高 鋒，官菊梅，，安雪梅

(1.四川中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，四川 綿陽 621000;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075)

右歸丸抑制腎陽虛型慢性再生障礙性貧血患者Th17細(xì)胞活化的觀察*

高 鋒1，官菊梅1，2，安雪梅2

(1.四川中醫(yī)藥高等?？茖W(xué)校，四川 綿陽 621000;2.成都中醫(yī)藥大學(xué)，成都 610075)

目的:探討右歸丸對(duì)腎陽虛型CAA患者外周血中Treg/Th17細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用。方法:對(duì)2組腎陽虛型 CAA患者進(jìn)行干預(yù)，其中加服右歸丸設(shè)為觀察組，另為對(duì)照組，均治療30 d比較2組患者治療前后Th17細(xì)胞百分比、p-STAT3、SOCS3、IL-6、IL-17、IL-23及 RORγt的表達(dá)變化。結(jié)果:治療前后 CAA患者外周血 Th17細(xì)胞百分率、IL-6、IL-17、IL-23、p-STAT3以及RORγt水平均高于健康對(duì)照組，治療后觀察組上述指標(biāo)低于對(duì)照組，SOCS3表達(dá)則與上述指標(biāo)趨勢(shì)相反。結(jié)論:右歸丸在抑制Th17細(xì)胞介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)過程中具有重要作用，它通過抑制STAT3信號(hào)發(fā)揮作用，為自身免疫性疾病提供治療靶點(diǎn)。

慢性再生障礙性貧血;腎陽虛;Th17細(xì)胞;流式檢測(cè)技術(shù)

再生障礙性貧血(aplastic anemia，CAA)是1組由多種病因所致的骨髓功能障礙、以全血細(xì)胞減少為主要表現(xiàn)的綜合征。Zheng M于2012年進(jìn)行的1項(xiàng)多中心、大樣本研究發(fā)現(xiàn)，CAA的發(fā)病機(jī)制與免疫系統(tǒng)功能紊亂密不可分［1］，主要表現(xiàn)為 T淋巴細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)的失衡以及免疫活性分子的異常激活，導(dǎo)致造血環(huán)境的破壞。CD4+T細(xì)胞在免疫反應(yīng)中起重要調(diào)節(jié)作用，在特異性抗原刺激下被激活，并增殖分化為不同的效應(yīng)T細(xì)胞亞群，如調(diào)節(jié)性 T細(xì)胞(Treg細(xì)胞)及 T輔助 17型細(xì)胞(Th17細(xì)胞)。已有文獻(xiàn)證實(shí)，Th17細(xì)胞比率升高在CAA的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮著主要作用，但導(dǎo)致Th17細(xì)胞在CAA中過度活化的免疫調(diào)節(jié)機(jī)制尚未明確［2］。而轉(zhuǎn)錄激活因子 3(signal transducers and activators of transcription3，STAT3)在 CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化過程中起重要作用，細(xì)胞因子 信 號(hào) 抑 制 因 子 3 (suppressors ofcytokine signaling 3，SOCS3)能下調(diào) STAT3的表達(dá)，進(jìn)而抑制 Th17細(xì)胞的活化聚集［3-4］。

西醫(yī)學(xué)采用免疫抑制劑、造血刺激因子等方法綜合治療，經(jīng)濟(jì)花費(fèi)高昂，且免疫抑制的副作用給病人帶來極大痛苦，從而使不少患者無法繼續(xù)治療，因此尋求新的治療方案具有現(xiàn)實(shí)意義。近年來，中草藥因能提高免疫功能且毒性低等特點(diǎn)受到廣泛關(guān)注。通過文獻(xiàn)研究發(fā)現(xiàn)，腎陽虛型是CAA中發(fā)生率較高的證型，故我們采用溫補(bǔ)腎陽的右歸丸對(duì)腎陽虛證型 CAA患者進(jìn)行治療，并嘗試探討該方藥對(duì)患者外周血中 Th17細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)作用。

