□董榮建 鮑忠贊 平陽(yáng)縣食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

梔子油渣的有效成分分析

□董榮建 鮑忠贊 平陽(yáng)縣食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)中心

本文對(duì)梔子果和經(jīng)榨油工藝的梔子油渣進(jìn)行分析，比較了京尼平苷酸、山梔子苷B、綠原酸、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷Ⅱ和西紅花酸7種物質(zhì)成分的含量變化。結(jié)果表明：與梔子果相比，梔子油渣中的西紅花苷I、西紅花苷Ⅱ有所降低，梔子苷有所增高?？梢赃M(jìn)行以梔子苷為主的綜合開(kāi)發(fā)利用，為進(jìn)一步綜合利用梔子的研究提供理論依據(jù)。

隨著人民生活水平的不斷提高，對(duì)食用油的質(zhì)量有了很高的要求，梔子不僅是一種藥材和色素原料，也是一種含油豐富的新油源，含油量與大豆接近，梔子油脂肪酸主要組分是亞油酸、油酸、棕櫚酸，具有調(diào)節(jié)血壓、降低血清膽固醇、調(diào)節(jié)脂肪代謝等作用，受到廣大消費(fèi)者喜歡。目前梔子油渣大多作為廢棄物處理，僅少量添加到飼料中得以利用，經(jīng)濟(jì)效益低。本文對(duì)梔子油渣的主要有效成分京尼平苷酸、山梔子苷B、綠原酸、梔子苷、西紅花苷I、西紅花苷Ⅱ和西紅花酸7種物質(zhì)進(jìn)行分析，為進(jìn)一步綜合利用梔子的研究提供理論依據(jù)。農(nóng)業(yè)開(kāi)發(fā)有限公司提供。

材料與儀器

實(shí)驗(yàn)材料

梔子果和梔子油渣，由浙江星光乙腈（MERCK，色譜純）、甲醇（MERCK，色譜純）、乙醇（分析純）、二次蒸餾水（自制），綠原酸（CSA號(hào)：327-97-9，純度HPLC≥98%）、山梔子苷B（CSA號(hào)：24512-62-7，純度HPLC≥98%）、梔子苷（CSA號(hào)：24512-63-8，純度HPLC≥98%）、西紅花酸（CSA號(hào)：27876-94-4，純度HPLC≥98%，購(gòu)于南京春秋生物工程有限公司）、京尼平苷酸（CSA號(hào)：27741-01-1，純度HPLC≥98%）、西紅花苷I（CSA號(hào)：94238-00-3，純度HPLC≥98%）、西紅花苷Ⅱ（CSA號(hào)：55750-84-0，純度HPLC≥98%，購(gòu)于上海金穂生物科技有限公司）。

儀器設(shè)備

Agilent1260型高效液相色譜儀（DAD二極管陣列檢測(cè)器）、電子天平、離心機(jī)、粉碎機(jī)。

方法與結(jié)果

供試樣品溶液的制備

取試樣約100 g，粉碎，過(guò)40目篩，精密稱量1.00 g，用80 mL 50%乙醇洗入100 mL容量瓶中，常溫下提取60 min，每隔5 min振蕩一次，用50%乙醇定容。3000 r/min離心10 min，取上清液過(guò)0.45 μm有機(jī)性濾膜針頭濾器（棄去初濾液），濾液待測(cè)。

儀器條件

色譜柱：Agilent Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）。流動(dòng)相：乙腈（A）-0.2%磷酸溶液（B）。梯度洗脫：0～18 min（8%～15% A），18～25 min（15%～23% A），25～40 min（23%～35% A），40～50 min（35%～50%A），50～65 min（50%A）。檢測(cè)波長(zhǎng)：238、330、440nm。柱溫：30 ℃。檢測(cè)器采集范圍：200～480 nm。流速：0.8 mL/min。進(jìn)樣量：10 μL。

