楊瑜婧，仝林虎

膽囊癌組織淋巴管標(biāo)記物D2-40和LYVE-1表達(dá)的臨床意義*

楊瑜婧，仝林虎

目的探討膽囊癌組織淋巴管標(biāo)記物D2-40和淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體-1（LYVE-1）表達(dá)的臨床意義。方法自2014年1月至2015年12月前瞻性收集膽囊癌患者50例和膽囊結(jié)石患者膽囊組織50例。采用免疫組化法檢測(cè)D2-40和LYVE-1表達(dá)，并分析其與腫瘤轉(zhuǎn)移的關(guān)系。結(jié)果癌周組織、癌組織和膽結(jié)石膽囊組織D2-40陽性率分別為84.0%、64.0%和6.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），LYVE-1陽性率分別為76.0%、56.0%和4.0%，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；9例臨床分期Ⅰ期、13例Ⅱ期、17例Ⅲ期和11例Ⅳ期膽囊癌組織D2-40陽性率分別為33.3%、84.6%、100.0%和100.0%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），LYVE-1陽性率分別為22.2%、69.2%、94.1%和100.0%，差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；11例存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織D2-40和LYVE-1陽性率分別為100.0%和100.0%，顯著高于39例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移組織的61.9%和42.9%（P＜0.01）；在11例存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移癌組織D2-40和LYVE-1陽性率分別為100.0%和100.0%，顯著高于39例無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的79.5%和62.9%（P＜0. 01）；在16例高分化、21例中分化和13例低分化患者，癌組織D2-40陽性率分別為68.8%、90.5%和92.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01），LYVE-1陽性率分別為50.0%、85.7%和92.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。結(jié)論膽囊癌組織淋巴管標(biāo)記物D2-40和LYVE-1陽性率明顯升高，可能與腫瘤轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)。

膽囊癌；淋巴管標(biāo)記物；D2-40；淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體-1；轉(zhuǎn)移

膽囊癌組織淋巴管密度可能是膽囊癌轉(zhuǎn)移的一個(gè)預(yù)測(cè)指標(biāo)，與患者臨床預(yù)后緊密相關(guān)[1～3]。侵襲和轉(zhuǎn)移是腫瘤最主要的特征[4，5]。研究顯示，D2-40和淋巴管內(nèi)皮透明質(zhì)酸受體-1（LYVE-1）診斷腫瘤具有較強(qiáng)的敏感性和特異性[6～9]。本研究旨在探討膽囊癌組織淋巴管標(biāo)記物D2-40和LYVE-1表達(dá)與腫瘤轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1 一般資料前瞻性收集2014年1月至2015年12月我院手術(shù)切除且經(jīng)病理學(xué)檢查確診的膽囊癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：年齡大于或等于18歲，且小于或等于65歲。排除標(biāo)準(zhǔn)：存在其他部位腫瘤或有其他部位腫瘤病史、原發(fā)性臟器功能不全、重度營養(yǎng)不良、治療期間發(fā)生與膽囊癌無關(guān)的嚴(yán)重的新病情、轉(zhuǎn)診患者、術(shù)前行放療、化療或免疫治療者。在研究期間，共收集符合納入標(biāo)準(zhǔn)的患者74例，其中1例因2年前存在乳腺癌，1例存在原發(fā)性肝功能不全，1例重度營養(yǎng)不良，5例不同意參與本研究，1例治療期間因心室顫動(dòng)和休克轉(zhuǎn)入ICU治療，11例為轉(zhuǎn)診患者，4例術(shù)前行化療和免疫治療而被排除，最終納入患者50例（男性32例，女性18例；平均年齡54.79±11.73歲）。根據(jù)美國癌癥聯(lián)合委員會(huì)癌癥分期指南，本組腫瘤臨床分期為Ⅰ期9例，Ⅱ期13例，Ⅲ期17例，Ⅳ期11例；合并淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例（膽囊管淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移29例，膽總管周圍淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移14例，肝內(nèi)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移9例，遠(yuǎn)處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移5例，其中14例合并多處淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移），無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移21例；腫瘤細(xì)胞分化程度為高分化16例，中分化21例，低分化13例；合并遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移11例（其中7例合并肝轉(zhuǎn)移，5例合并肺轉(zhuǎn)移，2例合并胃轉(zhuǎn)移，其中3例合并多處轉(zhuǎn)移），無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移39例。同時(shí)納入因膽囊結(jié)石行膽囊切除術(shù)患者50例（男性34例，女性16例，平均年齡55.12± 10.94歲）。兩組研究對(duì)象性別、年齡差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0. 05）。所有患者對(duì)本研究均知情同意并簽署知情同意書，本研究通過我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 組織標(biāo)志物檢測(cè)取術(shù)中組織，行石蠟包埋，切片，HE染色。采用免疫組化法檢測(cè)D2-40，使用的抗D2-40抗體來源于上?；蚬荆寺√?hào)為D2-40，工作濃度為1：100。D2-40陽性標(biāo)準(zhǔn)：（1）可見染色的內(nèi)皮細(xì)胞簇；（2）染色的內(nèi)皮細(xì)胞成條狀；（3）染色的隙狀結(jié)構(gòu)或形成管腔。滿足以上三條中的任1條即定義為D2-40陽性，無著色則認(rèn)為D2-40陰性。采用免疫組化法檢測(cè)LYVE-1，使用的抗LYVE-1抗體來源于英國Abcam公司，工作濃度為1：50。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法所有數(shù)據(jù)分析均應(yīng)用SPSS 22.0統(tǒng)計(jì)軟件完成，P值小于0.05被認(rèn)為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（雙側(cè)檢驗(yàn)）。分類資料均采用卡方檢驗(yàn)完成統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