1 資料與方法

1.1 一般資料

采集2007年1月至2013年3月成都中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院門診及住院部收集的 CAA患者資料，根據(jù)中國(guó)醫(yī)藥科技協(xié)會(huì)2002年《中藥新藥臨床研究指導(dǎo)原則(試行)》將符合腎陽虛的CAA患者56例按隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組和觀察組各28例。其中男性 30例，女性 26例，年齡 1～71歲，平均年齡(39±6.9)歲，所有患者診斷均符合張之南主編《血液病診斷及療效標(biāo)準(zhǔn)》(第三版)中關(guān)于 CAA的診斷標(biāo)準(zhǔn)，所有患者均為原發(fā)性CAA，排除藥物、化學(xué)品、輻射、感染等導(dǎo)致的繼發(fā)性CAA，排除骨髓纖維化、急性白血病等引起全細(xì)胞減少的疾病。同期健康體檢者30例作為健康對(duì)照組，其中男性 19例，女性 11例，年齡 2～70歲，平均年齡(40±5.8)歲。本研究方案經(jīng)過醫(yī)院倫理學(xué)委員會(huì)審查批準(zhǔn)，所有受試對(duì)象均簽署知情同意書。

1.2 治療方法

對(duì)照組與觀察組均口服再造生血片(遼源譽(yù)隆亞東藥業(yè)有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z22025856)，其主要成分為蠶砂提取物)1.9 g，tid，觀察組在上述治療方法基礎(chǔ)上口服右歸丸(京同仁堂股份有限公司同仁堂制藥，國(guó)藥準(zhǔn)字Z11021040)9 g，tid(用法參照說明書進(jìn)行)，2組均以30 d為1個(gè)療程。

1.3 流式細(xì)胞檢測(cè)

1.3.1 主要試劑與儀器 RPMI 1640和胎牛血清(美國(guó)Thermo公司);人淋巴細(xì)胞分離液 (天津市灝洋生物制品科技有限責(zé)任公司);佛波酯(PMA)、離子霉素(Ion)、莫能菌素(Mon)、破膜劑、酶標(biāo)儀、CD4-FITC、IL-17A-APC流式抗體、流式細(xì)胞儀(Partec GmbH德國(guó)，產(chǎn)品型號(hào)YZB/GEM 946-40);人細(xì)胞因子 IL-6、IL-17、IL-23 ELISA試劑盒(美國(guó) eBioscience公司);兔來源 p-STAT3及SOCS3抗體(美國(guó)CST公司)。

1.3.2 Th17細(xì)胞流式檢測(cè) 取健康對(duì)照組、CAA患者治療前及治療1個(gè)月后前臂外周抗凝血5 ml，用人淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單核細(xì)胞(PBMC，1×106/ml)200 ul，置于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入刺激劑佛波醇乙酯(PMA)及離子霉素、莫能霉素等工作液并混勻，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4～6 h。用磷酸鹽緩沖液(PBS)沖洗、離心收集細(xì)胞，加入5 ul異硫氰酸熒光素標(biāo)記的CD4(CD4-FITC)、5ul藻紅蛋白標(biāo)記的IL-17(IL-17A-APC)，操作按試劑盒說明書進(jìn)行，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)Thl7細(xì)胞。

