林建華，梁月英(東莞市鳳崗醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞523690)

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尖銳濕疣患者外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平及其與尖銳濕疣臨床復(fù)發(fā)的關(guān)系

林建華，梁月英
(東莞市鳳崗醫(yī)院檢驗(yàn)科，廣東東莞523690)

摘要：目的探究尖銳濕疣患者外周血T細(xì)胞亞群及NK細(xì)胞水平及其與尖銳濕疣臨床復(fù)發(fā)的關(guān)系。方法選取廣東省東莞市鳳崗醫(yī)院2012年5月-2015年4月期間收治的55例尖銳濕疣患者，將其設(shè)為觀察組，選取同期體檢人員55例，將其設(shè)為對(duì)照組，對(duì)2組人員均采用免疫熒光法對(duì)外周血T細(xì)胞以及NK細(xì)胞水平進(jìn)行檢測(cè)，隨后選擇二氧化碳激光消除病例之后，患者應(yīng)進(jìn)行復(fù)查，并進(jìn)行為期3個(gè)月的隨訪。結(jié)果經(jīng)隨訪后，共復(fù)發(fā)37例患者，復(fù)發(fā)率為67.27%，同時(shí)對(duì)比觀察組以及對(duì)照組的CD4+、CD8+、NK以及CD4+/CD48，且比較復(fù)發(fā)以及未復(fù)發(fā)患者的CD8+與CD4+/CD48，以P＜0.05為差異。結(jié)論尖銳濕疣患者具有細(xì)胞免疫缺陷現(xiàn)象，同時(shí)高危型的HPV感染患者具有較高的免疫缺陷風(fēng)險(xiǎn)，而通過(guò)檢查后發(fā)現(xiàn)CD8+T細(xì)胞以及CD4+/CD8+能夠有效的判斷尖銳濕疣患者的預(yù)后狀況。

關(guān)鍵詞：尖銳濕疣；外周血T細(xì)胞亞群；NK細(xì)胞

尖銳濕疣是因?yàn)镠PV感染而引發(fā)的上皮乳頭瘤樣增生，其主要傳播途徑為性接觸，少數(shù)患者會(huì)通過(guò)間接接觸而產(chǎn)生傳染[1]。此病的發(fā)病率在近幾年來(lái)逐年呈現(xiàn)上升趨勢(shì)[2]。

1　資料與方法

1.1一般資料選取廣東省東莞市鳳崗醫(yī)院2012年5月-2015年4月期間收治的55例尖銳濕疣患者，將其設(shè)為觀察組，男32例，女13例，年齡25~ 68歲，平均40.3±6.4歲?；颊呔嬖谝欢ǔ潭壬系钠ふ睿颊叩陌l(fā)病位置則為尿道口、陰道以及包皮等位置處。在所有患者中，HPV6/11單一型例數(shù)為32例，HPV16/18單一型例數(shù)為9例，HPV6/11型以及16/18合并感染型為14例。同時(shí)選擇取同期體檢人員55例，將其設(shè)為對(duì)照組，其中男30例，女20例，年齡26~67歲，平均39.7±5.7歲。2組人員均未產(chǎn)生自身免疫性疾病以及嚴(yán)重慢性疾病，并已簽署知情同意書(shū)。對(duì)比2組患者的一般資料，P＞0.05。

1.2方法采用流式細(xì)胞分析儀以及試劑盒對(duì)淋巴細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)。采取2組檢測(cè)人員的肘靜脈血（2ml），并將血液放置在抗凝管中。并選擇兩支樣管，將其標(biāo)注樣本編號(hào)，并在樣管中標(biāo)注A、B字樣。將20μlCD3/CD8/CD4/CD4加入到A管中，同時(shí)將20μlCD3/CD16+56/CD45/CD19加入到B管中。隨后采用反向加樣法在A管以及B管中加入已經(jīng)混勻的抗凝全血（50μl），并避光放置15min，此外向每管中增加450μl的FACS溶血素，當(dāng)充分搖勻之后，在避光位置處放置15min，隨后采用流式細(xì)胞儀對(duì)其進(jìn)行檢測(cè)，從而獲取最終結(jié)果。

