趙 杰，吳繁榮，韓 續(xù)，李 寧，葛金芳，陳飛虎

澤漆化學(xué)成分研究

趙 杰，吳繁榮，韓 續(xù)，李 寧，葛金芳，陳飛虎

目的研究大戟屬植物澤漆的化學(xué)成分，并對(duì)分離得到的單體化合物進(jìn)行初步抗銀屑病活性篩選。方法采用硅膠、Sephadex LH-20、MCI小孔樹脂、十八烷基鍵和硅膠及重結(jié)晶等方法進(jìn)行分離純化，并通過(guò)波譜學(xué)技術(shù)進(jìn)行結(jié)構(gòu)鑒定。應(yīng)用CCK-8法體外檢測(cè)單體化合物對(duì)人角質(zhì)形成細(xì)胞（HaCaT）的抑制作用，ELISA法檢測(cè)單體化合物的抗炎活性。結(jié)果從石油醚部位和氯仿部位分離純化得到12個(gè)化合物，分別為正三十一烷醇（1）、β-谷甾醇（2）、金色酰胺醇脂（3）、槲皮素（4）、5-羥基-6，7-二甲氧基黃酮（5）、山奈酚香豆?；咸堰拎擒眨?）、柚皮素（7）、異嗪皮啶（8）、松脂素（9）、14α，15β-二乙酰氧基-3α，7β-二苯甲酰基-9-氧代-2β，13α-麻風(fēng)樹-5E，11E-二烯（10）、euphoscopin B（11），大戟苷Ⅰ（12）。結(jié)論其中5，6，8，9為首次從大戟屬中分離得到?；衔?，9，11能較好的抑制HaCaT細(xì)胞增殖，同時(shí)所有單體化合物對(duì)腫瘤壞死因子α（TNF-α）刺激的HaCaT細(xì)胞分泌白介素1（IL-1）無(wú)顯著性改變，但化合物4，5，12能在一定程度上減少IL-6的分泌。

澤漆；化學(xué)成分；結(jié)構(gòu)鑒定；角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT

澤漆（Euphorbia helioscopia L.）又名貓眼草、五朵云、五鳳草，為大戟目大戟科一年生或兩年生草本植物，分布于除新疆、西藏以外的全國(guó)各省區(qū)。澤漆味辛、苦，性微寒，全草入藥，主治水氣腫滿、痰飲喘咳瘧疾、菌痢、瘰疬、結(jié)核性瘺管、骨髓炎［1］。研究［2-3］表明澤漆具有抗腫瘤、抑菌殺蟲、止咳平喘、抗銀屑病等作用。為了闡明其抗銀屑病的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)，該研究對(duì)澤漆提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了系統(tǒng)的分離，并觀察得到的單體化合物對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT的增殖抑制作用，及對(duì)細(xì)胞分泌白介素1（interleukin-1，IL-1）和IL-6的影響，為進(jìn)一步開發(fā)澤漆提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥材澤漆于夏季6月采自河南省鞏義縣，經(jīng)安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院中藥學(xué)教研室鑒定屬大戟科大戟屬澤漆Euphorbia helioscopia L.。

1.2 儀器與試劑AM-300、400，DRX-500型核磁共振光譜儀（瑞士Bruker公司，四甲基硅烷作為內(nèi)標(biāo)）；Sephadex LH-20（瑞典GEHealthcare Bio-Sciences公司）；MCI小孔樹脂（日本Mitsubishi Chemical公司）；十八烷基鍵合硅膠（octadecylsilyl，ODS，日本Fujisilysia Chemical公司）；硅膠（青島海洋化工廠）；薄層色譜GF254硅膠板板（煙臺(tái)江友硅膠開發(fā)有限公司）；氘代試劑（美國(guó)Sigma-aldrich公司）；胎牛血清（杭州四季青生物工程材料有限公司）；DMEM高糖培養(yǎng)基（美國(guó)Hyclone）；CCK-8試劑盒（上海貝博生物）；ELISA試劑盒（美國(guó)R&D公司）。

