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        病證結(jié)合的腸易激綜合征動物模型研究進(jìn)展

        2016-03-11 18:27:49李依潔魏瑋蘇曉蘭楊晨郭宇
        環(huán)球中醫(yī)藥 2016年2期
        關(guān)鍵詞:動物模型

        李依潔 魏瑋 蘇曉蘭 楊晨 郭宇

        100700 北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院[李依潔(博士研究生)、郭宇];中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院脾胃病科(蘇曉蘭、魏瑋);密云中醫(yī)醫(yī)院急診科(楊晨)

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        ·綜述·

        病證結(jié)合的腸易激綜合征動物模型研究進(jìn)展

        李依潔魏瑋蘇曉蘭楊晨郭宇

        100700北京中醫(yī)藥大學(xué)第一臨床醫(yī)學(xué)院[李依潔(博士研究生)、郭宇];中國中醫(yī)科學(xué)院望京醫(yī)院脾胃病科(蘇曉蘭、魏瑋);密云中醫(yī)醫(yī)院急診科(楊晨)

        【摘要】本文旨在總結(jié)近幾年腸易激綜合征在中醫(yī)藥相關(guān)研究中建立的病證結(jié)合動物模型。發(fā)現(xiàn)相應(yīng)病證結(jié)合動物模型的研究并未隨著證型分布的研究而深入,僅在肝氣乘脾證、肝郁氣滯證、脾腎陽虛證、脾胃濕熱證等證型的研究較多。本文遂從證型角度探索以上證型模型的研究進(jìn)展。

        【關(guān)鍵詞】腸易激綜合征;動物模型;病證結(jié)合

        腸易激綜合征(irritable bowel syndrome, IBS)是十分常見的消化系統(tǒng)功能性疾病,其患病率逐年升高[1],受到了行業(yè)的廣泛重視。針對IBS的動物模型建立方法包括物理化學(xué)刺激造模、心理應(yīng)激造模、導(dǎo)瀉造模及復(fù)合方法造模等[2]。在中醫(yī)動物實(shí)驗(yàn)研究現(xiàn)代化的過程中,考慮到辨證論治的核心思想,逐漸倡導(dǎo)制備病證結(jié)合的證候模型[3]。本文即以證型為綱進(jìn)行了相關(guān)總結(jié),以期對中醫(yī)藥研究IBS的動物實(shí)驗(yàn)提供模型借鑒意義。

        1肝氣乘脾證的IBS動物模型

        肝氣乘脾證,是基于肝經(jīng)郁滯、氣盛化火、木火乘土導(dǎo)致脾土受制、脾氣不舒、難以運(yùn)化,或脾血不足、生化乏源,又常被稱為肝郁脾虛證。在IBS中醫(yī)臨床辨證統(tǒng)計(jì)中,肝郁脾虛證的患者比例最大,占85.6%[4],而根據(jù)共識意見[5]描述此證多見腹瀉型腸易激綜合征(diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)。

        1.1肝氣乘脾證的IBS-D動物模型

        岳利峰等[6]采用慢性束縛方法制作應(yīng)激模型。而唐洪梅等[7]考慮要集合肝郁和脾虛兩點(diǎn)因素,采用大黃結(jié)合夾尾應(yīng)激法和番瀉葉結(jié)合束縛應(yīng)激法分別進(jìn)行大鼠行為學(xué)應(yīng)激,以此產(chǎn)生肝郁類似影響,并以化學(xué)性刺激導(dǎo)瀉產(chǎn)生脾虛類似結(jié)局。造模結(jié)束后,根據(jù)其糞點(diǎn)數(shù)和排便時(shí)間進(jìn)行評價(jià),證實(shí)其能成功誘導(dǎo)肝郁脾虛證IBS-D,并導(dǎo)致腸道高敏性。具體實(shí)驗(yàn)方法如下:前法以大黃煎煮液灌胃,同時(shí)夾尾30 min/次,每日2次;后法灌以番瀉葉煎煮液,同時(shí)用棉繩束縛四肢限制活動1h /次,每日1次,兩法連續(xù)造模7天。周云等[8]同樣采用番瀉葉水煎劑灌胃加四肢束縛應(yīng)激法造模后,發(fā)現(xiàn)大鼠體質(zhì)量下降,且糞便含水量、稀便級數(shù)、小腸炭末推進(jìn)百分率、血清中5-羥色胺的含量、病理組織學(xué)等多項(xiàng)指標(biāo)與應(yīng)用腸樂膠囊的治療組有明顯差異。

