初　陽(yáng),李　蕾,丁一航，姜明燕*

1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部,沈陽(yáng) 1100-01;2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110001;3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110016;4.大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,大連 116044

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二氧化鈦馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏劑的制備和抗過(guò)敏作用初探

初陽(yáng)1,2,李蕾3,丁一航4，姜明燕1,2*

1.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院藥學(xué)部,沈陽(yáng) 1100-01;2.中國(guó)醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110001;3.沈陽(yáng)藥科大學(xué)藥學(xué)院,沈陽(yáng) 110016;4.大連醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院,大連 116044

[摘要]目的優(yōu)選二氧化鈦馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏劑的最優(yōu)處方，并初步考察其抗過(guò)敏作用。方法以乳膏劑色澤光澤度考察、穩(wěn)定性考察及顯微鏡法觀察作為考察指標(biāo)，采用單因素考察和正交試驗(yàn)優(yōu)選最優(yōu)處方。并將該制劑涂抹于被紫外線照射的小鼠皮膚上。結(jié)果制備40 g乳膏中二氧化鈦的投藥量為3 g、撲爾敏的投藥量為0.2 g、乳化時(shí)間為30 min、乳化溫度為70 ℃時(shí)，乳膏效果較好。小鼠背部皮膚HE染色觀察顯示其有明顯的抗過(guò)敏作用。結(jié)論二氧化鈦馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏可有效抗紫外線過(guò)敏。

[關(guān)鍵詞]馬來(lái)酸氯苯那敏；二氧化鈦；正交試驗(yàn)；乳膏；HE染色

0引言

目前，全球臭氧層以每年3.5%遞減，使地面紫外線水平大幅度增加，導(dǎo)致過(guò)敏反應(yīng)甚至各種皮膚疾病，如：紅斑狼瘡、白癜風(fēng)、毛細(xì)血管擴(kuò)張癥的發(fā)生[1-3]。紫外線過(guò)敏影響患者的生活質(zhì)量，臨床治療一般采用口服馬來(lái)酸氯苯那敏片，并外涂防曬劑(嚴(yán)重時(shí)加涂激素類藥膏)。本實(shí)驗(yàn)擬將馬來(lái)酸氯苯那敏和二氧化鈦組成復(fù)方制劑，通過(guò)優(yōu)化處方，工藝研制可隔離紫外線且抗過(guò)敏的馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏，發(fā)揮治療與防止復(fù)發(fā)的雙重功效。

1材料

1.1儀器恒溫加熱磁力攪拌器(DF-101S，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司)；分析天平[Mettler AE200，梅特勒-托利多國(guó)際貿(mào)易(上海)有限公司]；高速臺(tái)式離心機(jī)(TGL-16B，上海安亭)；恒溫水浴鍋(BCFCO，余姚電訊儀表實(shí)業(yè)公司)；生物顯微鏡(XSP-10C，上海光學(xué)儀器廠)。

1.2試劑馬來(lái)酸氯苯那敏(河南九勢(shì)制藥有限公司，批號(hào)：131214)；二氧化鈦(上海晶純生化科技股份有限公司，批號(hào)：T104937)；液體石蠟(南昌白云醫(yī)藥化工有限公司，批號(hào)：20140201)；蓖麻油(湖北科田藥業(yè)有限公司，批號(hào)：Z42020991)；硬脂酸(湖南爾康制藥有限公司，批號(hào)：1018201209)；甘油(沈陽(yáng)紅旗制藥有限公司，批號(hào)：140421)；三乙醇胺(江西阿爾法高科技有限公司，批號(hào)：20131102)；羥苯甲酯(西安惠安纖維素化工有限公司，批號(hào)：20130301)；羥苯乙酯(湖南爾康制藥有限公司，批號(hào)：1036201304)。

1.3動(dòng)物昆明種小鼠，雄性，健康適齡，體重18~22 g，購(gòu)自遼寧長(zhǎng)生生物科技有限公司，合格證號(hào)：SCXK(遼)2010-0001。