1.3 方法

1.3.1提取分離 取澤漆陰干藥材15 kg，倒入提取罐，加90%的乙醇溶液80 L，蒸汽加熱至60℃，在該溫度條件下浸泡24 h，浸泡液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀蒸干溶劑，得到總提物浸膏，并重復(fù)提取4次。合并4次所得總提物浸膏1.14 kg。加水混懸后，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進(jìn)行萃取，萃取液濃縮至干，得到石油醚部位（Fra），氯仿部位（Frb），乙酸乙酯部位（Frc）和正丁醇部位（Frd）。石油醚部位Fra（120 g）經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-乙酸乙酯50∶1～0∶1）梯度洗脫得到8個(gè)部分，F(xiàn)ra-1～Fra-8。Fra-4經(jīng)過(guò)Sephadex LH-20（石油醚-氯仿-甲醇10∶10∶1）、中低壓柱色譜（石油醚-丙酮20∶1）、反復(fù)硅膠柱色譜以及重結(jié)晶的方法進(jìn)一步分離和純化，得到化合物1（277 mg），10（55 mg），2（135 mg）。Fra-6經(jīng)中低壓柱色譜（石油醚-丙酮15∶1）得到6個(gè)部分，F(xiàn)ra-6-1～Fra-6-6。Fra-6-2經(jīng)Sephadex LH-20、反復(fù)硅膠柱色譜，得到化合物11（34 mg）。Fra-6-6經(jīng)反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物12（28 mg）。氯仿部位Frb（250 g）經(jīng)硅膠柱色譜（石油醚-丙酮60∶1～0∶1）梯度洗脫得到9個(gè)部分，F(xiàn)rb-1～Frb-9。Frb-5經(jīng)硅膠柱（石油醚-丙酮10∶1～0∶1）得到5個(gè)部分，F(xiàn)rb-5-1～Frb-5-5，其中Frb-5-3經(jīng)Sephadex LH-20（純乙醇），硅膠柱，ODS-C18柱色譜進(jìn)一步分離純化，得到化合物8（10 mg）。Frb-8經(jīng)硅膠柱色譜（氯仿-甲醇50∶1～0∶1）得到8個(gè)部分，F(xiàn)rb-8-1～Frb-8-9。Frb-8-3經(jīng)Sephadex LH-20（30%～100%甲醇）、MCI（0～100%甲醇）以及反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物9（8 mg）。Frb-8-3經(jīng)Sephadex LH-20（30%～100%甲醇）、MCI（0～100%甲醇）以及反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物3（25 mg），7（15 mg）。Frb-8-8經(jīng)Sephadex LH-20（30%～100%甲醇）、MCI（0～100%甲醇）以及反復(fù)硅膠柱色譜得到化合物6（23 mg），5（15 mg），4（31 mg）。

1.3.2CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制作用 取對(duì)數(shù)期的HaCaT細(xì)胞以4×103個(gè)/孔的細(xì)胞密度接種于96孔板中，邊緣孔用PBS填充，空白對(duì)照組加入等體積的培養(yǎng)基不接種細(xì)胞，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h后，空白對(duì)照組加等體積的培養(yǎng)基，藥物組加入等體積不同濃度的藥物（藥物終濃度為12.5、25、50、100、200μmol/L），置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育24 h后，吸棄培養(yǎng)基，藥物組加入等體積不同濃度的藥物，空白對(duì)照組加等體積的培養(yǎng)基，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)孵育24 h后每孔加入10μl CCK-8，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育3 h后，震蕩數(shù)分鐘后用酶標(biāo)儀測(cè)定450 nm處各孔的吸光度值。

1.3.3ELISA法檢測(cè)IL-6、IL-8含量 取對(duì)數(shù)期的HaCaT細(xì)胞，以1×104個(gè)/孔的細(xì)胞密度接種于96孔板中，空白對(duì)照組加入等體積的培養(yǎng)基不接種細(xì)胞，置于37℃、5%CO2培養(yǎng)箱中孵育12 h，待細(xì)胞貼壁后，加入10 ng/ml腫瘤壞死因子α（tumor necrosis factor，TNF-α）溶液刺激，繼續(xù)培養(yǎng)12 h后，藥物組加入等體積不同濃度的藥物（藥物終濃度為6.25、12.5、25、50、100μmol/L）其中槲皮素作為陽(yáng)性對(duì)照組。培養(yǎng)24 h后，吸取各孔上清液，4℃、3000 r/min離心10 min，取上清液，按照ELISA試劑盒說(shuō)明操作。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理采用SPSS17.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料用表示。組間比較采用單因素ANOVA方差分析，兩兩比較采用LSD法檢驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 結(jié)構(gòu)鑒定化合物1：白色膠狀物，分子式C31H64O，1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ3.64（t，J=6.6 Hz，2H，H-1），1.54（m，2H，H-2），1.25（m，56H，H-3～29），0.88（t，J=6.7 Hz，3H，H-31）。13CNMR（101 MHz，CDCl3）δ63.10（C-1），32.83（C-2），31.93（C-3），29.70到29.80（C-4～22）是1個(gè)大峰，29.66（C-25），29.61（C-26），29.44（C-27），29.36（C-28），25.74（C-29），22.68（C-30），14.09（C-31）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［4］對(duì)比，確定化合物1為正三十一烷醇。