1.3.3 細(xì)胞因子檢測(cè) 將適量流式細(xì)胞儀(FCM)篩選的 Th17細(xì)胞液在 4℃條件下進(jìn)行3000×g離心 5 min后用高壓槍頭吸取離心的上清液，使用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)進(jìn)行檢測(cè)，利用抗原、抗體的特異性反應(yīng)與酶對(duì)底物的高效催化作用相結(jié)合原理進(jìn)行相關(guān)因子濃度的檢測(cè)。具體步驟如下:用0.05M PH9.6碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10 μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1 ml，4℃過夜。次日棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3 min。加一定稀釋的待檢樣品0.1 ml于上述已包被的反應(yīng)孔中，置37℃孵育1 h然后洗滌。同時(shí)做空白孔、陰性對(duì)照孔及陽性對(duì)照孔，隨后在各反應(yīng)孔中加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1 ml，37℃孵育 0.5～1 h，洗滌。再于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的 TMB底物溶液0.1 ml，37℃10～30 min，于各反應(yīng)孔中加入 2 M 硫酸0.05 ml。試劑盒由廣州達(dá)安基因股份有限公司提供，顯色后采用492 nm波長(zhǎng)，TMB反應(yīng)產(chǎn)物檢測(cè)需要450 nm波長(zhǎng)。檢測(cè)時(shí)定要首先進(jìn)行空白孔系統(tǒng)調(diào)零，用測(cè)定標(biāo)本孔的吸收值與1組陰性標(biāo)本測(cè)定孔平均值的比值(P/N)表示。以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔 OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍即為陽性。操作過程全部按照試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.4 磷酸化信號(hào)傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄激活因子 3 (p-STAT3)、細(xì)胞因子信號(hào)抑制因子3(SOCS3)及維甲酸相關(guān)孤獨(dú)受體 γt(RORγt檢測(cè)) 無菌條件下取觀察組、對(duì)照組治療前后以及健康體檢組髂后上棘或髂前上棘骨髓液5 ml，置于存在EDTAK2溶液中，用人淋巴細(xì)胞分離液提取外周血單核細(xì)胞(PBMC，1×106/m1)200 ul，置于含10%胎牛血清及90%的DMEM培養(yǎng)基中，靜置于5%CO2、飽和濕度37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)7 d，隨后用0.25%的胰蛋白酶 +0.02%的 EDTA進(jìn)行細(xì)胞消化，隨后10000 r/min離心后棄上清液，在加入完全培養(yǎng)液后按照5×104/ml密度接種于培養(yǎng)瓶中進(jìn)行細(xì)胞傳代后再次按照上述步驟消化細(xì)胞，離心棄上清液后所得細(xì)胞置于－80℃冰箱待檢測(cè)。

①蛋白印跡法(Western-blot法)測(cè)定蛋白水平變化:收集適量流式細(xì)胞儀篩選的Th17細(xì)胞置于1 mLEP管后用 PBS洗滌2遍。然后加入細(xì)胞裂解液，充分裂解后置于4℃ 12000 r/m離心機(jī)離心10 min，取上清液獲取總蛋白?？捡R斯亮藍(lán)法測(cè)定蛋白濃度，進(jìn)行SDS-PAGE電泳分離蛋白后轉(zhuǎn)印到硝酸纖維膜上，封閉后加入相應(yīng)的單抗輕搖孵育1.5 h。用PBS洗滌3次，接著加入 HRP-二抗，置于室溫輕搖1 h后取出，再用 PBS洗滌3次，最后進(jìn)行曝光、顯影、定影、拍照和統(tǒng)計(jì)分析;②熒光多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(Real-Time PCR法)測(cè)定基因水平變化，用于檢測(cè) RORγt mRNA的表達(dá):按照 Trizol試劑說明書提取流式細(xì)胞儀篩選的 Th17細(xì)胞RNA，按照 Reverse transcriptase first stand cDNA synthesis試劑盒說明書進(jìn)行進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄。逆轉(zhuǎn)錄過程:95℃(6 min)→55℃(90 s)→72℃90 s)→72℃(10 min)→5℃(1 h)。Real-Time PCR操作方法按照試劑盒說明書，使用 GAPDH作為內(nèi)部參照，將 GAPDH的拷貝數(shù)作為校正基數(shù)，通過ABI7500軟件獲得檢測(cè)指標(biāo) Ct(cycle threshold)值，與同樣本中GAPDH的Ct值相減，即獲得該樣本中相應(yīng)指標(biāo)的 ΔCt值。以假手術(shù)組 ΔCt值作為校正，軟件根據(jù)2-ΔΔCT數(shù)值計(jì)算出檢測(cè)指標(biāo)基因濃度水平。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù) ±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示，且均符合正態(tài)性。兩獨(dú)立樣本均數(shù)間比較采用 t-test，隨機(jī)分組設(shè)計(jì)資料采用單因素方差分析，方差分析前使用Levene檢驗(yàn)方差齊性，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 2組治療前后外周血象比較

表1顯示，經(jīng)過治療后2組患者外周血象均有改善，與治療前比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，其中口服右歸丸的觀察組改善較常規(guī)治療對(duì)照組明顯(P＜0.05)。

表1 2組治療前后外周血象變化情況(±s)

表1 2組治療前后外周血象變化情況(±s)