2方法

2.1馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏基礎(chǔ)處方工藝分別稱取油相(硬脂酸4.96 g、蓖麻油5.24 mL、液體石蠟5.62 mL)、水相(馬來(lái)酸氯苯那敏0.2 g、三乙醇胺0.38 mL、甘油1.96 mL、羥苯甲酯0.04 g、羥苯乙酯0.04 g、水適量)，使油相、水相達(dá)70 ℃，充分?jǐn)嚢枋蛊淙诨?，再將水相緩緩加入油相中進(jìn)行乳化，乳化時(shí)保持一定溫度并不斷攪拌成乳膏狀。

2.2考察指標(biāo)

2.2.1色澤、光澤度考察[4]挑取乳膏1 g，在下襯白紙的玻璃板上用軟膏刀鋪開(kāi)，目測(cè)觀察。

2.2.2穩(wěn)定性考察采用耐熱試驗(yàn)、耐寒試驗(yàn)、離心試驗(yàn)作為考察指標(biāo)。耐熱試驗(yàn)[4]：將乳膏置于具塞試管中(約1/3高度)，放置40 ℃恒溫箱中6 h，觀察有無(wú)油水分離、變色等異?，F(xiàn)象。耐寒試驗(yàn)[4]：將乳膏置于具塞試管中(約1/3高度)，放置-15 ℃冰箱中24 h，觀察有無(wú)油水分離、膏體變粗、出水等異?，F(xiàn)象。離心試驗(yàn)[5]：將乳劑置10 cm離心管中，以3 750 r/min速度離心5 h，相當(dāng)于放置1年的自然分層效果，此法可用于對(duì)乳劑的穩(wěn)定性考察。

2.2.3顯微鏡法測(cè)定[5]用10×10倍數(shù)的光學(xué)顯微鏡觀察粒子狀態(tài)，考察乳劑是否均勻。

2.3單因素考察

2.3.1二氧化鈦加入方式的考察所用藥品量為基礎(chǔ)處方量，二氧化鈦加入方式分別為水相、油相兩相，外觀觀察結(jié)果見(jiàn)表1。由表1可見(jiàn)，二氧化鈦的加入方式對(duì)乳膏外觀影響顯著，且前3種加入方式得到的樣品外觀均較差，二氧化鈦用適量甘油潤(rùn)濕，置乳缽中用冷卻基質(zhì)與之研勻，得到的乳膏膏體均勻，易于涂布且無(wú)顆粒感。

表1　二氧化鈦加入方式的考察

2.3.2攪拌速度的考察所用藥品量為基礎(chǔ)處方量，攪拌速度分別定為500 r/min、1 000 r/min和變速(乳化時(shí)以1 000 r/min速度攪拌，待停止乳化時(shí)調(diào)為500 r/min)，外觀觀察結(jié)果見(jiàn)表2。由表2看出，攪拌速度對(duì)膏體的外觀產(chǎn)生顯著影響。

2.3.3乳化溫度的考察所用藥品量為基礎(chǔ)處方量，攪拌速度定為變速，乳化溫度分別定為60、70、80、90 ℃，外觀觀察結(jié)果見(jiàn)表3。由表3看出，乳化溫度對(duì)膏體的外觀產(chǎn)生較大影響。

表2　攪拌速度的考察

表3　乳化溫度的考察

2.3.4二氧化鈦加入量的考察攪拌速度定為變速，乳化溫度定為70 ℃，據(jù)復(fù)方鈦白防曬乳膏的制備研究表明，二氧化鈦含量為5%的復(fù)方鈦白防曬乳膏取得了很好的療效，在預(yù)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)當(dāng)二氧化鈦量達(dá)到15%時(shí)，乳膏發(fā)黃顆粒感明顯，且放置后極易出現(xiàn)油水分離，所以將乳膏基礎(chǔ)處方中二氧化鈦量定于2、3、4、6 g，其他藥品量為基礎(chǔ)處方中藥品量[6]，外觀考察結(jié)果見(jiàn)表4。由表4看出，二氧化鈦加入量的不同對(duì)乳膏的外觀有較大影響。

