鄭紹軍，楊丹丹，朱 瑞，楊勝祥，高玉華

(1.江蘇科技大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212003；2.江蘇科技大學(xué) 海洋裝備研究院，江蘇 鎮(zhèn)江 212003；3.浙江農(nóng)林大學(xué)，浙江 臨安 311300)

鹿銜草化學(xué)成分的分離與鑒定

鄭紹軍1,2，楊丹丹1，朱 瑞1，楊勝祥3，高玉華1

(1.江蘇科技大學(xué)環(huán)境與化學(xué)工程學(xué)院，江蘇 鎮(zhèn)江 212003；2.江蘇科技大學(xué) 海洋裝備研究院，江蘇 鎮(zhèn)江 212003；3.浙江農(nóng)林大學(xué)，浙江 臨安 311300)

采用硅膠柱層析和凝膠柱層析從鹿銜草的甲醇提取物中分離到8個化合物，經(jīng)現(xiàn)代光譜技術(shù)鑒定其為木犀草素(Ⅰ)、苜蓿素(Ⅱ)、山萘酚(Ⅲ)、松柏醛(Ⅳ)、香草酸(Ⅴ)、水楊酸(Ⅵ)、3-羥基-11-氧代齊墩果酸(Ⅶ)和3,11-二氧代齊墩果酸(Ⅷ)，其中化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ為首次從該植物中分離得到。

鹿銜草；化學(xué)成分；苜蓿素；氧代齊墩果酸；分離與鑒定

鹿銜草(Pyrolacalliantha)為鹿蹄草科植物鹿蹄草(PyrolacallianthaH. Andres)的全草，產(chǎn)于河南、陜西、甘肅等地，有止血、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕等功能，中醫(yī)主要用于治療久勞咳嗽、腰膝無力、月經(jīng)過多、風(fēng)濕痹痛等疾病[1]。鹿銜草主要化學(xué)成分為酚酸、黃酮、醌和三萜等化合物，具有抗菌、抗氧化、增強(qiáng)免疫力等功效[2]。為了探討鹿銜草的有效化學(xué)成分，作者所在課題組對鹿銜草甲醇提取物進(jìn)行分離純化，并通過現(xiàn)代光譜技術(shù)對其結(jié)構(gòu)進(jìn)行鑒定，擬為鹿銜草的開發(fā)應(yīng)用提供幫助。

1 實(shí)驗(yàn)

1.1 材料、試劑與儀器

鹿銜草(Pyrolacalliantha)于2013年7月采自陜西省西安市樓觀臺國家森林公園，植物樣本由重慶大學(xué)楊小龍教授鑒定，保存于江蘇科技大學(xué)天然產(chǎn)物研究室。

柱色譜用硅膠(100～200目及200～300目)和薄層色譜用硅膠為GF254，青島海洋化工廠；反相色譜用RP-18，Merck公司；Sephadex LH-20凝膠，F(xiàn)luka公司；其余試劑均為分析純。

Bruker DRX-500型核磁共振儀，Bruker Company；VG AUTO spec-3000型質(zhì)譜檢測儀，VG 儀器公司；XRC-1型顯微熔點(diǎn)儀，四川大學(xué)科學(xué)儀器廠。

1.2 方法

取3 kg干燥的鹿銜草，曬干，粉碎，用甲醇在室溫下浸提，合并提取液，減壓濃縮，得到甲醇提取物。將甲醇提取物充分分散在蒸餾水中，分別用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇等溶劑進(jìn)行萃取分離，經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮，分別得到石油醚提取物(40 g)、乙酸乙酯提取物(32 g)和正丁醇提取物(52 g)。將乙酸乙酯提取物用粗硅膠(100～200目)充分拌樣后，進(jìn)行硅膠柱層析(200～300目)分離，氯仿-甲醇(100∶0→0∶100)梯度洗脫，經(jīng)TLC檢測后，合并成7個組分(Fr.1～Fr.7)。將Fr.3進(jìn)行硅膠柱色譜分離，用氯仿-丙酮梯度洗脫，得到化合物Ⅶ(9.2 mg)和Ⅷ(10.3 mg)。將Fr.4進(jìn)行硅膠柱色譜分離，用氯仿-甲醇梯度洗脫后，再用制備薄層色譜分離，得到化合物Ⅳ(9.9 mg)、Ⅴ(11.4 mg)和Ⅵ(8.7 mg)。將Fr.5進(jìn)行RP-18分離，用甲醇-水梯度洗脫，再用Sephadex LH-20 (氯仿∶丙酮=1∶1)分離純化后得到化合物Ⅰ(9.5 mg)、Ⅱ(9.7 mg)和Ⅲ(13.3 mg)。