化合物2：白色針狀結(jié)晶，分子式為C29H50O。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ5.35（d，J=4.8 Hz，1H），3.52（m，1H），1.00（s，3H），0.92（d，J=6.5 Hz，3H），0.82（m，9H），0.68（s，3H）。13CNMR（101 MHz，CDCl3）δ140.90（C-5），121.86（C-6），71.95（C-3），56.92（C-14），56.21（C-17），50.29（C-9），45.99（C-24），42.47（C-13），42.44（C-4），39.93（C-12），37.41（C-1），36.65（C-10），36.30（C-20），34.10（C-22），32.06（C-7），31.80（C-2），31.80（C-8），29.30（C-25），28.40（C-16），26.23（C-23），24.45（C-15），23.22（C-28），21.23（C-11），19.96（C-26），19.54（C-19），19.18（C-27），18.93（C-21），12.13（C-29），12.01（C-18）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］對(duì)比，確定化合物2為β-谷甾醇。

化合物3：白色針狀結(jié)晶，分子式為C27H28N2O4。1HNMR（600 MHz，CDCl3）δ7.71（d，J=8.5 Hz，2H，H-3′，7′），7.52（t，J=7.4 Hz，1H，H-5′），7.44（t，J=7.7 Hz，2H，H-3′，7′），7.17（d，J=6.8 Hz，1H），7.13（dd，J=14.3，7.4 Hz，2H），7.06（d，J =7.2 Hz，2H，H-4′′，8′′），6.81（d，J=7.6 Hz，1H，-NH），6.07（d，J=8.5 Hz，1H，-NH），4.78（dd，J= 14.1，7.9 Hz，1H，H-2），4.35（m，1H，H-1′′），3.92（dd，J=11.3，4.9 Hz，1H，H-9′′a），3.82（dd，J= 11.3，4.2 Hz，1H，H-9′′b），3.22（dd，J=13.7，5.9 Hz，1H，H-3a），3.06（dd，J=13.7，8.4 Hz，1H，H-3b），2.74（m，2H，H-2′′），2.02（s，3H，-COCH3）。13CNMR（151 MHz，CDCl3）δ170.92（-COCH3），170.38（C-1），167.24（C-1′），136.81（C-4），136.71（C-3′′），133.75（C-2′），132.05（C-5′），129.41（C-6，8），129.24（C-5′′，7′′），128.86（C-4′′，8′′），128.76（C-5，9），128.70（C-3′，7′），127.26（C-7），127.18（C-4′，6′），126.86（C-6′′），64.71（C-9′′），55.10（C-2），49.55（C-1′′），38.58（C-3），37.55（C-2′′），20.95（-COCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［6］對(duì)比，確定化合物3為金色酰胺醇酯。

化合物4：黃色粉末，分子式為C15H10O7。1HNMR（600 MHz，CD3COCD3）δ7.80（d，J=1.9 Hz，1H，H-2′），7.65（dd，J=8.5，1.8 Hz，1H，H-6′），6.98（d，J=8.5 Hz，1H，H-5′），6.50（d，J=1.6 Hz，1H，H-8），6.23（d，J=1.6 Hz，1H，H-8）。13CNMR（101 MHz，CD3COCD3）δ176.12（C-4），164.92（C-7），162.05（C-9），157.36（C-5），148.42（C-4′），146.72（C-2），145.95（C-3′），136.17（C-3），123.47（C-1′），121.32（C-6′），116.09（C-5′），115.58（C-2′），103.77（C-10），98.83（C-6），94.10（C-8）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［5］對(duì)比，確定化合物4為槲皮素。