注:與治療前比較:*P＜0.05，與對(duì)照組治療后比較:#P＜0.05

組 別 例數(shù) 時(shí) 間 HGB(g/L) WBC(X109/L) PLT(X109/L) 49.2±6.42 2.5±0.39 46.7±6.21治療后 88.6±5.64*# 3.6±0.31*# 67.3±5.91*#對(duì)照組 28 治療前 50.1±5.93 2.6±0.36 47.1±2.68治療后 60.6±7.12* 2.9±0.32* 51.4±2.01觀察組 28 治療前*

2.2 右歸丸能顯著抑制 CAA患者外周血中Th17細(xì)胞的表達(dá)

對(duì)不同治療組患者外周血進(jìn)行流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+IL-17+結(jié)果顯示，右歸丸治療組治療后CD4+IL-17+T細(xì)胞百分率(0.895±0.309)%顯著低于治療前(0.895±0.309%vs 2.556±0.491 %，|t|=22.07，P=0.0008＜0.001)及對(duì)照組治療后(0.895±0.309% vs 1.262±0.247%，|t| =3.676，P=0.009＜0.01)，且高于健康對(duì)照組(0.895±0.309% vs.0.557±0.163%，|t|= 2.396，P=0.024＜0.05)。圖 1、2顯示，右歸丸可以顯著降低 CAA患者外周血中的 Th17細(xì)胞表達(dá)。

圖1 各組患者外周血中CD4 IL-17+T細(xì)胞百分率變化

圖2 各組患者CD4 IL-17+T細(xì)胞百分率變化

2.3 右歸丸能顯著抑制 CAA患者血清中Th17細(xì)胞功能細(xì)胞因子的表達(dá)

圖3～5顯示，對(duì)不同治療組患者血清中IL-6、IL-17、IL-23進(jìn)行 ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，2組 CAA患者治療前血清中 IL-6、IL-17、IL-23表達(dá)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但與健康對(duì)照組比較，觀察組患者治療前的 IL-6、IL-17、IL-23表達(dá)均明顯增加(P＜0.01);經(jīng)過右歸丸治療后觀察組的 IL-6、IL-17、IL-23(P＜0.01)表達(dá)顯著低于治療前，也低于對(duì)照組治療后(P＜0.01)。

圖3 ELISA檢測(cè)各組患者IL-17表達(dá)水平比較

2.4 右歸丸降低 p-STAT3以及 RORγt水平上調(diào)SOCS3表達(dá)

圖6表2顯示，Western blot和Real-Time PCR結(jié)果均顯示，CAA患者 p-STAT3以及 RORγ均較健康體檢組表達(dá)升高，而SOCS3則表達(dá)趨勢(shì)相反;結(jié)果顯示，經(jīng)右歸丸作用后，觀察組 p-STAT3與RORγt水平均下降，而 SOCS3表達(dá)較常規(guī)治療明顯上升，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。

圖4 ELISA檢測(cè)各組患者IL-6表達(dá)水平比較

圖5 ELISA檢測(cè)各組患者IL-23表達(dá)水平比較

圖6 3組Western blot結(jié)果比較

3 討論

通過文獻(xiàn)［5-7］我們可知，腎陽虛是CAA的一個(gè)重要證型，故選取腎陽虛型 CAA的臨床治療方案及機(jī)制進(jìn)行探討。CAA屬于中醫(yī)學(xué)“虛勞”“血證”范疇，多種因素影響臟腑造血功能時(shí)均可發(fā)生再障。我們認(rèn)為，精氣內(nèi)奪則積虛成損，積損成勞與腎關(guān)系密切，先天不足導(dǎo)致機(jī)體精血化生無源，而致CAA諸癥，治療可選用右歸丸。本方由熟地黃、附子、肉桂、山藥、山茱萸、菟絲子、鹿角膠、枸杞子、當(dāng)歸、杜仲組成，方中附子、肉桂、鹿角膠為君藥，溫補(bǔ)腎陽、填精補(bǔ)髓，臣藥以熟地黃、枸杞子、山茱萸、山藥滋肝腎之陰，佐以菟絲子陰陽雙補(bǔ);杜仲補(bǔ)益肝腎，強(qiáng)筋壯骨;當(dāng)歸補(bǔ)血養(yǎng)肝，諸藥配合共奏溫腎補(bǔ)陽、填精固髓之功?，F(xiàn)代藥理研究顯示［8］，熟地黃、附子、肉桂可促進(jìn)造血干細(xì)胞的增殖和分化;山藥、枸杞子、山茱萸可延長(zhǎng)體外脾細(xì)胞存活時(shí)間;鹿角膠能增加周圍血液中的紅細(xì)胞的數(shù)量。文獻(xiàn)［9-10］也表明，右歸丸作用于氫化可的松造成“陽虛”小鼠模型后，小鼠能 B淋巴細(xì)胞功能有明顯改善和調(diào)節(jié)，溶血空斑數(shù)明顯增加，小鼠的機(jī)體免疫功能有顯著提高。