2 結(jié)果與討論

2.1 化合物Ⅰ～Ⅷ的結(jié)構(gòu)鑒定

化合物Ⅰ：淡黃色粉末。1HNMR(500 MHz，DMSO-d6)，δ：7.42(2H,m,H-2′，6′)，6.89(1H，d，J=8.0 Hz，H-5′)，6.65(1H，s，H-3)，6.46(1H，d，J=2.0 Hz，H-8)，6.18(1H，d，J=2.1 Hz，H-6)；13CNMR(125 MHz，DMSO-d6)，δ：181.7(C-3),164.3(C-2),163.8(C-7),161.6(C-9),157.4(C-5),149.9(C-4′),145.7(C-3′),121.8(C-6′),119.1(C-1′),115.8(C-5′),113.5(C-2′),103.8(C-10),102.9(C-3),98.8(C-6),93.7(C-8)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[3]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅰ為木犀草素。

化合物Ⅱ：淡黃色粉末。1HNMR(500 MHz,DMSO-d6)，δ：12.96(1H,s,5-OH),10.77(1H,s,7-OH),9.32(1H,s,4′-OH),7.34(2H,s,H-2′,H-6′),6.98(1H,s,H-3),6.56(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.22(1H,d,J=2.0 Hz，H-6),3.87(6H,s,3′,5′-OCH3);13CNMR(125 MHz,DMSO-d6)，δ:181.8(C-4),164.1(C-2),163.8(C-7),161.5(C-5),157.3(C-9),139.5(C-4′),148.0(C-3′,5′),120.2(C-1′),104.5(C-2′,6′),103.8(C-10),103.5(C-3),98.8(C-6),95.2(C-8),56.7(C-3′,5′-OCH3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[4]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅱ?yàn)檐俎Ｋ亍?/p>

化合物Ⅲ：黃色粉末。1HNMR(500 MHz,CD3OD)，δ:8.04(2H,d,J=8.5 Hz,H-2′,6′),6.88(1H,d,J=8.5 Hz,H-3′,5′),6.39(1H,d,J=2.0 Hz,H-8),6.17(1H,d,J=2.0 Hz,H-6);13CNMR(125 MHz,CD3OD)，δ:177.4(C-4),165.6(C-7),162.6 (C-5),160.5(C-4′),158.3(C-9),148.2(C-2),137.3(C-3),130.7(C-2′,6′),123.7(C-1′),116.4(C-3′,5′),104.8(C-10),99.5(C-6),94.8 (C-8)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[5]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅲ為山萘酚。

化合物Ⅳ：淡黃色粉末。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ:9.63(1H,d,J=7.5 Hz,H-9),7.39(1H,d,J=16.0 Hz,H-7),7.12(1H,d,J=8.0 Hz、2.0 Hz,H-5),7.07(1H,d,J=2.0 Hz,H-3),6.95(1H,d,J=8.0 Hz,H-6),6.58(1H,dd,J=16.0 Hz、8.0 Hz,H-8),3.97(3H,s,H-2-OCH3);13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ:193.8(C-8),153.5(C-7),149.2(C-1),147.0(C-2),126.9(C-4),126.5(C-8),124.4(C-5),115.2(C-6),109.7(C-3),56.2(C-2-OCH3)。以上數(shù)據(jù)與文獻(xiàn)[6]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅳ為松柏醛。

化合物Ⅴ：無色粉末。1HNMR(500 MHz,CD3OD)，δ:7.57(1H,brs,H-2),7.55(1H,dd,J=8.5 Hz、2.0 Hz,H-6),6.83(1H,d,J=8.5 Hz,H-5),3.89(3H,s,H-4-OCH3);13CNMR(125 MHz,CD3OD)，δ:170.1(COOH),152.6(C-3),148.7(C-4),125.3(C-6),123.1(C-1),115.7(C-2),113.9(C-5),56.5(C-4-OCH3)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[7]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅴ為香草酸。

