魏曉冉，石鳳英，張長寶，高長春

（北京市華都峪口禽業(yè)有限責(zé)任公司，國家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系平谷綜合試驗站，北京平谷101206）

種公雞精液質(zhì)量檢測規(guī)范與選育標(biāo)準(zhǔn)

魏曉冉，石鳳英，張長寶，高長春

（北京市華都峪口禽業(yè)有限責(zé)任公司，國家蛋雞產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系平谷綜合試驗站，北京平谷101206）

對于蛋種雞企業(yè)來說，種公雞的精液質(zhì)量直接影響著種蛋的受精率、雛雞質(zhì)量和種雞場的經(jīng)濟效益。然而種公雞的精液質(zhì)量在個體之間存在很大差異，據(jù)統(tǒng)計只有1/3～1/2（少數(shù)品種可達(dá)到2/3）的公雞其精液質(zhì)量是良好的，所以對精液質(zhì)量進行檢測，挑選優(yōu)秀的種公雞用于生產(chǎn)，是保證種蛋受精率、雛雞質(zhì)量的重要措施。對精液質(zhì)量進行檢測，淘汰精液質(zhì)量不合格的雞只，降低公母比，降低飼養(yǎng)成本，是保證種雞場經(jīng)濟效益的必要措施。

目前，精液質(zhì)量檢測與選育工作在實際生產(chǎn)中并未廣泛推廣使用，究其原因主要有三點：一是精液質(zhì)量檢測程序復(fù)雜，檢測設(shè)備要求高，檢測速度慢、成本高，難以進行大規(guī)模的推廣；二是精液質(zhì)量選育項目和選育標(biāo)準(zhǔn)模糊不清，即使對精液質(zhì)量進行檢測，無法進行選育，失去了精液質(zhì)量檢測的意義；三是生產(chǎn)單位對精液質(zhì)量檢測和選育的意義認(rèn)識不到位，忽略精液質(zhì)量檢測和選育工作。因此，需要建立精液質(zhì)量檢測的技術(shù)規(guī)范以及選育標(biāo)準(zhǔn)，實現(xiàn)精液質(zhì)量檢測和選育工作在生產(chǎn)中的應(yīng)用與推廣。

本文介紹一種操作簡單、快速、準(zhǔn)確的精液質(zhì)量檢測規(guī)范及選育標(biāo)準(zhǔn)，以供大家參考。

1 精液質(zhì)量檢測器材

1.1 精液質(zhì)量檢測與分析系統(tǒng)該系統(tǒng)根據(jù)種公雞的精子特點及分析項目專門定制，精子全自動分析軟件對精子圖像數(shù)學(xué)形態(tài)化識別后，可自動對每一個精子分配一個唯一標(biāo)號，同時采用綠色線對其運動軌跡進行精確跟蹤識別，以取得比較精確的運動參數(shù)和統(tǒng)計學(xué)參數(shù)。檢測項目包括精子密度、精子活力、精子運動軌跡、精子總數(shù)等，刪去路徑速度、曲線速度、直線速度，縮短了檢測和分析的時間，提高了檢測和分析效率。同時增加單位有效精子數(shù)、是否淘汰等項目，并可分品種、分品系設(shè)定精液質(zhì)量選擇標(biāo)準(zhǔn)，更加科學(xué)、嚴(yán)謹(jǐn)。

1.2 一次性使用精子計數(shù)板計數(shù)池深要求為60μm，保證形成單層、獨立的精子細(xì)胞，不發(fā)生重疊、堆積等現(xiàn)象，使精子在同一焦面上清晰成像，同時又不影響精子水平方向的自由運動。一次性精子計數(shù)板相對于普通的載玻片和蓋玻片，具有精子自動均衡吸入的功能,不會產(chǎn)生氣泡，避免手工壓片易產(chǎn)生氣泡、厚度不一致的缺點，易于控制，使精子在同一平面上清晰成像，方便分析。