表2 RORγ基因變化比較(±s)

表2 RORγ基因變化比較(±s)

注:與健康體檢組比較:*P＜0.05;與對(duì)照組治療后比較:▲P＜0.05

組 別 時(shí) 間 CT(GAPDH) CT(GAPDH) 2-△△CT21.99±1.49 20.90±1.23 1對(duì) 照 組 治療前 28.04±1.28 22.89±1.552.23±0.77*治療后 23.11±1.32 21.77±1.981.24±0.48*觀 察 組 治療前 27.47±2.11 22.46±0.832.48±0.44*治療后 26.01±1.02 21.98±1.831.98±0.51健康對(duì)照組＊▲

Th17細(xì)胞是近年發(fā)現(xiàn)的一種新的不同于Th1、Th2的CD4+T細(xì)胞亞群，因高分泌 IL-17而得名。IL-17屬于促炎效應(yīng)極強(qiáng)的因子，IL-17與受體結(jié)合后可以作用于多種細(xì)胞類型來誘導(dǎo)產(chǎn)生細(xì)胞因子，發(fā)揮著促進(jìn)炎癥發(fā)展、免疫應(yīng)答等多種功能。本研究發(fā)現(xiàn)，CAA患者Th17細(xì)胞數(shù)目遠(yuǎn)高于正常健康對(duì)照組，這一結(jié)果與 deLatour［11］等在2010年發(fā)表的報(bào)道相吻合。經(jīng)過治療后，使用右歸丸的患者雖然外周血 Th17細(xì)胞百分率仍高于健康體檢組，但遠(yuǎn)較對(duì)照組降低(P＜0.05)。提示右歸丸可以抑制 Th17細(xì)胞的異?；罨?，從而避免了機(jī)體自身反應(yīng)性 T淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)，減少對(duì)造血干祖細(xì)胞的破壞。

研究人員［12-13］證實(shí)，信號(hào)傳導(dǎo)子和轉(zhuǎn)錄激活子3(STAT3)在CD4+T細(xì)胞向Th17細(xì)胞的分化過程中起重要作用，通過 STAT3的作用進(jìn)而抑制Th17細(xì)胞的活化聚集。本研究分析 STAT3信號(hào)通路對(duì)CAA患者外周血中Th17細(xì)胞偏倚的作用，發(fā)現(xiàn)CAA患者磷酸化 STAT3水平較健康體檢組高，而通路主要抑制因子SOCS3在CAA患者骨髓中表達(dá)明顯低于健康體檢組，由此認(rèn)為是 STAT3信號(hào)通路的過度激活導(dǎo)致CAA患者初始 CD4+T細(xì)胞向Th17轉(zhuǎn)化。另外我們發(fā)現(xiàn)，CAA患者體內(nèi)IL-6、p-STAT3的水平明顯高于健康對(duì)照組，說明IL-6濃度升高導(dǎo)致了 STAT3過度磷酸化，并在RORγt的作用下導(dǎo)致Th17的偏倚。經(jīng)過治療后，2組患者 IL-6、IL-17、IL-23、p-STAT3以及 RORγt水平均有明顯下降(P＜0.01)，其中使用右歸丸的患者發(fā)生變化的幅度更為明顯 (P＜0.05)。提示在右歸丸的干預(yù)下，STAT3蛋白因子發(fā)生磷酸化受抑制，由此導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)核移位現(xiàn)象減弱，抑制了對(duì)下游相關(guān)基因的誘導(dǎo)，下調(diào)了 RORγt的表達(dá)，從而抑制初始 CD4+T細(xì)胞向 Th17的轉(zhuǎn)化率。SOCS3是近年來新發(fā)現(xiàn)的STAT3信號(hào)通路抑制因子，研究結(jié)果顯示CAA患者SOCS3蛋白水平明顯低于空白對(duì)照組，治療干預(yù)后2組患者SOCS3的表達(dá)均較治療前上調(diào)，說明干預(yù)后可增強(qiáng)SOCS3抑制STAT3信號(hào)通路的能力以達(dá)到病情改善，而使用右歸丸治療的觀察組患者SOCS3表達(dá)上調(diào)更加顯著，表明右歸丸抑制STAT3信號(hào)通路的作用更強(qiáng)，能進(jìn)一步抑制初始 CD4+T細(xì)胞向Th17轉(zhuǎn)化。