        母子分離(maternal deprivation stress,MS)法是一種幼年消極生活應(yīng)激,可誘導(dǎo)內(nèi)臟痛覺過敏及應(yīng)激性結(jié)腸運(yùn)動加強(qiáng)[9],而無明顯器質(zhì)性改變,符合IBS主要病理特征,是IBS的一種代表性造模方式。張北華[10]應(yīng)用母子分離法、慢性束縛應(yīng)激結(jié)合番瀉葉灌胃致瀉復(fù)合造模方法建立大鼠模型,根據(jù)腹瀉率、體重增長量、大便積分及近端結(jié)腸病理結(jié)果判斷其符合IBS-D肝郁脾虛型病證結(jié)合模型。趙迎盼等[11]綜合比較母子分離法、束縛刺激、番瀉葉灌胃三種方法后發(fā)現(xiàn),單一母子分離法不會引起腹瀉癥狀,成功造模需要三種因素疊加使用,缺一不可。無論是單因素母子分離組、束縛組,還是雙因素母子分離合束縛組、母子分離合番瀉葉組,均無法同時(shí)達(dá)到內(nèi)臟高敏感、肝郁特質(zhì)、腹瀉癥狀三個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。

        疏肝健脾法為肝郁脾虛證的對證治法,其代表方包括逍遙散、痛瀉要方等。石君杰等[12]采用慢性束縛合夾尾刺激法以達(dá)到應(yīng)激的目的,并聯(lián)合腹腔注射卵清蛋白免疫誘導(dǎo)致敏來制備IBS-D大鼠模型,在以逍遙散灌胃治療后證實(shí)其提高了大鼠的內(nèi)臟痛閾,同時(shí)也減輕了腸道過敏。楊銀芳等[13]運(yùn)用痛瀉要方治療IBS-D大鼠亦取得一定成果,其運(yùn)用寒冷—束縛應(yīng)激制備模型,證實(shí)能減少此模型大鼠排便次數(shù)及糞便含水量,并減緩腸動力。從以方測證角度分析,以上方法可能也成功制備了肝氣乘脾證的IBS-D模型,但對制備方法無證侯系統(tǒng)評價(jià),尚需進(jìn)一步研究確定。

        1.2肝氣乘脾證的IBS-C動物模型

        脾虛則中氣不足、運(yùn)化無力,故臨床也可見到便秘型腸易激綜合征(constipation-predominant irritable bowel syndrome,IBS-C)。而冰水灌胃法為常用的建立便秘表現(xiàn)的應(yīng)激刺激方法。邱貝[14]采用冰水灌胃法建立IBS-C大鼠模型,并證實(shí)麻枳降濁方對其有治療作用。涂星等[15]參考以上病機(jī),驗(yàn)證常見的IBS-C模型建立方法,最后證實(shí)母嬰分離結(jié)合冰水灌胃法能夠高度模擬IBS-C腸道高敏感性而無病理改變的疾病特征,并符合肝郁脾虛證情志改變、進(jìn)食量與活動量減少、排便減少、糞質(zhì)干結(jié)等證侯特點(diǎn)。具體制備方式如下:每日將乳鼠(出生21天)與母鼠分離,單籠飼養(yǎng)180分鐘后再與母鼠同籠飼養(yǎng),共進(jìn)行14天,然后冰水灌胃2周。該制備方法模型穩(wěn)定、可操作性較強(qiáng),值得進(jìn)一步研究和驗(yàn)證。

        2肝郁氣滯證的IBS動物模型

        IBS的發(fā)病與精神心理因素有密切相關(guān)性[16]。精神心理異常多歸結(jié)于肝失疏泄,氣機(jī)郁滯不暢[17]。《丹溪心法·六郁》言:“氣血沖和,萬病不生,一有怫郁,諸病生焉。故人身諸病,多生于郁。”肝郁氣滯證IBS模型建立方法尚無評定標(biāo)準(zhǔn),多以應(yīng)激刺激模擬證型發(fā)展的氣郁特點(diǎn)。常見的應(yīng)激方式包括:束縛、擁擠、避水、寒冷、夾尾、電刺激等[18]。與肝氣乘脾證不同,肝郁氣滯證臨證多見IBS-C。