表4　二氧化鈦加入量的考察

2.3.5馬來(lái)酸氯苯那敏加入量的考察攪拌速度定位變速，乳化溫度為70 ℃，據(jù)復(fù)方馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏的研制及臨床應(yīng)用表明[7-8]，將馬來(lái)酸氯苯那敏的量定至0.5%~0.8%，即基礎(chǔ)處方中氯苯那敏量定于0.20、0.24、0.28、0.32 g，其他藥品量為基礎(chǔ)處方中藥品量，外觀考察結(jié)果見(jiàn)表5。由表5看出，氯苯那敏加入量的不同對(duì)乳膏的外觀有比較大的影響。

2.3.6乳化時(shí)間的考察攪拌速度定為變速，乳化溫度為70 ℃，藥品量為基礎(chǔ)處方中藥品量，乳化時(shí)間分別定為10、20、30 min,外觀考察結(jié)果見(jiàn)表6。由表6看出，乳化時(shí)間對(duì)膏體外觀產(chǎn)生一定影響。

表5　氯苯那敏加入量的考察

表6　乳化時(shí)間的考察

2.4正交試驗(yàn)通過(guò)上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析，攪拌速度對(duì)乳膏的外觀產(chǎn)生顯著影響，將攪拌速度定為變速，在正交試驗(yàn)中不再考察。主藥的加入量、乳化時(shí)間和乳化溫度對(duì)乳膏外觀產(chǎn)生較大影響，所以將主藥加入量、乳化時(shí)間和乳化溫度作為正交試驗(yàn)的4個(gè)因素，選用L9(34)正交表進(jìn)行試驗(yàn)，見(jiàn)表7、表8。

表7　正交試驗(yàn)因素水平表

表8　L9(34)正交試驗(yàn)

評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)：①均勻程度、光澤度評(píng)價(jià)，分值由0.5分開(kāi)始，按每隔0.1分升序打分。②離心實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)，15 min為離心界限，設(shè)定15 min及以下分層均為0.5分；15 min以上分層，每增加5 min加0.5分。③耐熱與耐寒評(píng)價(jià)，若不分層，則加1分。④顯微鏡法觀察評(píng)價(jià)，10×10的倍數(shù)下，視野范圍內(nèi)粒子均勻度小者為1，粒子不均勻粒度較大者為0.5。

通過(guò)正交試驗(yàn)直觀分析結(jié)果顯示，影響外觀和穩(wěn)定性的主次因素順序?yàn)镃>A>D>B，根據(jù)正交試驗(yàn)結(jié)果，選擇有較好的穩(wěn)定性和外觀的處方配比和工藝條件是A2B3C2D1。

2.5藥效學(xué)研究

2.5.1實(shí)驗(yàn)分組與給藥昆明組小鼠隨機(jī)分為4組：A組(空白對(duì)照組)，B組(UVB照射組)，C組(UVB照射+二氧化鈦乳膏組)，D組(UVB照射+二氧化鈦馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏組)。C組、D組于致敏即日起開(kāi)始給藥，1次/d，A組和B組涂抹等重量的空白乳膏。

2.5.2試驗(yàn)方法剔除小鼠背部絨毛，進(jìn)行UVB照射致敏，觀察小鼠背部皮膚變化，直至出現(xiàn)皮膚損傷。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后處死小鼠。

2.5.3試驗(yàn)結(jié)果取小鼠背部照射區(qū)部分皮膚組織(0.8 cm×0.8 cm)，制片后進(jìn)行HE染色，在顯微鏡下觀察小鼠皮膚組織形態(tài)學(xué)的改變及真皮內(nèi)膠原纖維的變化。見(jiàn)圖1。

從圖1可見(jiàn)，空白對(duì)照組背部皮膚組織表皮為鱗狀上皮細(xì)胞，真皮層膠原纖維分布均勻，真皮及皮下組織未見(jiàn)病變；紫外線照射后，小鼠背部表皮厚度不一，乳頭層變平，部分脫落，表皮細(xì)胞排列紊亂，深染。真皮層膠原纖維染色變淡，排列紊亂、稀疏，部分扭曲、斷裂；涂抹二氧化鈦乳膏后，真皮內(nèi)膠原纖維淡染，排列紊亂，扭曲、局部斷裂，有大量嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，皮脂腺不規(guī)則增生；涂抹二氧化鈦馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏后，膠原纖維排列稍顯紊亂，但無(wú)嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，皮脂腺輕度增生。

