周麗梅/銅川市動物疫病預(yù)防控制中心

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實驗室檢測技術(shù)在動物疫病防控中的應(yīng)用

周麗梅/銅川市動物疫病預(yù)防控制中心

一、實驗室檢測的意義

動物疫病監(jiān)測是動物、動物產(chǎn)品質(zhì)量的重要保證，有法定的機(jī)構(gòu)和人員按國家規(guī)定的動物防疫標(biāo)準(zhǔn)，依法制定程序、方法和標(biāo)準(zhǔn)，對動物、動物產(chǎn)品及有關(guān)物品進(jìn)行定期或不定期的檢查和檢測，并依據(jù)監(jiān)測結(jié)果進(jìn)行處理的一種措施。動物疫病監(jiān)測是動物防控工作的重要組成部分，可為國家制定動物疫病預(yù)防控制規(guī)劃和疫病預(yù)警提供科學(xué)的依據(jù)，同時對動物保健咨詢以及輸出動物及其產(chǎn)品無害狀態(tài)的保證等具有非常重要的意義。

二、實驗室檢測的作用

（一）免疫評估

監(jiān)測免疫效果利用血清學(xué)試驗，監(jiān)測動物免疫效果是預(yù)防動物疫病的重要手段，通過免疫抗體監(jiān)測，可得知畜群免疫抗體水平和疫苗質(zhì)量、疫苗接種方案的效果，從而達(dá)到判定選用的疫苗是否質(zhì)量可靠、免疫方式是否確鑿有效、免疫程序是否合理等目的。通過綜合評估分析，可提醒廣大養(yǎng)殖業(yè)者對養(yǎng)殖過程中存在某些隱患引起注意，并采取有效防范措施。修訂免疫程序：到目前為止，有不少養(yǎng)殖場戶的免疫程序是借鑒別人的，因不同地區(qū)，不同動物群體，顯然存在差異，并非適用本場戶。長期的臨床實踐告知我們恰當(dāng)?shù)拿庖呓臃N時間往往是有效免疫的關(guān)鍵，在使用疫苗尤其是活苗的時候，一定要考慮母源抗體(MDA)的影響，最可靠和可行的方法就是通過血清學(xué)檢測來測定母源抗體的消長水平，確定首免最佳時機(jī)，當(dāng)母源抗體水平下降到臨界值時進(jìn)行免疫接種效果最佳，當(dāng)母源抗體水平過高時進(jìn)行免疫會中和抗原導(dǎo)致免疫失敗，但過低而未能及時免疫則會形成免疫空白期，給動物群體造成嚴(yán)重的潛在隱患，因此定期進(jìn)行群體監(jiān)測，制訂適合本場戶的免疫程序，非常必要。

（二）動物疫病監(jiān)測

目前，實驗室檢測已經(jīng)成為動物疾病診斷和控制不可缺少的重要手段之一，如何科學(xué)實施實驗室監(jiān)測也成為規(guī)?；B(yǎng)殖場關(guān)注的焦點，只有廣大養(yǎng)殖業(yè)者在科學(xué)飼養(yǎng)管理的基礎(chǔ)上，提高對動物群體進(jìn)行疫病監(jiān)測的認(rèn)識，有效預(yù)防動物疫病，才能提高養(yǎng)殖效益。首先，各養(yǎng)殖場要積極主動地按照科學(xué)免疫程序進(jìn)行免疫，通過實驗室定期的、分階段、分群體的監(jiān)測來了解健康畜群的免疫狀態(tài)和主要動物疫病的免疫效果，提高動物疫病防疫能力。例如許多病原的侵襲，對成年動物或抗體水平高的畜群僅僅引起抗體的變化，而對幼畜或者抗體水平低下或不齊的群體則有發(fā)病的危險；其次，通過開展動物疫病病原監(jiān)測和流行病學(xué)調(diào)查，全面掌握主要動物疫病的病原分布和流行趨勢，急時分析評估動物疫情，把握疫情動態(tài)，科學(xué)判斷防控形勢。當(dāng)養(yǎng)殖場受到某種病原攻擊時，實驗室利用血清學(xué)檢測方法，將檢測結(jié)果與該養(yǎng)殖場的免疫、發(fā)病和用藥情況等資料結(jié)合進(jìn)行分析，做出比較科學(xué)、專業(yè)的檢測報告和分析意見，切實為規(guī)模養(yǎng)殖場的生產(chǎn)管理和疾病控制提供科學(xué)的參考。