化合物5：黃色粉末，分子式C17H14O”5。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ12.68（s，1H，OH-5），7.91（dd，J=20.4，7.3 Hz，2H，H-2′，6′），7.54（m，3H，H-3′，4′，5′），6.67（s，1H，H-8），6.57（s，1H，H-3），3.96（d，J=8.2 Hz，3H，CH3O-6），3.93（s，3H，CH3O-7）。13CNMR（101 MHz，CDCl3）δ182.74（C-4），163.98（C-7），158.93（C-2），153.34（C-9），153.04（C-5），132.72（C-6），131.85（C-4′），131.31（C-1′），129.11（C-3′，5′），126.26（C-2′，6′），106.31（C-10），105.62（C-3），90.67（C-8），60.86（CH3O-7），56.34（CH3O-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［7］對(duì)比，確定化合物5為5-羥基-6，7-二甲氧基黃酮。

化合物6：淡黃色粉末，分子式為C30H26O13。1HNMR（400 MHz，CD3OD）δ7.91（d，J=8.5 Hz，2H，H-2′，6′），7.32（d，J=15.9 Hz，1H），7.23（d，J=8.3 Hz，2H，H-2′′，6′′），6.73（t，J=8.6 Hz，4H，H-3′，5′，3′′′，5′′′），6.22（s，1H，H-8），6.05（s，1H，H-6），5.99（d，J=15.9 Hz，1H，H-8′′′），5.16（d，J=6.9 Hz，1H，H-1′′），4.23（d，J=6.9 Hz，1H，H-6′′b），4.11（dd，J=11.7，6.6 Hz，1H，H-6′′a），3.2-3.4（m，4H，H-2′′，H-3′′，4′′，5′′）。13CNMR（101 MHz，CD3OD）δ177.83（C-4），167.29（C-9′′′），164.79（C-7），161.43（C-5），160.00（C-4′），159.68（C-4′′′），157.79（C-2），156.92（C-9），145.04（C-7′′′），133.68（C-3），130.69（C-2′，6′），129.67（C-2′′′，6′′′），125.57（C-1′′′），121.21（C-1′），115.28（C-3′′′，5′′′），114.53（C-3′，5′），113.22（C-8′′′），103.98（C-10），102.50（C-1′′），98.60（C-6），93.41（C-8），76.50（C-5′′），74.29（C-2′′），74.21（C-3′′），70.21（C-4′′），62.80（C-6′′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［8］對(duì)比，確定化合物6為山奈酚香豆?；咸堰拎擒铡?/p>

化合物7：淡黃色粉末，分子式C15H12O5。1HNMR（400 MHz，CD3COCD3）δ12.18（s，1H），7.40（dd，J=2.0 Hz，J=8.4 Hz，2H，H-2′，H-6′），6.90（dd，J=2.1，8.5 Hz，2H，H-3′，H-5′），5.96（d，J =2.0 Hz，2H，H-6，H-8），5.46（dd，J=12.9，2.7 Hz，1H，H-2），3.19（dd，J=17.1，12.9 Hz，1H，H-3a），2.73（dd，J=17.1，3.0 Hz，1H，H-3b），2.15（s，1H），2.09（s，1H），2.05（dd，J=4.2，2.1 Hz，2H），1.29（s，2H），1.21（d，J=5.2 Hz，1H）。13CNMR（101 MHz，CD3COCD3）δ197.27（C-4），167.37（C-7），165.32（C-5），164.40（C-9），158.73（C-4′），130.81（C-1′），129.04（C-2′，C-6′），116.19（C-3′，C-5′），103.24（C-10），96.83（C-6），95.86（C-8），79.96（C-2），43.51（C-3）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［9］對(duì)比，確定化合物7為柚皮素。

化合物8：淡黃色粉末，C11H10O5。1HNMR（400 MHz，CD3COCD3）δ8.60（s，1H，OH-7），7.84（d，J= 9.5 Hz，1H，H-4），6.99（s，1H，H-5），6.20（d，J=9.5 Hz，1H，H-3），3.94（s，3H，CH3O-8），3.89（s，3H，CH3O-8）。13CNMR（101 MHz，CD3COCD3）δ160.82（C-2），146.40（C-6），145.11（C-4），144.82（C-7），144.45（C-9），135.77（C-8），113.47（C-3），111.71（C-10），105.09（C-5），61.32（CH3O-8），56.77（CH3O-6）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［10］對(duì)比，確定化合物8為異嗪皮啶。