3討論

通過(guò)正交試驗(yàn)，該處方的最優(yōu)配方及工藝為硬脂酸4.96 g、蓖麻油5.24 mL、液體石蠟5.62 mL，水相中馬來(lái)酸氯苯那敏0.2 g、三乙醇胺0.38 mL、甘油1.96 mL、羥苯甲酯0.04 g、羥苯乙酯0.04 g、水適量，使油相、水相達(dá)70 ℃，充分?jǐn)嚢枋蛊淙诨?，再將水相緩緩加入油相中進(jìn)行乳化，乳化時(shí)間為30 min，保持乳化溫度為70 ℃，乳化時(shí)以1 000 r/min的速度攪拌，待停止乳化時(shí)調(diào)為500 r/min，直至冷凝得膏體。稱取二氧化鈦3 g，用適量甘油潤(rùn)濕，將少量基質(zhì)和二氧化鈦在研缽中混勻，逐漸添加至全量，即得。經(jīng)優(yōu)化處方制備的二氧化鈦馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏對(duì)于小鼠可起到有效的抗紫外線過(guò)敏作用。

圖1　小鼠皮膚組織HE染色結(jié)果

二氧化鈦為親水性藥物，在水中溶解度較低，如果將二氧化鈦直接加入到基質(zhì)中，由于顆粒間粘附性較強(qiáng)，易聚集成比較大的顆粒，所制得的乳膏的顆粒感較強(qiáng)，影響了乳膏的外觀和治療效果。因此將其粉末加甘油研磨，阻止微粒間的聚集，產(chǎn)生的分散度較大，得到的膏體不僅美觀細(xì)膩，而且在皮膚上易于涂布，沒(méi)有顆粒感[9]。

可屏蔽紫外線的馬來(lái)酸氯苯那敏乳膏的優(yōu)勢(shì)在于：①馬來(lái)酸氯苯那敏制成乳膏劑，較溶液劑在皮膚上作用時(shí)間更長(zhǎng)，達(dá)到長(zhǎng)效作用；②抗敏同時(shí)遮光，防止治療過(guò)程中紫外線對(duì)皮膚的二次傷害；③降低化學(xué)防曬劑引起的接觸性皮炎。后續(xù)試驗(yàn)中將進(jìn)一步比較不同組間皮膚中超氧岐化酶(SOD)、過(guò)氧化丙二醛(MDA)的活性和含量。

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Preparation of titanium dioxide chlorphenamine cream and the preliminary study on the anti-allergic effectsCHU Yang1,2,LI Lei3,DING Yi-hang4,JIANG Ming-yan1,2*(1.Department of Pharmacy,The First Hospital of China Medical University,Shenyang 110001,China;2.School of Pharmacy,China Medical University,Shenyang 110001,China;3. College of Pharmacy,Shenyang Pharmaceutical University,Shenyang 110016,China;4. School of Pharmacy,Dalian Medical University,Dalian 116044,China)

[Abstract]ObjectiveTo optimize the prescription of titanium dioxide chlorphenamine maleate cream,and to investigate its anti-allergic effect.MethodsThe single factor and orthogonal test was used to optimize the prescription with the cream color and gloss investigation,inspection and microscopy observation of stability as the marker.The anti-allergic effect on mice’s back skin was observed by HE staining.ResultsThe effect of the preparation was good when the dosage of titanium dioxide cream and chlorpheniramine was 3 g and 0.2 g respectively,along with the emulsification time was 30 min and emulsifying temperature was 70 ℃.ConclusionTitanium dioxide chlorphenamine cream can effectively resist ultraviolet allergy.

Key words：Chlorphenamine maleate；Titanium dioxide；Orthogonal test；Cream;Hematoxylin and eosin staining

DOI:10.14053/j.cnki.ppcr.201601018

*通信作者

收稿日期：2015-05-27