2.1 膽囊癌組織淋巴標(biāo)記物表達(dá)情況見圖1和圖2。

圖1 膽囊癌組織D2-40陽性淋巴管（SP，100×）

圖2 膽囊癌組織LYVE-1陽性淋巴管（SP，100×）

2.2 膽囊結(jié)石膽囊和膽囊癌組織D2-40和LYVE-1陽性率比較癌周組織、癌組織和膽結(jié)石組織D2-40陽性率和LYVE-1陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01，表1）。

表1 兩組膽囊組織D2-40和LYVE-1陽性率（%）比較

2.3 不同臨床分期膽囊癌組織D2-40和LYVE-1陽性率比較見表2。

表2 不同臨床分期膽囊癌組織D2-40和LYVE-1陽性率（%）比較

2.4 有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移膽囊癌組織D2-40和LYVE-1陽性率比較在11例存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者，D2-40和LYVE-1陽性率分別為100.0%和100.0%，顯著高于39例無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的61.9%和42.9%（P＜0.01）。

2.5 有無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移膽囊癌組織D2-40和LYVE-1陽性率比較在11例存在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的患者D2-40和LYVE-1陽性率分別為100.0%和100.0%，顯著高于39例無遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的79.5%和62.9%（P＜0.01）。

2.6 不同腫瘤細(xì)胞分化程度癌組織D2-40和LYVE-1陽性率比較在16例高分化、21例中分化和13例低分化患者，癌組織D2-40陽性率分別為68.8%、90.5%和92.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；LYVE-1陽性率分別為50.0%、85.7%和92.3%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）。

3 討論

淋巴管轉(zhuǎn)移是膽囊癌轉(zhuǎn)移的主要途徑之一。鑒于淋巴管轉(zhuǎn)移在腫瘤患者發(fā)生和發(fā)展中的重要性，目前國內(nèi)外學(xué)者越來越重視淋巴管標(biāo)志物的研究。LYVE-1和D2-40是近些年來發(fā)現(xiàn)的兩個(gè)重要的淋巴管標(biāo)志物。有研究顯示組織D2-40表達(dá)與宮頸癌轉(zhuǎn)移明顯相關(guān)[10]。本研究納入50例膽囊癌患者和50例膽囊結(jié)石患者，結(jié)果發(fā)現(xiàn)D2-40和LYVE-1陽性率與組織類型、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移和腫瘤細(xì)胞分化程度均緊密相關(guān)。2014年Hata et al發(fā)現(xiàn)淋巴管肉瘤與D2-40和LYVE-1表達(dá)緊密相關(guān)[7]，類似的研究還有很多[11-15]。既往初診的膽囊癌患者僅有25%屬于早期，而隨著內(nèi)窺鏡技術(shù)的發(fā)展，膽囊癌的早期診斷率有所提高。隨著內(nèi)窺鏡技術(shù)的發(fā)展，內(nèi)鏡下手術(shù)切除膽囊癌成為可能，但是這種微創(chuàng)手術(shù)必須明確患者是否存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。本研究證實(shí)了D2-40和LYVE-1陽性與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移相關(guān)。

本研究的主要優(yōu)點(diǎn)是一個(gè)前瞻性的臨床研究，有嚴(yán)格的納入標(biāo)準(zhǔn)和排除標(biāo)準(zhǔn)。另外，有關(guān)D2-40和LYVE-1的研究較少，尚未有臨床研究探討D2-40和LYVE-1表達(dá)與膽囊癌及其淋巴轉(zhuǎn)移的關(guān)聯(lián)性，因此本文具有一定的創(chuàng)新性。

[1]Henley SJ，Weir HK，Jim MA，et al.Gallbladder cancer incidence and mortality，United States 1999-2011.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2015，24（9）:1319-1326.