化合物9：棕黃色粉末，分子式為C20H22O6（358）1HNMR（600 MHz，CD3COCD3）δ6.99（s，2H，H-2，2′），6.83（d，J=8.1 Hz，2H，H-6，6′），6.79（d，J =8.1 Hz，2H，H-5，5′），4.67（d，J=3.6 Hz，2H，H-7，7′），4.20（dd，J=8.4，6.7 Hz，2H，H-9a，9a′），3.84（s，6H，2×OCH3），3.80（dd，J=8.9，2.9 Hz，2H，H-9b，9b′），3.08（m，2H，H-8，8′）。13CNMR（151 MHz，CD3COCD3）δ148.30（C-3，3′），146.84（C-4，4′），134.13（C-1，1′），119.59（C-6，6′），115.51（C-5，5′），110.55（C-2，2′），86.62（C-7，7′），72.19（C-9，9′），56.21（3，3′-OCH3），55.22（C-8，8′）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［11］對(duì)比，確定化合物9為松脂素。

化合物10：無(wú)色針狀結(jié)晶，分子式為C38H44O9。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ7.85（d，J=7.6 Hz，2H，H-2′，6′），7.57（d，J=7.7 Hz，2H，H-2′′，6′′），7.46（t，J=7.4 Hz，1H，H-4′），7.31（t，J=5.3 Hz，1H，H-4′′），7.27（d，J=6.6 Hz，2H，H-3′，5′），6.97（t，J=7.7 Hz，2H，H-3′′，5′′），5.95（s，1H，H-14），5.87（d，J=8.5 Hz，1H，H-5），5.70（dd，J= 11.2，3.7 Hz，1H，H-7a），5.39（d，J=16.05 Hz，1H，H-11a），5.22（dd，J=16.0，8.9 Hz，1H，H-12），5.14（d，J=6.4 Hz，1H，H-3），3.34（d，J=13.61 Hz，1H，H-8a），3.29（d，J=6.89 Hz，1H，H-4），3.00（dd，J=15.4，8.3 Hz，1H，H-1a），2.85（dd，J=15.7，3.7 Hz，1H，H-8b），2.47（m，1H，H-13），2.21（s，3H，-COCH3-14），2.17（s，3H，-COCH3-15），1.95（s，3H，H-17），2.13（m，1H，H-2a），1.50（dd，J=15.4，7.8 Hz，1H，H-1b），1.31（s，3H，H-19），1.14（s，3H，H-18），1.09（d，J=7.1 Hz，3H，H-16），0.93（d，J=7.0 Hz，3H，H-20）。13CNMR（101 MHz，CDCl3）δ207.52（C-9），170.04（-COCH3-14），169.99（-COCH3-14），165.89（OBz-7），165.42（OBz-7），135.48（C-6），133.69（C-11），133.67（C-12），132.67（C-4′），132.38（C-4′′），130.44（C-1′），129.91（C-1′′），129.31（C-2′，6′），129.23（C-2′′，6′′），128.21（C-3′，5′），127.94（C-3′′，5′′），122.73（C-5），92.43（C-15），84.28（C-3），75.61（C-14），74.18（C-7），49.13（C-10），44.02（C-4），43.60（C-1），42.82（C-8），38.00（C-13），37.82（C-2），25.47（C-18），24.94（C-19），22.88（C-20），22.06（-COCH3-14），21.01（-COCH3-15），19.27（C-16），18.81（C-17）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［12］對(duì)比，確定化合物10為14α，15β-二乙酰氧基-3α，7β-二苯甲酰基-9-氧代-2β，13α-麻風(fēng)樹-5E，11E二烯。