化合物Ⅵ：無色針狀晶體(甲醇)。1HNMR(500 MHz,CDCl3)，δ:7.94(1H,dd,J=8.0 Hz、2.0 Hz,H-6),7.52(1H,m,H-4),7.01(1H,d,J=8.0 Hz,H-3),6.94(1H,m,H-5);13CNMR(125 MHz,CDCl3)，δ:174.0(C-7),162.1(C-2),136.9(C-4),119.4(C-5),111.4(C-1),117.7(C-3),130.9(C-6)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[8]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅵ為水楊酸。

化合物Ⅶ：無色粉末。1HNMR(500 MHz,C5D5N)，δ:6.08(1H,brs,H-12),3.42(1H,d,J=11.0 Hz,H-3),2.66(1H,s,H-9),1.52(3H,s,H-27),1.39(3H,s,H-25),1.34(3H,s,H-23),1.28(3H,s,H-26),1.15(3H,s,H-24),1.02(6H,s,H-29,H-30);13CNMR(125 MHz,C5D5N)，δ:200.2(C-11),179.8(C-28),169.9(C-13),78.2(C-3),128.4(C-12),62.4(C-9),55.7(C-5),49.8(C-17),46.5(C-8),45.6(C-19),44.9(C-14),44.2(C-18),42.7(C-1),39.9(C-4),38.1(C-10),34.2(C-21),33.4(C-7),33.0(C-29),32.4(C-22),31.1(C-20),28.8(C-23),28.7(C-15),28.5(C-2),23.8(C-30),23.8(C-27),18.1(C-6),23.6(C-16),19.7(C-26),16.9(C-25),16.8(C-24)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[9]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅶ為3-羥基-11-氧代齊墩果酸。

化合物Ⅷ：無色粉末。1HNMR(500 MHz,C5D5N)，δ:6.10(1H,brs,H-12),3.43(1H,dd,J=3.5 Hz、13.5 Hz,H-18),2.66(1H,s,H-9),2.75(1H,s,H-2β),2.55(1H,s,H-2α),1.49(3H,s,H-27),1.37(3H,s,H-25),1.26(3H,s,H-23),1.25(3H,s,H-24),1.11(3H,s,H-26),1.02(6H,s,H-29,H-30);13CNMR(125 MHz,C5D5N)，δ:216.0(C-3),199.6(C-11),179.9(C-28),170.4(C-13),128.2(C-12),61.4(C-9),55.4(C-5),47.8(C-4),46.2(C-17),45.3(C-8),44.9(C-19),44.4(C-14),42.7(C-18),40.2(C-1),37.5(C-10),34.7(C-2),34.1(C-21),33.2(C-29),32.7(C-7),32.3(C-22),31.1(C-20),28.5(C-15),26.8(C-23),23.7(C-27),23.7(C-16,30),21.7(C-24),19.6(C-6),19.3(C-26),16.4(C-25)。以上數(shù)據(jù)和文獻(xiàn)[10]報(bào)道一致，因此鑒定化合物Ⅷ為3,11-二氧代齊墩果酸。

2.2 討論

在這些化合物中，化合物Ⅰ～Ⅲ為黃酮類化合物，化合物Ⅳ～Ⅵ為酚類化合物，化合物Ⅶ和Ⅷ為齊墩果烷型三萜類化合物。

黃酮類和酚類化合物對植物病原菌具有較好的抑制效果。李晶晶等[11]研究表明，化合物Ⅲ(山萘酚)對水稻紋枯病菌和番茄白絹病菌的抑制率分別為85.0%和72.5%；毛愛軍等[12]研究表明，化合物Ⅵ(水楊酸)能顯著提高辣椒的抗疫病性，辣椒植株用0.15～0.3 g·L-1的水楊酸處理后接種辣椒疫霉菌，辣椒植株可持續(xù)20 d以上表現(xiàn)出較高的誘導(dǎo)抗性。因此，鹿銜草及其提取物在農(nóng)業(yè)病蟲害防治方面具有較大的應(yīng)用潛力，值得進(jìn)一步研究和開發(fā)。

3 結(jié)論

從鹿銜草的甲醇提取物中分離鑒定了8個化合物：木犀草素(Ⅰ)、苜蓿素(Ⅱ)、山萘酚(Ⅲ)、松柏醛(Ⅳ)、香草酸(Ⅴ)、水楊酸(Ⅵ)、3-羥基-11-氧代齊墩果酸(Ⅶ)和3,11-二氧代齊墩果酸(Ⅷ)。其中，化合物Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅵ、Ⅶ、Ⅷ為首次從該植物中分離得到。

[1] 潘微薇，裴剛，王亞敏，等.鹿銜草的化學(xué)成分研究[J].西北藥學(xué)雜志，2014，29(3)：221-222.