標(biāo)準(zhǔn)曲線與檢出限

按上述條件預(yù)分析供試品，根據(jù)各物質(zhì)相應(yīng)比例制備對(duì)照品（色譜圖見(jiàn)圖1）。精密稱量對(duì)照品制備混標(biāo)溶液：京尼平苷酸（37.5 μg/mL）、山梔子苷B（38.8 μg/mL）、綠原酸(37.4 μg/mL)、梔子苷(1 582 μg/mL)、西紅花苷I(184 μg/mL)、西紅花苷Ⅱ(40 μg/mL)與西紅花酸(18.2 μg/mL)。將標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照液逐級(jí)稀釋后按2.2測(cè)定峰面積，以峰面積為Y坐標(biāo)，對(duì)照品濃度(μg/mL)為X坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行回歸，以3倍信噪比計(jì)算檢出限。結(jié)果表明7個(gè)化合物線性關(guān)系良好，檢出限滿足檢測(cè)的要求（結(jié)果見(jiàn)表1）。7個(gè)化合物在不同波長(zhǎng)下的HPLC色譜圖如圖1、圖2、圖3所示。

樣品測(cè)定

準(zhǔn)確稱量梔子果和梔子油渣樣品各1.00 g（一式3份），按上述條件進(jìn)行分析，測(cè)定7種物質(zhì)的含量；按《食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 食品中水分的測(cè)定》（GB 5009.3-2010）測(cè)定其水分含量，梔子果和梔子油渣水分含量分別為13.50%、9.11%。水分帶入計(jì)算，取三次結(jié)果取平均值（以干基計(jì)），結(jié)果見(jiàn)表2。

從表2中可以看出，西紅花酸在梔子油渣中未檢出，其他6種成分兩個(gè)樣品中均檢出。

經(jīng)壓榨后，京尼平苷酸、山梔子苷B、梔子苷和綠原酸含量有所增加，增幅分別為11.4%、10.3%、10.7%和14.5%，說(shuō)明這4種物質(zhì)在榨油過(guò)程中比較穩(wěn)定，由于除去油脂后，總的質(zhì)量減少，含量增加。西紅花苷I和西紅花苷Ⅱ含量有所減少，減幅分別為33.7%、38.89%，推測(cè)西紅花苷I和西紅花苷Ⅱ熱不穩(wěn)定，在榨油過(guò)程中部分損失。

精密度和穩(wěn)定性試驗(yàn)

取2.5中梔子油渣和梔子果供試溶液，各連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算精密度（RSD），7種物質(zhì)峰面積的RSD均小于3%，表明儀器和色譜條件良好。取梔子果試樣溶液分別在0、4、12、24 h測(cè)試，7種物質(zhì)的相對(duì)偏差均小于5%，表明2.5 中制備試樣液的方法穩(wěn)定性良好。

回收率試驗(yàn)

以梔子油渣樣品為空白，分別加入2.0 mL 2.3中的混合對(duì)照品溶液，按2.1和2.2方法分析，計(jì)算回收率，結(jié)果見(jiàn)表3。由表3可見(jiàn)，京尼平苷酸、山梔子苷B、綠原酸、梔子苷、西紅花苷I和西紅花苷Ⅱ6種物質(zhì)回收率均在95%～110%之間，說(shuō)明此方法適合這6種物質(zhì)的含量分析；西紅花酸回收率只有34.8%，明顯低于其他6種物質(zhì)，說(shuō)明此方法不適合西紅花酸的分析，需進(jìn)一步開(kāi)發(fā)適合西紅花酸的前處理方法。

小結(jié)

目前對(duì)梔子有效成分的研究和提取加工主要是梔子苷和黃色素，楊奎、蘇偉、方尚玲、孫旭群 等人研究表明梔子苷具有抗炎癥、抗氧化、保肝和利膽作用。梔子黃色素的主要成分是西紅花苷I和西紅花苷Ⅱ，廣泛應(yīng)用于面制品等食品著色，它不僅安全無(wú)毒還可補(bǔ)充人體維生素，是一種營(yíng)養(yǎng)型著色劑。本文通過(guò)對(duì)梔子油渣的有效成分分析，結(jié)果表明梔子油渣中還含有較高的梔子苷、西紅花苷I和西紅花苷Ⅱ，可見(jiàn)梔子油渣可以做為提取加工梔子苷和黃色素的原料。另外，研究表明梔子油渣相對(duì)于梔子果實(shí)而言，京尼平苷酸、山梔子苷B、梔子苷和綠原酸4種物質(zhì)的含量隨著比重的增加而增加，西紅花苷I和西紅花苷Ⅱ的含量隨著比重的增加而減少。然而對(duì)于梔子黃色素的要求則是京尼平苷酸、山梔子苷B、梔子苷和綠原酸的含量越低越好，因此對(duì)梔子黃色素提取、分離的工藝要求更高。