化合物11：無(wú)色針狀結(jié)晶，分子式為C33H44O9。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ7.99（m，2H，H-2′，6′），7.54（t，J=7.4 Hz，1H，H-4′），7.43（t，J=7.6 Hz，2H，H-3′，5′），5.93（s，1H，H-14），5.66（m，1H，H-5），5.39（dd，J=11.3，3.6 Hz，1H，H-7），5.35（d，J=6.3 Hz，1H，H-11），5.20（dd，J=6.9，3.5 Hz，1H，H-3），5.17（dd，J=12.9，5.6 Hz，1H，H-12），3.26（t，J=8.0 Hz，1H，H-4），3.15（dd，J=15.8，11.6 Hz，1H，H-8），2.98（dd，J=15.2，8.0 Hz，1H，H-1a），2.68（dd，J=15.8，4.4 Hz，1H，H-8b），2.44（m，1H，H-2），2.23（s，3H，-COCH3-15），2.18（m，3H，-COCH3-14），1.86（d，J=0.8 Hz，3H，H-17），1.43（dd，J=15.2，9.2 Hz，1H，H-1b），1.26（s，3H，-COCH3-7），1.24（s，3H，H-19），1.11（dd，J=10.3，5.7 Hz，6H，H-18，H-20），0.92（d，J=7.1 Hz，3H，H-16）。13CNMR（101 MHz，CDCl3）δ207.54（C-9），170.29（-COCH3-14），170.07（-COCH3-15），170.02（-COCH3-7），165.39（OBz-3），135.84（C-6），133.67（C-11），133.66（C-4′），132.80（C-12），130.70（C-1′），129.51（C-2′，6′），128.32（C-3′，5′），122.64（C-5），92.28（C-15），83.33（C-3），75.33（C-14），73.40（C-7），49.00（C-10），44.20（C-4），43.07（C-1），42.92（C-8），37.73（C-2），37.69（C-13），25.27（C-18），24.93（C-19），23.02（C-20），22.06（-COCH3-15），21.01（-COCH3-14），20.08（-COCH3-7），18.90（C-16），18.85（C-17）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［13］對(duì)比，確定化合物11為euphoscopin B。

化合物12：無(wú)色針狀結(jié)晶，分子式為C33H44O9。1HNMR（400 MHz，CDCl3）δ8.09（m，2H），7.53（t，J=7.3 Hz，1H），7.45（t，J=7.4 Hz，2H），7.28（s，1H），5.73（t，J=12.3 Hz，1H），5.64（dd，J= 15.6，9.3 Hz，1H），5.43（t，J=3.9 Hz，1H），5.06（d，J=15.6 Hz，1H），4.94（m，2H），4.77（t，J=3.3 Hz，1H），2.88（dt，J=18.3，9.1 Hz，1H），2.58（dd，J =21.1，14.3 Hz，1H），2.23（s，3H），1.95（m，3H），1.73（s，3H），1.18（s，3H），0.97（m，9H），0.89（s，3H）。13CNMR（101 MHz，CDCl3）δ171.22，169.63，169.09，165.63（-C=O×4），138.15（C-5），133.79（C-6），132.82（C-4′），130.16（C-1′），129.78（C-3′，5′），128.69（C-11），128.47（C-2′，6′），120.04（C-12），83.76（C-15），80.96（C-3），80.73（C-7），73.57（C-9），72.92（C-14），47.83（C-13），46.22（C-8），39.64（C-10），39.46（C-4），36.69（C-2），32.42（C-1），22.61，21.07，20.99（-COCH3×3），20.22（C-20），19.84（C-19），19.43（C-18），16.14（C-17），13.49（C-16）。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)［14］對(duì)比，確定化合物12為euphorninⅠ。

2.2 化合物對(duì)HaCaT增殖的影響利用CCK-8法檢測(cè)分離得到的單體化合物對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT增殖的影響，比較各化合物的半數(shù)抑制濃度（halfmaximal inhibitory concentration，IC50），以維A酸作為陽(yáng)性對(duì)照藥。結(jié)果顯示，化合物1、4、5、7、8、9、11、12有一定的抑制HaCaT細(xì)胞增殖的能力（表1）。其中化合物4、9、11的抑制作用接近陽(yáng)性藥維A酸（52.67μmol/L）。

