檢查。
（l）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體、仔蝦取完整個體，幼蝦和成蝦取蝦的頭胸部，非對蝦的甲殼類動物參照對蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第l部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（2）組織及病理學檢查
① 組織壓片的快速染色法：取瀕死蝦鰓絲或表皮用Meyer's HE染色，觀察細胞內(nèi)球形強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體。該方法適用于對蝦活體中的黃頭病毒檢測，但不適于非感染性病毒攜帶樣品的診斷及對宿主進行組織病理學評價。
② 組織病理學診斷：HE染色后觀察各種不同組織的病理變化和強嗜堿性細胞質(zhì)包涵體。本法適用于對蝦感染黃頭病毒初步診斷或未知疾病樣品組織病理學評價，不適于非感染性病毒攜帶樣品的檢測。
③ 電鏡診斷：可對病蝦鰓、淋巴器官等的病毒粒子觀察和確診。
（3）病原學鑒定
① 原位雜交法：用YHV特異性的地高辛標記的cDNA探針進行，敏感性比病理組織學診斷法高，適用于黃頭病毒敏感宿主的感染程度及病毒擴增狀況的評估和疾病確診。
② RT-PCR檢測法：通過RT-PCR檢測YHV的特定基因。適用于對蝦各個生活期及其他生物或底泥等樣品的黃頭病毒情況進行定性檢測，也適合于病原篩查和疾病確診。
④ 免疫檢測技術：通過制備的抗黃頭病毒特異性抗體來檢測病毒?？扇』钗r血淋巴，采用Western blot、ELISA或免疫熒光等方法鑒定樣品是否有黃頭病毒感染，從而進行確診。
【防治方法】
（l）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。
（2）控制苗種繁殖場內(nèi)YHV檢疫陽性的親蝦和苗種應全部撲殺；病毒陽性的種用和商品養(yǎng)殖蝦必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
4.羅氏沼蝦白尾病
又稱羅氏沼蝦肌肉白濁病，是一種急性病毒性疾病，主要危害羅氏沼蝦苗種，以急性死亡、病蝦肌肉呈白斑或白濁狀為特征。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。OIE將其列為必須申報的疾病。
【病原體】羅氏沼蝦野田村病毒（Macrobrachium rosenbergiinodavirus，MrNV）及其衛(wèi)星病毒-超小病毒（Extra small virus，XSV）。
【流行與危害】本病最先在泰國被發(fā)現(xiàn)，隨后出現(xiàn)于中國及圭亞那。目前該病已在中國、泰國、印度、越南、緬甸、澳大利亞、加勒比海地區(qū)（法屬圭亞那等）等國家和地區(qū)發(fā)生并流行。浙江省近年采用無野田村病毒苗種培育技術，自2005年以來未檢出病毒。
羅氏沼蝦是病毒主要的易感宿主，日本沼蝦、秀麗白蝦、克氏原螯蝦等養(yǎng)殖品種未發(fā)現(xiàn)發(fā)生羅氏沼蝦野田村病毒的感染。病毒主要感染羅氏沼蝦蝦苗，淡化后3天至3周是疾病高發(fā)時期，嚴重時死亡率可高達90%以上，目前沒有有效控制措施。發(fā)病后部分苗種可存活并長至商品規(guī)格的成蝦，但有發(fā)病史的蝦可攜帶病毒，造成子代蝦苗的發(fā)病。成蝦及親蝦可查出病毒，但未發(fā)現(xiàn)MrNV感染引起的大規(guī)模流行。
病毒可通過水平和垂直傳播感染，其中帶毒種蝦垂直傳播是引起我國蝦苗發(fā)病的重要原因；帶病毒水體、餌料、工具、未徹底消毒的育苗池等均可傳播病毒；有學者報道帶病毒的輪蟲等生物餌料也可傳播疾病。
蝦苗池缺氧、水質(zhì)不良及營養(yǎng)因素等也可引起蝦體肌肉白濁，但這類白濁分布于整個腹部，無分散的白濁斑點，改用水質(zhì)良好的水后蝦苗的白濁可消退；病毒感染引起的白濁不能消退并可在蝦群中迅速傳播。