1.3 其他儀器1.0ml的標(biāo)準(zhǔn)離心管（根據(jù)日檢測數(shù)量確定使用數(shù)量，管重量為0.9g）；14ml玻璃集精管；量程100μl移液器；最小刻度為0.01g的電子秤（稱精液的重量，根據(jù)精液重量判斷精液量的多少）。

2 精液質(zhì)量檢測項目

2.1 精液量用1.0ml離心管收集精液后，用最小刻度為0.01g的電子稱進行稱量，根據(jù)精液的重量推測精液量的多少。此方法比使用帶有刻度的移液管進行測量更加簡單，適合生產(chǎn)單位挑選種公雞的精液量。不同品種和個體的公雞，精液量有所差異，同時還受到采精人員、采集手法、公雞使用頻率等多種因素的影響。一般公雞的射精量在0.4ml以上，精液量低于0.4ml的雞只建議淘汰。

2.2 外觀檢查精液采集完成后，需要對精液的外觀進行檢查，并記錄在相應(yīng)的表格中。正常的精液應(yīng)該是乳白色、不透明的乳狀液體。若顏色出現(xiàn)異常，不再進行鏡檢。若精液呈黃褐色則是采精過程被糞便污染；精液呈粉紅色，說明精液中混有血液，可能是采集手法、采精力度存在問題，采用過程中需要多加注意；精液中有白色的絮狀物，在精液中混有尿酸鹽；如連續(xù)3d出現(xiàn)此種情況，該種公雞建議淘汰。

2.3 精子密度精子密度指每毫升精液中精子的數(shù)量。在檢測中多采用粗略鏡檢法，根據(jù)顯微鏡下精子群體的形狀，粗略判斷精子密度的方法，此種方法并未對精子進行計數(shù)，故在數(shù)據(jù)統(tǒng)計中存在較大的誤差，為了保證精子密度的準(zhǔn)確性和可靠性，不建議采用此種方法，可采用精子計數(shù)法，此方法要求對精子進行編號和計數(shù)，準(zhǔn)確性更高，采用精子質(zhì)量檢測和分析系統(tǒng)進行統(tǒng)計，方便快捷，可以進行推廣使用。

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2.4 精子活力精子活力是指37℃環(huán)境下，前進運動精子數(shù)占總精子數(shù)的百分比。家禽精子和卵子的受精部位在輸卵管壺腹部，即精子進入生殖道后仍需向受精部位運行，其動力一是依靠生殖道的收縮輔助，另一個是精子自身的活動力，同時也需要經(jīng)過一個“獲能”的變化，因此要完成上述全部過程，對輸入母雞生殖道內(nèi)的精液中必須有一定比例生命力強的精子，生命力強的精子在顯微鏡下的表現(xiàn)是呈直線運動，故精子活力是鑒定精液質(zhì)量最主要的指標(biāo)之一。

2.5 單位有效精子數(shù)1ml精液中含有直線前進運動的精子數(shù)，是反映1ml的精液中含有具有授精能力的精子情況，是由精子密度與精子活力乘積直接反應(yīng)，是鑒定精液質(zhì)量的最直接指標(biāo)之一。

3 精液質(zhì)量檢測流程

3.1 準(zhǔn)備集精管和采精離心管將集精管和離心管用80℃的溫水清洗三次，將水滴甩干，烤箱中用75℃的溫度烘烤30min（集精管內(nèi)壁不出現(xiàn)水氣為止），待烤箱和玻璃管、離心管冷卻后，將集精管和離心管放在密閉良好的收納箱中待用。

3.2 采集精液采集精液前，將2支離心管插入有編號的泡沫板中，并放在保溫盒中；采集公雞精液，將公雞精液采集到離心管（重0.9g）中，封閉離心管，每只公雞一個離心管，并按照雞只編號進行編號，采集2只雞放回到有保溫盒裝的泡沫板中，由專人送到檢測室，檢測室選擇離雞舍近的房間。編號一定要準(zhǔn)確，不能出現(xiàn)混淆和錯誤。