（三）動物疫情預(yù)警

各級畜牧獸醫(yī)工作者要對本地區(qū)主要動物疫病逐村逐戶逐場進(jìn)行免疫監(jiān)督，才能確保防疫落實到位，對疫情隱患做到及時發(fā)現(xiàn)，盡早處理；不同的疫病有不同的發(fā)生、發(fā)展規(guī)律，免疫接種前首先進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查，了解當(dāng)?shù)丶爸苓叺貐^(qū)的疫病流行種類、流行范圍、流行特點，然后制定適合本地區(qū)或本場的免疫計劃，在免疫程序?qū)嵤┻^程中，隨時觀察免疫效果，建立免疫監(jiān)測制度，切實做好動物疫病的預(yù)防免疫工作。同時在引進(jìn)或調(diào)出活體動物時做好檢疫工作、把好檢疫關(guān)，做到禽不漏批、豬不漏場、牛不漏村、羊不漏群，確保動物免疫證和檢疫證等證完備齊全尤其必要，采取有效措施，減少病原傳播的機(jī)會。按照農(nóng)業(yè)部有關(guān)規(guī)定實施疫情零報告制度，提高疫情預(yù)警，預(yù)報能力，一旦發(fā)現(xiàn)有異常，要做到早檢測，早診斷，采取正確的措施來減少疫病帶來的危害。開展預(yù)警預(yù)報工作，為科學(xué)防控提供技術(shù)支持。各地應(yīng)根據(jù)所轄區(qū)域動物疫病流行特點及防控情況，積極推進(jìn)動物疫病區(qū)域化管理工作，有針對性地開展動物疫病監(jiān)測工作，探索主要動物疫病凈化模式。

（四）疾病凈化

實驗室監(jiān)測包括疫病診斷分析(抗原檢測)以及常規(guī)血清學(xué)監(jiān)測(抗體檢測)，對規(guī)模化養(yǎng)殖場側(cè)重于定期的常規(guī)監(jiān)測，只有搞好疫病監(jiān)測，掌握疫情動態(tài)，及時發(fā)現(xiàn)隱患，及早防控才是最重要的。到目前為止已研制出許多抗原檢測的商品試劑盒、能夠區(qū)分野毒和免疫抗體的監(jiān)測方法，如豬瘟抗原檢測ELISA 試劑盒能夠直接檢測到豬瘟病毒的抗原成分，口蹄疫3ABC 抗體檢測試劑盒能夠?qū)⒚庖呖贵w和野毒抗體很好地區(qū)分，另外口蹄疫也可以通過非結(jié)構(gòu)蛋白ELISA 方法區(qū)分野毒感染動物和疫苗注射動物。血清學(xué)試驗用于疫病凈化的經(jīng)典案例是豬偽狂犬病。在基因缺失疫苗應(yīng)用的基礎(chǔ)上，我們利用血清學(xué)方法可以區(qū)分疫苗注射動物和野毒感染動物，歐盟許多國家以及美國的凈化已經(jīng)取得成功，在中國通過極其類似的根除方案，對偽狂犬病進(jìn)行凈化同樣也獲得成功。隨著生物工程技術(shù)的發(fā)展，標(biāo)記疫苗和鑒別診斷技術(shù)將得到更廣泛的應(yīng)用，這也將極大促進(jìn)重大疫病的根除與消滅進(jìn)程。

三、實驗室常用檢測技術(shù)

（一）組織病理學(xué)檢測技術(shù)