【癥狀及病理變化】發(fā)病蝦苗先在腹部出現(xiàn)白色或乳白色混濁塊，而后逐漸向其他部位擴展，最后除頭胸部外，全身肌肉呈乳白色。蝦甲殼不出現(xiàn)白斑，這一點可區(qū)別于對蝦白斑綜合征。
發(fā)病蝦苗腹部肌纖維、肝胰腺、血細胞、心臟和鰓組織胞漿內(nèi)可觀察到嗜堿性包涵體；超微病理觀察可發(fā)現(xiàn)肌纖維間線粒體腫脹、變形，肌質(zhì)網(wǎng)變性、壞死和空泡化，表明細胞處于缺氧和鈣代謝紊亂狀態(tài)；肌細胞包涵體內(nèi)存在大量晶格排列、無囊膜、大小為26納米的球狀病毒顆粒。用病毒核酸探針或抗MrNV單抗進行免疫酶染色，可發(fā)現(xiàn)肌肉及組織間隙細胞內(nèi)存在大量病毒顆粒。
【診斷方法】
（1）初步診斷可根據(jù)蝦苗腹部出現(xiàn)白色或乳白色混濁塊、肌肉白濁、個別蝦苗腹部存在分散的白濁點，排除水質(zhì)因素引起的肌肉白濁后作出初步診斷。應與對蝦傳染性肌肉壞死病相區(qū)別。
（2）樣品采集發(fā)病蝦苗應采集150尾以上，正常蝦500尾以上，取完整個體，用于病毒核酸提取或ELISA測定；種蝦應采集病蝦10尾，用于病毒測定。
（3）組織和病理學檢查典型病例切片經(jīng)HE染色后，可發(fā)現(xiàn)嗜酸性包涵體，為本病重要特征，但此方法費時，且觀察難度較大，診斷意義不大。
（4）實驗室診斷和病原學鑒定
①RT-PCR檢測法：用MrNV特異性的引物進行RT-PCR檢測，適用于對蝦各種樣品、環(huán)境生物和餌料生物的各種樣品以及其他非生物樣品中MrNV的定性檢測，具有高靈敏度和高特異性，適用于病原篩查和疾病確診。
②三抗體夾心ELISA法：其過程是先用兔抗MrNV抗體預包被酶標板，然后加入待測樣品、陽性及陰性對照，通過預包被抗體捕捉待測樣品中的MrNV，再加入小鼠抗MrNV單抗，洗脫后最后加入抗小鼠單抗的酶標抗體，然后進行顯色，有病毒的樣品可顯示較深的顏色。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。并加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種，提高抗病能力。加強飼養(yǎng)管理，降低發(fā)病幾率。在疾病發(fā)生流行時，未發(fā)病苗種場可采用嚴格消毒、控制外來人員進入苗種生產(chǎn)車間等辦法，防止疾病的傳播。使用抗病毒藥及微生物制劑可延緩疾病過程，減少死亡，但養(yǎng)成的成蝦可能攜帶病毒。
（2）控制病毒檢出陽性的苗種場應停止生產(chǎn)，繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部撲殺，并按有關規(guī)定對發(fā)病養(yǎng)殖區(qū)、用具和種蝦作無害化處理；檢疫陽性蝦禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料。
5.對蝦桿狀病毒病
對蝦桿狀病毒病是威脅對蝦幼體、仔蝦和幼蝦階段的疾病。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。
【病原體】對蝦桿狀病毒（Baculovirus penaei）。
【流行與危害】該病毒主要感染西半球的養(yǎng)殖及野生對蝦。目前已發(fā)現(xiàn)3個地方株，分別分布在東南大西洋、美國、墨西哥沿岸和加勒比海、美國南、中北部太平洋沿岸及夏威夷。該病毒宿主廣泛，可感染濱對蝦屬、美對蝦屬、明對蝦屬和溝對蝦屬等在內(nèi)的所有對蝦品種，以幼體、仔蝦和早期幼蝦對病毒最為敏感。病毒主要經(jīng)對蝦相互殘食以及糞-口途徑經(jīng)口傳播。親蝦產(chǎn)卵時排泄帶毒糞便也可使病毒傳給下一代種群。試驗表明輪蟲和鹵蟲可將該病毒傳給對蝦幼體。
【癥狀及病理變化】病蝦嗜睡厭食，體色呈藍灰色或藍黑色，胃附近白濁化，浮頭，停滯岸邊，鰓和體表有固著類纖毛蟲、絲狀細菌、附生硅藻等生物附著，容易并發(fā)褐斑病等細菌性疾病，最終側(cè)臥于池底死亡。解剖后可發(fā)現(xiàn)肝胰腺腫大、軟化、發(fā)炎或萎縮硬化，腸道發(fā)炎等。