綜上所述，我們認(rèn)為STAT3信號(hào)通路過度激活導(dǎo)致Th17轉(zhuǎn)化率增加，促進(jìn)自身反應(yīng)性T淋巴細(xì)胞功能亢進(jìn)，使造血干祖細(xì)胞損傷從而出現(xiàn)CAA，右歸丸通過抑制 STAT3信號(hào)通路磷酸化增強(qiáng) SOCS3表達(dá)，從而達(dá)到部分逆轉(zhuǎn)CAA的發(fā)展并改善其預(yù)后的目的。然而考慮結(jié)果受此次入選樣本量較小、隨訪時(shí)間不長(zhǎng)等因素影響，今后有待增加樣本量，進(jìn)一步研究以證實(shí)右歸丸對(duì)于改善慢性再生障礙性貧血患者的確切機(jī)制及預(yù)后，為指導(dǎo)臨床治療提供參考價(jià)值。

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Observation of the Inhibition of Yougui Pills to Th17 Cells Activation in Patients with Chronic Aplastic Anemia of Kidney Yang Deficiency

GAO Feng1，GUAN Ju-mei1，2，AN Xue-mei2
(1.Sichaun College of Traditional Chinese Medicine 621000，China;2.Chengdu University of Chinese Medicine 610075，China;

To discuss the regulating function of Yougui Pills on Th17/Treg cell function peripheral blood of the patients with kidney-Yang deficiency type of Chronic Aplastic Anemia(CAA).Methods:Intervention were given to the two groups of patients with kidney-Yang deficiency type of CAA，the observation group took Yougui Pills on the basic treatment，and the other were set as the control group，both of the two groups has 30 days treatment，compared the two groups of patients before and after treatment with Th17 cell percentage，and the expression changes of p-STAT3，SOCS3，IL-6，IL-17，IL-23 and RORγt.Results:before the treatment，Th17 cell percentage，and the expression levels of SOCS3，IL-6，IL-17，IL-23，p-STAT3，and RORγt in the peripheral blood of the patients with CAA were much higher than the healthy control，and after the treatment，the indexes above of the observation group lower than the control group，the expression of SOCS3 were contrary to the trendency of the above indexes.Conclusion:Yougui pills plays an important role in the process in inhibiting inflammatory response which mediated by Th17 cells，it plays the role by the inhibition of STAT3 signal，provides therapeutic targets for autoimmune diseases.

Chronic aplastic anemia;Kidney-yang deficiency;Th17 cells;Flow cytometry detecting technology

R285.5

:B

:1006-3250(2016)04-0510-04

2015-06-27

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(30973690)-基于腎陽虛體質(zhì)研究少、長(zhǎng)、壯、老腎陽盛衰的基因調(diào)控;教育部科學(xué)技術(shù)研究重點(diǎn)項(xiàng)目(211158)-右歸丸干預(yù)老齡腎陽虛的甲基化調(diào)控機(jī)制

高 鋒(1978-)，男，四川綿陽人，副教授，醫(yī)學(xué)博士，從事臟腑病機(jī)及辨證規(guī)律與中醫(yī)文獻(xiàn)學(xué)研究。