1.3復(fù)查以及隨訪[3]每個(gè)病例活檢組織樣本應(yīng)采用二氧化碳激光將肉眼可以見(jiàn)到的疣體進(jìn)行清除?；颊咴谥委熀笮枰扛魞芍苓M(jìn)行一次復(fù)查，如果在以往的治療位置以及周邊1cm中所產(chǎn)生的新疣體，則為復(fù)發(fā)，詳細(xì)的觀察新產(chǎn)生的疣體，并采用激光進(jìn)行治療。治療后，進(jìn)行為期3個(gè)月的隨訪，對(duì)患者復(fù)發(fā)次數(shù)以及例數(shù)進(jìn)行相應(yīng)的統(tǒng)計(jì)。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理選用SPSS 21.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)研究中的數(shù)據(jù)進(jìn)行分析以及處理，研究結(jié)果采用計(jì)數(shù)資料以及計(jì)量資料進(jìn)行表示，結(jié)果則通過(guò)卡方以及T值進(jìn)行檢測(cè)，組間以P＜0.05為差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2　結(jié)果

2.1病例復(fù)發(fā)次數(shù)以及復(fù)發(fā)率經(jīng)過(guò)3個(gè)月的隨訪，共復(fù)發(fā)例數(shù)為37例，復(fù)發(fā)率為67.27%；而6/11單一型的復(fù)發(fā)例數(shù)為32例，16/18單一型的復(fù)發(fā)例數(shù)為9例，6/11/16/18的復(fù)發(fā)例數(shù)為10例，3種類型經(jīng)過(guò)比較以P＜0.05為差異，詳見(jiàn)表1。

表1　病例復(fù)發(fā)次數(shù)以及復(fù)發(fā)率的分布結(jié)果

2.2對(duì)比2組檢測(cè)人員外周血部分淋巴細(xì)胞周群的檢測(cè)結(jié)果對(duì)2組人員的外周血部分淋巴細(xì)胞周群進(jìn)行檢測(cè)，其2組間CD3+通過(guò)對(duì)比P＞0.05無(wú)差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而對(duì)比2組CD4+、CD8+、NK以及CD4+/CD48以P＜0.05為差異，詳見(jiàn)表2。

2.3對(duì)比復(fù)發(fā)以及未復(fù)發(fā)患者外周血部分淋巴細(xì)胞周群的檢測(cè)結(jié)果對(duì)患者進(jìn)行檢測(cè)后，其復(fù)發(fā)患者的CD3+、CD4+以及NK與未復(fù)發(fā)患者進(jìn)行對(duì)比，無(wú)顯著差異，不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05；而對(duì)比復(fù)發(fā)患者與未復(fù)發(fā)患者的CD8+以及CD4+/CD48，以P＜0.05為差異，詳見(jiàn)表3。

表2　對(duì)2組檢測(cè)人員外周血部分淋巴細(xì)胞周群的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比

表3　對(duì)復(fù)發(fā)以及未復(fù)發(fā)患者外周血部分淋巴細(xì)胞周群的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比

3　討論

人體是否可以抵抗HPV局部感染則依靠于人體是否能夠在感染過(guò)程中形成較為強(qiáng)大的免疫應(yīng)答，而輔助性T細(xì)胞亞群（Th1/Th2）在抗HPV免疫中具有一定的重要意義[4，5]。而Th1/Th2的比值能夠進(jìn)行動(dòng)態(tài)維持，從而確保機(jī)體中的免疫功能得以正常進(jìn)行。此外，在病毒、腫瘤進(jìn)行清除以及誘導(dǎo)免疫耐受等相關(guān)內(nèi)容具有一定的重要原因[6，7]。大量的臨床研究表明，伴隨患者病情的不斷加深，HPV感染患者體中的Th1以及Th2間所存在的平衡狀態(tài)被消除，也就是Th1/Th2會(huì)產(chǎn)生漂移現(xiàn)象。然而當(dāng)機(jī)體中產(chǎn)生參加到抗體介導(dǎo)的Th2細(xì)胞應(yīng)答時(shí)，其CD8+T細(xì)胞與自身產(chǎn)生的IL-4、IL-5等Th2型細(xì)胞因子具有一定的優(yōu)勢(shì)，會(huì)對(duì)細(xì)胞免疫存在一定的免疫抑制性，同時(shí)會(huì)使CD4+T細(xì)胞的增殖產(chǎn)生一定的分化抑制現(xiàn)象，IL-2以及IFNγ的分泌現(xiàn)象逐漸緩解，使得HPV病情發(fā)展過(guò)快，致使機(jī)體對(duì)病毒產(chǎn)生相應(yīng)的耐受作用[8]。

在此研究中，對(duì)患者采用特異性熒光抗體進(jìn)行標(biāo)記，選擇流式細(xì)胞儀對(duì)55例患者外周血T細(xì)胞亞群進(jìn)行檢測(cè)，而通過(guò)檢測(cè)能夠看出，觀察組患者的CD4+T以及CD4+/CD8+比值明顯小于對(duì)照組，同時(shí)CD8+T細(xì)胞明顯大于對(duì)照組；此外，CD4+/CD8+比值明顯低于未復(fù)發(fā)的患者，但是對(duì)比CD3+T以及CD4+T后，無(wú)顯著差異，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