利用病理學(xué)和免疫學(xué)技術(shù)，對染病組織進(jìn)行切片觀察和免疫組化染色，開展對動物疫病病原的特異性診斷工作。包括病理學(xué)技術(shù)和免疫病理學(xué)技術(shù)。

1.病理學(xué)診斷技術(shù)。利用疫病引起的動物組織發(fā)生特征性的病變和基本病理變化對動物疫病進(jìn)行診斷。

2.免疫病理學(xué)檢測技術(shù)。免疫組織化學(xué)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)，是免疫學(xué)與組織（細(xì)胞）化學(xué)結(jié)合的一個分支學(xué)科，以免疫學(xué)的抗原、抗體反應(yīng)為理論基礎(chǔ)。主要原理是用標(biāo)記的抗體（或抗原）對細(xì)胞、組織內(nèi)的相應(yīng)抗原（或抗體）進(jìn)行定性、定位或定量檢測，經(jīng)過組織化學(xué)的呈色之后，用顯微鏡、熒光顯微鏡或電子顯微鏡觀察結(jié)果。

（二）血清學(xué)檢測技術(shù)

血清學(xué)檢測技術(shù)是建立在抗原與相應(yīng)抗體在體外發(fā)生特異性結(jié)合反應(yīng)基礎(chǔ)上的檢測技術(shù)，隨著科學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展和提高，血清學(xué)抗體檢測新技術(shù)層出不窮，應(yīng)用面也日益擴(kuò)大。如病毒中和試驗、血凝和血凝抑制試驗、瓊脂凝膠擴(kuò)散試驗、血清平板和試管凝集試驗、免疫膠體金層析技術(shù)、酶聯(lián)免疫吸附試驗等，這些試驗方法已被大多數(shù)實驗室熟練掌握應(yīng)用。如布病采用平板或試管凝集試驗，禽流感和新城疫采用血凝和血凝抑制試驗，豬瘟和口蹄疫采用間接血凝試驗；采用ELISA 試驗檢測禽流感、豬瘟、口蹄疫等疫病，養(yǎng)殖場也可采用血凝試驗和免疫金標(biāo)技術(shù)來檢測免疫抗體滴度，操作簡便快速，使抗體監(jiān)測技術(shù)真正得以推廣,切實為動物疫病防控提供有力的幫助。

（三）分子生物學(xué)檢測技術(shù)

利用分子生物學(xué)技術(shù)，建立對動物疫病病原基因的檢測方法，用于動物疫病特異性快速診斷和病原基因變異進(jìn)行分析，及時準(zhǔn)確掌握動物疫病分子流行病學(xué)動態(tài)，為疫病防治提供基因理論分析依據(jù)。在獸醫(yī)實驗室診斷中，聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）較為常用。它是一種體外快速擴(kuò)增DNA的技術(shù)。通過PCR可以簡便、快速地從微生物材料中通過體外擴(kuò)增的方式活動大量特定的核酸，可用微量樣品的檢測。一個PCR反應(yīng)一般只需4小時就可完成。

（四）病原學(xué)檢測技術(shù)

運(yùn)用現(xiàn)代微生物學(xué)和細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，開展動物病毒、細(xì)菌、寄生蟲等致病性微生物的分離、培養(yǎng)和鑒定工作。在對被檢動物可能患有何種細(xì)菌性疫病做出初步診斷后，需要采取病料分離鑒定病原菌以便最后確診。此過程包括細(xì)菌分離與接種、細(xì)菌的培養(yǎng)、細(xì)菌的鑒定等。病毒分離與鑒定是病毒性疫病檢測、診斷和流行病學(xué)調(diào)查的重要方法之一。寄生蟲病的檢測方法和其它傳染病的檢測有一定的區(qū)別，由于其獨特的發(fā)育史，決定了其檢測方法的特殊性。除了一般的流行病學(xué)調(diào)查和臨診檢查外，其定性的實質(zhì)性方法有蟲卵檢查法、蟲體檢查法、免疫學(xué)檢測方法、分子生物學(xué)檢測方法。