3.3 配置稀釋液用量程為10ml的移液器或帶刻度的移液器將8ml的生理鹽水放入集精管中。

3.4 稀釋液預(yù)溫將生理鹽水放在水溫為36.5℃的水浴鍋中進行預(yù)溫，采用生理鹽水稀釋，保證精子正常滲透壓，保證精子活力。

3.5 稀釋精液用量程為100μl的移液器吸取20μl的精液，移液器滴頭深入稀釋液中，緩慢注入，用密封塞蓋住集精管，晃動6～8次搖勻。稀釋倍數(shù)為1：400，稀釋倍數(shù)過高，視野中精子數(shù)量少，不準(zhǔn)確；稀釋倍數(shù)低，視野中精子過多，不易讀數(shù)。建議稀釋倍數(shù)以視野中存在150～200個精子為宜。

3.6 提取精液用100μl的移液器吸取15μl精液滴入計數(shù)池中，滴入過程緩慢，保證精子充滿整個計數(shù)池。

4 精液質(zhì)量選育標(biāo)準(zhǔn)模型

在實驗室檢測中，多以精子密度、精子活力、精液量三個標(biāo)準(zhǔn)判斷精液質(zhì)量，但由于此方法選擇標(biāo)準(zhǔn)多，在上千只種公雞中（例如峪口禽業(yè)一個標(biāo)準(zhǔn)化小區(qū)飼養(yǎng)2160只公雞，用以滿足12.5萬只母雞的輸精需求）挑選精液質(zhì)量良好的公雞，實屬不易，故經(jīng)過實驗建立了精液質(zhì)量選育標(biāo)準(zhǔn)模型。

4.1 精液量單只種公雞射精量在0.4ml以上。

4.2 精液外觀精液的顏色為乳白色，若出現(xiàn)非人為異常情況，對不合格的種公雞進行淘汰。

4.3 單位有效精子數(shù)選擇單位有效精子數(shù)在21.5億/ml的種公雞留作種用。

5 注意事項

5.1 時間要求精液從采集到檢測完成，時間不得超過10min，超過10min后精液質(zhì)量下降較快。

5.2 溫度要求精液采集到送達(dá)的過程，需要對精液進行保溫處理，尤其是在外界溫度低于25℃時，需要進行水浴保溫，并將添加精液的精子計數(shù)板在恒溫板上放置備用。

5.3 顯微鏡倍數(shù)選擇精液與生理鹽水按照1：400倍稀釋時，選擇20倍的低倍鏡進行檢測，成像清楚完整。

5.4 過程嚴(yán)謹(jǐn)精液從采集到檢測要嚴(yán)格保持無菌操作，所用容器使用高溫滅菌，不得使用消毒液進行消毒，以免影響精子活力。

5.5 檢測時間檢測時間一般選擇在下午進行，保證種公雞正常的采精反射，保證采精量和精液質(zhì)量。

6 小結(jié)

種公雞精液品質(zhì)的好壞直接影響著種蛋的受精率，而受精率是種雞場關(guān)鍵生產(chǎn)指標(biāo)之一，直接影響著種雞場的盈虧，因此控制好種公雞的精液質(zhì)量是任何一個種雞場都必須重視的工作，而種公雞精液質(zhì)量檢測是提高精液質(zhì)量最直接有效的方法。種公雞精液質(zhì)量檢測是一項操作簡單、用工量少的常規(guī)技術(shù)，目前已在育種單位得到了推廣和應(yīng)用，也必將應(yīng)用于蛋種雞生產(chǎn)中。在人工授精技術(shù)中，不僅要考慮精液的遺傳品質(zhì)，同時也要考慮到精液的繁殖性狀（包括精液量、精子密度、精子活力、輸入母雞體內(nèi)的單位有效精子數(shù)），故對精液質(zhì)量進行準(zhǔn)確與可靠的檢測，需要規(guī)范的檢測技術(shù)，同時加大對精液質(zhì)量檢測和選育過程的監(jiān)控力度，保證精液質(zhì)量檢測和選育過程的有效進行。

S831.2

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1673-1085（2016）03-0021-03

2016-02-23