就目前而言，經(jīng)驗(yàn)有學(xué)者通過(guò)研究證明高危型HPV16/18型感染的患者其體重具有CTL水平經(jīng)誘導(dǎo)后所出現(xiàn)的耐受現(xiàn)象，因此具有較高的復(fù)發(fā)率[9]。而此研究經(jīng)過(guò)分析后發(fā)現(xiàn)，低危型HPV6/ 11單一感染患者的復(fù)發(fā)次數(shù)明顯少于單一或者混合型HPV16/18的患者，同時(shí)CD8+T細(xì)胞明顯少于后者，與此同時(shí)外周血CD4+/CD8+的比值明顯大于后者。所以，在確定尖銳濕疣疾病發(fā)生、復(fù)發(fā)以及預(yù)后的重要環(huán)節(jié)中，Th1以及Th2細(xì)胞間所產(chǎn)生的作用被損害，也就是說(shuō)降低CD4+/CD8+的比值具有一定的重要作用，會(huì)在引發(fā)細(xì)胞免疫缺陷的整個(gè)過(guò)程中，其CD8+T細(xì)胞的提升明顯比CD4+T細(xì)胞的減少更具有意義[10]。為此，我們認(rèn)為由于CD8+T細(xì)胞自身所發(fā)生的免疫抑制性細(xì)胞對(duì)CD4+T細(xì)胞在功能上起到一定的抑制效果，而這種效果則比數(shù)量上的抑制存在更為顯著的關(guān)系[11]。HPV6/11型感染患者就較高的CD4+/CD8+比值，并對(duì)機(jī)體起到一定的誘發(fā)作用，從而產(chǎn)生一定強(qiáng)度的細(xì)胞免疫反應(yīng)，而和HPV16/18型感染的患者相比較而言，其CD4+/CD8+比值并不高，所以會(huì)產(chǎn)生免疫耐受現(xiàn)象[12]。

NK細(xì)胞以及活化NK細(xì)胞的逐漸減少能夠使降低人體中抵抗病毒的能力。而患者體中的NK細(xì)胞自身所具有的活性是通過(guò)CD4+T細(xì)胞所分泌出的IL-2以及IFNγ實(shí)行調(diào)節(jié)的[8，13]。在此研究中，尖銳濕疣患者外周血NK細(xì)胞的比例明顯少于對(duì)照組患者，然而在復(fù)發(fā)以及未復(fù)發(fā)的患者中并無(wú)顯著差異[14]。所以，在對(duì)此疾病產(chǎn)生影響的原因中，NK細(xì)胞所具備的活性明顯重要于細(xì)胞的數(shù)量。曾有學(xué)者經(jīng)過(guò)研究后發(fā)現(xiàn)尖銳濕疣患者外周血中的NK細(xì)胞其IL-2的表達(dá)能力呈現(xiàn)下降趨勢(shì)，同時(shí)經(jīng)過(guò)研究證明，觀察組患者中的IL-2如果呈現(xiàn)加強(qiáng)趨勢(shì)，其復(fù)發(fā)率以及平均復(fù)發(fā)次數(shù)也會(huì)隨之降低，兩者所表現(xiàn)出的則是負(fù)相關(guān)[15]。

綜上所述，對(duì)患有尖銳濕疣患者采用相關(guān)檢測(cè)方法，按照檢測(cè)后的最終結(jié)果來(lái)選擇治療方法，以此來(lái)提升臨床治療效果，大大降低了復(fù)發(fā)率以及復(fù)發(fā)次數(shù)，同時(shí)將患者的病程時(shí)間減少，消除患者在治療過(guò)程中所產(chǎn)生的心理負(fù)擔(dān)以及壓力。然而對(duì)沒(méi)有產(chǎn)生復(fù)發(fā)指征的患者而言，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行局部治療，以免因?yàn)檫^(guò)度醫(yī)療而使患者產(chǎn)生負(fù)擔(dān)，或者增加了復(fù)發(fā)的幾率。

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(收稿日期2015-09-28；修回日期2015-11-12)

作者簡(jiǎn)介：林建華，男，1976年6月生，副主任技師，學(xué)士，研究方向：復(fù)發(fā)性尖銳濕疣與免疫系統(tǒng)的相關(guān)研究。

DOI：10.3969/j.issn.1674-1129.2016.01.011

中圖分類號(hào)：R446.62，R752.5+2

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1674-1129(2016)01-0031-03