病毒主要侵害肝胰腺腺管、中腸等上皮細胞。感染病毒后可在肝胰腺和中腸上皮細胞中形成細胞核內(nèi)核型多角包涵體，少量包涵體也可在糞便中游離存在。肝胰腺和中腸上皮細胞核內(nèi)存在數(shù)量不等的金字塔狀包涵體，包涵體為具有明顯折射性的四面體，高度約20μm。受感染的對蝦肝胰腺小管和前中腸的上皮細胞的細胞核肥大，核內(nèi)有1個至幾個角錐形包涵體。核仁被擠到一邊，并退化或消失，染色質(zhì)分布于核的邊緣，呈環(huán)狀排列。
【診斷方法】根據(jù)流行病學、臨床特征和病理特征可以做出初步診斷，確診需進行實驗室診斷。診斷時應注意與斑節(jié)對蝦桿狀病毒病相區(qū)別。
（1）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體取完整個體，仔蝦取頭胸部，幼蝦和成蝦取小塊肝胰腺或小截中腸組織。糞便樣品采集：將幼蝦或成蝦暫養(yǎng)于水族箱中，待數(shù)小時直至水族箱底部出現(xiàn)糞便，用干凈的塑料虹吸管吸取排泄物，注入玻璃試管中。
樣品采集的要求參照SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒病診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（2）診斷方法
① 壓片顯微鏡檢查法：取病蝦肝胰腺和中腸進行濕片壓片，顯微鏡檢查發(fā)現(xiàn)角錐形包涵體基本可診斷。結(jié)果可疑時根據(jù)組織病理或PCR結(jié)果確認。
②組織病理學診斷法：觀察組織切片經(jīng)H＆ E染色后細胞核內(nèi)角錐形包涵體。適用于對蝦感染對蝦桿狀病毒情況的初步診斷或未知疾病樣品的組織病理學評價，不適用于非感染性攜帶病毒的樣品檢測。
③透射電鏡診斷法：制備病蝦中腸腺超薄切片，透射電鏡檢查包涵體和核質(zhì)中有無許多桿狀病毒顆粒，從而確診。
④原位雜交法：采用地高辛標記eDNA探針進行病毒檢測，敏感性高于病理組織診斷法，適用于對蝦桿狀病毒敏感宿主組織細胞的感染程度及病毒擴增狀況的評估和疾病的確診。
⑤PCR檢測法：通過聚合酶鏈式反應，檢測病毒特定基因。適用于大量樣品的病毒篩查和疾病確診，可檢測對蝦活體、糞便、冰凍和冰鮮蝦產(chǎn)品的對蝦桿狀病毒的篩查和疾病診斷，但單獨使用不能對病毒劑量、感染活性及宿主感染程度作出評估。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源以及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。加強親蝦及幼體的檢疫，及時銷毀受病毒污染的對蝦，染疫場的池塘、用具徹底消毒。改善水質(zhì)和采取合理的養(yǎng)殖密度，可降低本病的發(fā)生。
（2）控制繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部捕殺；種用和商品養(yǎng)殖蝦檢疫陽性的必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作餌料使用。
6.傳染性皮下和造血器官壞死病
對蝦的一種傳染性疾病，主要感染細角對蝦和凡納濱對蝦。2008年《中華人民共和國農(nóng)業(yè)部公告》第1125號將其列為二類動物疫病。OIE將其列為必須申報的疾病。
【病原體】傳染性皮下和造血組織壞死病毒 （infctioushypodernmm and haematopoietic necrosis virus，IHHNV），又名“細角對蝦濃核病毒”（Penaeus stylirostris densovirus，PstDNV）。
【流行與危害】IHHNV可感染世界各地的養(yǎng)殖對蝦，主要感染太平洋東部沿岸野生對蝦、太平洋島嶼（包括夏威夷群島、法屬波利尼西亞、關島和新卡里多尼亞）的養(yǎng)殖對蝦。近年來在東南亞和中東地區(qū)的養(yǎng)殖和野生對蝦中存在該病的流行，該病在我國也有較高的發(fā)病率。細角對蝦、凡納濱對蝦、斑節(jié)對蝦等大部分對蝦品種都可被感染，細角對蝦死亡率可達90%以上，稚蝦受危害最為嚴重。該病毒主要通過帶毒蝦及其他甲殼類受病毒污染水體傳播，蝦類同類殘食或海鳥也可傳播病毒。發(fā)病后存活的對蝦仍帶毒，可以通過垂直傳播方式傳播該病。