[2] 王儲炎，艾啟俊，陳勰，等.鹿蹄草的化學(xué)成分、生理功能及其在工業(yè)中的應(yīng)用[J].中國食品添加劑，2006(5)：127-131.

[3] 曾軍英，李勝華，伍賢進(jìn).野百合黃酮類化學(xué)成分研究[J].中國藥學(xué)雜志，2014，49(14)：1190-1193.

[4] 李勝華，伍賢進(jìn)，佘朝文.闊葉箬竹葉的化學(xué)成分研究[J].中藥材，2014(4)：604-607.

[5] 倪付勇，陳重，許瓊明，等.高山紅景天化學(xué)成分研究[J].中草藥，2013，44(7)：798-802.

[6] SY L K,BROWN G D.Coniferaldehyde derivatives from tissue culture ofArtemisiaannuaandTanacetumparthenium[J].Phytochemistry,1999,50(5):781-785.

[7] 付琛，陳程，周光雄，等.陽春砂仁化學(xué)成分研究[J].中草藥，2011，42(12)：2410-2412.

[8] 仝永斌，王文婧，李國強(qiáng)，等.山橙枝葉化學(xué)成分研究[J].中藥材，2013(3)：398-401.

[9] SEEBACHER W,SIMIC N,WEIS R,et al.Complete assignments assignments of1H and13CNMR resonances of oleanolic acid,18α-oleanolic acid,ursolic acid and their 11-oxo derivatives[J].Magnetic Resonance in Chemistry,2003,41(8):636-638.

[10] FUKUDA Y,YAMADA T,WADA S,et al.Lupane and oleanane ttriterpenoids from the cones ofLiquidamberstyraciflua[J].Journal of Natural Products,2006,69(1):142-144.

[11] 李晶晶，曾東強(qiáng).牛耳楓果實(shí)中抑菌活性成分的初步分離[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報(bào)，2013，15(3)：261-266.

[12] 毛愛軍，王永健，馮蘭香，等.水楊酸等4種誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)辣椒抗疫病作用的研究[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2004，37(10)：1481-1486.

Isolation and Identification of Chemical Components from Pyrola calliantha

ZHENG Shao-jun1,2,YANG Dan-dan1,ZHU Rui1,YANG Sheng-xiang3,GAO Yu-hua1

(1.SchoolofEnvironmentalandChemicalEngineering,JiangsuUniversityofScienceandTechnology,Zhenjiang212003,China;2.MarineEquipmentResearchInstitute,JiangsuUniversityofScienceandTechnology,Zhenjiang212003,China;3.ZhejiangAgricultureandForestryUniversity,Lin′an311300,China)

Eight compounds were isolated from methanol extract ofPyrolacallianthaby silica gel column chromatography and gel column chromatography.Their structures were identified by modern spectroscopic technology as luteolin(Ⅰ),tricin(Ⅱ),kaempferol(Ⅲ),coniferaldehyde(Ⅳ),vanillic acid(Ⅴ),salicylic acid (Ⅵ),3-hydroxy-olean-11-oxo-12-en-28-oic acid(Ⅶ),and 3,11-dioxoolean-12-en-28-oic acid(Ⅷ).CompoundsⅠ,Ⅱ,Ⅲ,Ⅵ,Ⅶ,Ⅷ were firstly isolated fromPyrolacalliantha.

Pyrolacalliantha;chemical component;tricin;oxo-oleanolic acid;isolation and identification

國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(21502073)，江蘇省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(BK20150465)，江蘇高校(高技術(shù)船舶)協(xié)同創(chuàng)新中心及江蘇科技大學(xué)海洋裝備研究院資助項(xiàng)目(HZ2016012)，浙江省重點(diǎn)科技創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(2013TD17)

2016-09-29

鄭紹軍(1980-)，男，江蘇連云港人，博士，研究方向：天然產(chǎn)物活性，E-mail:sz281cam@just.edu.cn；通訊作者：高玉華，副教授，E-mail:gaoyuhua1964@163.com。

10.3969/j.issn.1672-5425.2016.12.006

鄭紹軍，楊丹丹，朱瑞，等.鹿銜草化學(xué)成分的分離與鑒定[J].化學(xué)與生物工程，2016，33(12)：31-33.

R 284.2

A

1672-5425(2016)12-0031-03