2.3 化合物對(duì)TNF-α刺激的HaCaT細(xì)胞分泌細(xì)胞因子的影響對(duì)分離得到的單體化合物進(jìn)行抗炎活性篩選，采用ELISA法測(cè)定TNF-α刺激的HaCaT細(xì)胞上清液中IL-1和IL-6的含量，以化合物4槲皮素作為陽(yáng)性對(duì)照藥。結(jié)果顯示，化合物對(duì)TNF-α刺激的HaCaT細(xì)胞IL-1分泌量差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但能在一定程度上減少IL-6的分泌，同時(shí)化合5、12減少IL-6的產(chǎn)生最為明顯（表2）。

3 討論

銀屑病是一種以皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞過(guò)度增殖為病理特征的炎癥性皮膚疾病，其發(fā)病機(jī)制至今仍不十分清楚。局部浸潤(rùn)的炎細(xì)胞和表皮角質(zhì)形成細(xì)胞通過(guò)分泌TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和干擾素-γ等細(xì)胞因子，在銀屑病發(fā)生過(guò)程中起重要作用［15］。澤漆是大戟屬植物，主要化學(xué)成分包括二萜酯類、黃酮類、三萜、甾醇和多酚類化合物。臨床上有將澤漆制成針劑、膠囊劑用于銀屑病患者的治療，并且有確切的療效［3］。但其治療銀屑病的具體成分尚不明確。本文從傳統(tǒng)的天然產(chǎn)物分離手段入手，分離得到12個(gè)化合物，其中5、6、8、9為首次從屬內(nèi)發(fā)現(xiàn)，主要為黃酮類和萜類化合物。對(duì)化合物進(jìn)行初步抗銀屑病活性篩選，結(jié)果顯示，化合物4、9、11能較好的抑制HaCaT的增殖，同時(shí)所有單體化合物對(duì)TNF-α刺激活化的HaCaT細(xì)胞分泌的IL-1無(wú)顯著性改變，但4、5、12能在一定程度上減少IL-6的分泌。

然而，澤漆其余部分的化成成分仍然未知，因此還需進(jìn)一步的分離和篩選抗銀屑病化合物，得到一些活性更好的化合物，為明確澤漆抗銀屑病藥效提供物質(zhì)基礎(chǔ)。

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Study on chem ical constituents of Euphorbia helioscopia L.

Zhao Jie，Wu Fanrong，Han Xu，et al
（School of Pharmacy，AnhuiMedical University，Anhui Key Laboratory of Bioactivity of Natural Products，Hefei 230032）

ObjectiveTo investigate the chemical constituents of Euphorbia helioscopia L.and their anti-psoriasis activities.MethodsThe separation and purification of constituents were performed by silica gel，Sephadex LH-20，MCI，ODS-C18 and recrystallization.Their structures were elucidated spectroscopic methods.The effects of these constituents on HaCaT Cell proliferation weremeasured by CCK-8 assay.And their anti-inflammatory effects were measured by ELISA.ResultsTwelve compoundswere isolated and their structureswere identified as1-hentriacontanol（1），β-sitosterol（2）aurantiamide acetate（3），quercetin（4），5-hydroxy-6，7-dimethoxyflavone（5），tiliroside（6），naringenin（7），isofraxidin（8），pinoresinol（9），14α，15β-diacetoxy-3α，7β-dibenzoyloxy-9-oxo-2βH，13αH-jatropha-5E，11E-diene（10），euphoscopin B（11），euphorninⅠ（12）.ConclusionCompounds 5，6，8，9 were isolated from this genus for the first time.Compounds4，9，11 were potent inhibitors against HaCaT cells in vitro and compounds 4，5，12 were capable of decreasing IL-6 in TNF-αstimulated HaCaT cells in vitro.

Euphorbia helioscopia L.；chemical constituents；structure identification；HaCaT cells

R 284.2

A

1000-1492（2016）03-0383-06

時(shí)間：2016/1/28 14：23：10 網(wǎng)絡(luò)出版地址：http：//www.cnki.net/kcms/detail/34.1065.R.20160128.1423.032.html

2016-01-08接收

2015年中醫(yī)藥行業(yè)科研專項(xiàng)（編號(hào)：201507002）

安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院、安徽天然藥物活性研究省級(jí)實(shí)驗(yàn)室，合肥 230032

趙 杰，男，碩士研究生；

陳飛虎，男，教授，博士生導(dǎo)師，責(zé)任作者，E-mail：cfhchina @sohu.com；

吳繁榮，男，副教授，講師，責(zé)任作者，E-mail：aydwfr@163. com