【癥狀及病理變化】細角對蝦的稚蝦患急性傳染性皮下和造血組織壞死病后，攝食量明顯減少，繼而出現(xiàn)行為及外觀異常?；疾ξr可緩緩上升到水面，靜止不動，然后翻轉(zhuǎn)后腹部向上并緩慢沉到水底，這種行為可反復進行并持續(xù)數(shù)小時，直到無力繼續(xù)下去或被其他蝦吞食。此感染期的細角對蝦表皮上皮層（尤其是腹部背板接合處）常出現(xiàn)白色或淺黃色斑點，使整個蝦體呈現(xiàn)斑駁的外觀。在瀕死的細角對蝦中，這些斑點會有所褪色，導致蝦體色偏藍。在感染的末期，細角對蝦和斑節(jié)對蝦瀕死時體色明顯變藍，腹部肌肉不透明。
在凡納濱對蝦中，由IHHNV引起的“傳染性皮下和造血組織壞死病”存在一種慢性表現(xiàn)形式，即“矮小殘缺綜合征（runt-deformity syndrome，RDS）”。RDS病蝦生長緩慢、體型畸形，患病稚蝦還出現(xiàn)額角彎曲、變形、觸角鞭毛皺起、表皮粗糙或殘缺。患RDS的凡納濱對蝦稚蝦群體中，體長普遍偏小，且個體之間體長差異很大。可用體長變異系數(shù)（coefficient of variation，CV）來評估凡納濱對蝦和細角對蝦稚蝦群體是否患有RDS：RDS群體的CV值多大于30%，甚至達到90%；而未患病群體的。CV值通常為10%～30%。
在組織病理學方面，IHHNV主要感染起源于外胚層和中胚層的組織細胞，主要有表皮、前腸和后腸上皮、性腺、淋巴器官和結(jié)締組織細胞，基本不感染肝胰腺細胞。靶組織細胞核內(nèi)可觀察到嗜酸性包涵體，即典型的考德里A型（Cowdry type A）包涵體。
【診斷方法】在本病嚴重暴發(fā)流行時，可根發(fā)病史、臨床特征及病理特征做出初步診斷，確診需要通過實驗室檢查。
（1）樣品采集采集病蝦10尾、健康蝦150尾，按不同的大小或感染期取不同組織樣品。其中，對蝦幼體、仔蝦取完整個體，幼蝦和成蝦取頭胸部，非對蝦的甲殼類動物參照對蝦的方法取樣。非生物樣品取0.1～0.5g。
樣品采集的要求參照SC/T 7202.1-2007《斑節(jié)對蝦桿狀病毒診斷規(guī)程第1部分：壓片顯微鏡檢查法》附錄B的規(guī)定或者按照OIE《水生動物疾病診斷手冊》中的列表要求采樣。
（2）組織及病理學檢查
① 組織病理診斷法：組織切片經(jīng)HE染色后，觀察細胞核內(nèi)是否存在Cowdry A型包涵體，從而進行診斷。該方法適用于有癥狀對蝦的初步診斷或未知樣品的組織病理學評價，不適用于無癥狀帶病毒標本的病毒檢測。
② 電鏡診斷：通過超薄切片，觀察靶組織細胞核內(nèi)有無IHHNV病毒粒子進行確診。
（3）病原學鑒定
① 分子雜交技術：采用地高辛標記的IHHNV eDNA探針進行病毒檢測，靈敏度高于病理組織診斷法。適用于成蝦、幼蝦、仔蝦、幼體和受精卵活體、冰鮮或冰凍產(chǎn)品和其他甲殼類動物的病毒篩查、有臨床病癥病蝦的確診。
② PCR檢測法：通過聚合酶鏈式反應檢測IHHNV特定基因。適用于各種對蝦樣品、環(huán)境生物和餌料生物樣品以及其他各種非生物樣品的IHHNV帶毒的高靈敏度定性檢測。
【防治方法】
（1）預防對苗種場、良種場實施防疫條件審核、苗種生產(chǎn)許可管理制度。加強疫病監(jiān)測與檢疫，掌握流行病學情況。通過培育或引進抗病品種、切斷傳染源以及加強飼養(yǎng)管理等綜合措施控制本病。有效的預防措施主要是加強對蝦、特別是進口對蝦的檢疫，并銷毀染疫對蝦，對發(fā)病蝦場及其設施要進行徹底消毒。用SPF親蝦進行繁育。
（2）控制繁殖場親蝦和苗種檢疫陽性的全部撲殺；種用和商品養(yǎng)殖蝦檢疫陽性的必須進行無害化處理，禁止用于繁殖育苗、放流或直接作為水產(chǎn)餌料使用。
（未完待續(xù)）
（通聯(lián)：430072，中國科學院水生生物研究所 武漢市武昌東湖南路7號）
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