[2]Ma N，Cheng H，Qin B，et al.Adjuvant therapy in the treatment of gallbladder cancer:a Meta-analysis.BMC Cancer，2015，15（3）:615-621.

[3]Kuzumi H，Okabe S，Noda H，et al.Diagnosis and treatment of gallbladder cancer.Nihon Shokakibyo Gakkai Zasshi，2015，112（3）:474-493.

[4]Kawakami H，Kuwatani M，Sakamoto N.Multidiscip linary treatment of gallbladder cancer-biliary and duodenal stenting.Nihon Rinsho，2015，73（3）:595-600.

[5]Katayose Y，Hayashi H，Unno M.Treatment strategy of the gallbladder cancer.Nihon Rinsho，2015，73（Suppl 2）:572-575.

[6]Hong H，He C，Zhu S，et al.CCR7 mediates the TNF-alpha-induced lymphatic metastasis of gallbladder cancer through the“ERK1/2-AP-1”and“JNK-AP-1”pathways.J Exp Clin Cancer Res，2016，35（1）:51-58.

[7]Hata H，Aoyagi S，Homma E，et al.Lymphangiosarcoma with strong positivity of D2-40 and LYVE-1 presenting different clinical features from angiosarcoma.J Dermatol，2014，41（7）: 656-657.

[8]Rudno-Rudzinska J，Kielan W，Grzebieniak Z，et al.High density of peritumoral lymphatic vessels measured by D2-40/podoplanin and LYVE-1 expression in gastric cancer patients:an excellent prognostic indicator or a false friend? Gastric Cancer，2013，16（4）:513-520.

[9]Heinzelbecker J，Kempf KM，Kurz K，et al.Lymph vessel density in seminomatous testicular cance r assessed with the specific lymphatic endothelium cell markers D2-40 and LYVE-1:correlation with pathologic parameters and clinical outcome.Urol Oncol，2013，31（7）:1386-1394.

[10]柴紅娟，施薇，杜光燁，等.D2-40在宮頸癌淋巴管生成、淋巴管浸潤(rùn)中的臨床意義.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志，2014，30（12）:2019-2020.

[11]Rakocevic J，Kojic S，Orlic D，et al.Co-expression of vascular and lymphatic endothelial cell markers on early endothelial cells present in aspirated coronary thrombi from patients with ST-elevation myocardial infarction.Exp Mol Pathol，2016，100（1）:31-38.

[12]O TM，Lou MS，Ma Y.Zinc effect on human lymphatic malformation cells in vitro.Int J Pediatr Otorhinolaryngol，2016，80（5）:33-38.

[13]Yang X，Zhai N，Sun M，et al.Influence of lymphatic endothelial cells on proliferation and invasiveness of esophageal carcinoma cells in vitro and lymphangiogenesis in vivo.Med Oncol，2015，32（8）:222-228.

[14]Li XP，Jing W，Sun JJ，et al.A potential small-molecule synthetic antilymphangiogenic agent norcantharidin inhibits tumor growth and lymphangiogenesis of human colonic adenocarcinomas through blocking VEGF-A，-C，-D/VEGFR-2，-3“multi-points priming”mechanisms in vitro and in vivo.BMC Cancer，2015，15（2）:527-531.

[15]Koina ME，Baxter L，Adamson SJ，et al.Evidence for lymphatics in the developing and adult human choroid.Invest Ophthalmol Vis Sci，2015，56（2）:1310-1327.

（收稿：2016-05-20）

（本文編輯：陳宗炳）

Im plication of D 2-40 and LYVE-1 expression in gallbladder cancer

Yang Yuqian，Tong Linhu.
Department of General Surgery，Affiliated Hospital，Inner Mongolia Medical University，Huhhot 010050，Inner Mongolia Autonomous Region，China

Gallbladder cancer；Lymphatic markers；D2-40；LYVE-1；Metastasis

10.3969/j.issn.1672-5069.2016.06.032

*基金名稱：內(nèi)蒙古自治區(qū)教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目（編號(hào)：NJZY11129）

010050呼和浩特市內(nèi)蒙古醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院普外科

楊瑜婧，女，34歲，大學(xué)本科，主管護(hù)師

仝林虎，E-mail：tonglinhu@163.com