        2.1肝郁氣滯證的IBS-C動物模型

        韓棉梅[19]采用夾尾法加饑飽失常法制備肝郁氣滯證大鼠,具體操作如下:將SD大鼠5只置于同一籠內(nèi),以長尾票夾鉗夾大鼠尾部致整籠大鼠保持激怒狀態(tài),刺激30 min/次,每日4次,2次刺激間隔時(shí)間為3小時(shí),同時(shí)隔天喂食,喂食時(shí)食量不限,食物為高脂飼料,造模時(shí)間共7天。考慮造模方式符合情志致病特點(diǎn),結(jié)合大鼠生物學(xué)表現(xiàn)和四磨湯療效,判定造模成功,且模型大鼠符合肝郁氣滯證證侯特點(diǎn)及發(fā)病規(guī)律。此外,陸迅等[20]采用結(jié)直腸球囊擴(kuò)張刺激合并限水法[21]制備模型,即大鼠在清醒的狀態(tài)下,使用自制球囊,插入肛門4~5 cm,約至大鼠降結(jié)腸部位,每次充氣,維持腸道壓力7.98 kPa(60 mmHg) ,保留1分鐘,然后撤氣。每日操作1 次,共持續(xù)刺激15天;15天后,大鼠禁水不禁食,共3天。經(jīng)腹部回撤反射壓力閾值評分(abdominal withdrawal reflex, AWR)判定此法可成功制備IBS-C大鼠模型;模型制備完成后,以行氣潤腸湯進(jìn)行治療,且療效肯定,但未提及是否符合肝郁氣滯證證候特點(diǎn),故單純使用此方法尚需進(jìn)行驗(yàn)證和評判。

        2.2肝郁氣滯證的IBS-D動物模型

        肝者,將軍之官,氣郁日久則化火,火熱灼傷津液,故多表現(xiàn)為便秘型IBS;但氣滯則運(yùn)化失常,水濕內(nèi)生,下流大腸,遂有研究顯示8.39%表現(xiàn)為腹瀉型[22]。

        謝建群等[23]采用急性避水應(yīng)激刺激法[24]制備符合IBS-D癥狀的模型,考慮造模方法的強(qiáng)心理刺激性及采用經(jīng)驗(yàn)方疏肝飲治療后模型大鼠血管活性腸肽、一氧化氮等胃腸激素水平有所改善,認(rèn)為造模方法符合肝郁氣滯證證候特點(diǎn)及IBS疾病特征。

        3其他證型的IBS動物模型

        3.1脾腎陽虛證的IBS動物模型

        脾腎陽虛證者,病位雖在腸,但與肝、脾密切相關(guān),且多因慢性病程,日久及腎,脾腎陽虛,臟腑失于溫養(yǎng),從而表現(xiàn)出病情遷延難愈。關(guān)鍵治則為“溫補(bǔ)脾腎”,而本證動物模型的建立,考慮到證型特點(diǎn),造模周期應(yīng)當(dāng)較長,并應(yīng)采取復(fù)合方式建立。蘇曉蘭等[25]綜合以上觀點(diǎn),采用物理化學(xué)刺激共同作用的復(fù)合方法建立IBS-D大鼠模型,具體操作如下:先將石蠟潤滑后的連續(xù)硬膜外導(dǎo)管(直徑1 mm)經(jīng)肛門插入距肛緣3~5 cm處,注入0.5%冰醋酸,將大鼠倒置,按住肛門約1分鐘,以防冰醋酸漏出,首次劑量從0.2 mL開始,每2天增加0.1 mL,增加至0.5 mL時(shí)不變,持續(xù)2周;然后將一次性兒童型導(dǎo)尿管球囊端石蠟潤滑后插入大鼠距肛緣2~3 cm處,另一端連接5 mL注射器,每次注射器充氣1.5~2.0 mL,進(jìn)行球囊直腸刺激,間斷持續(xù)3~5分鐘,每天2次,同時(shí)聯(lián)合夾尾刺激,間斷持續(xù)3~5分鐘,每天2次,也持續(xù)2周。在結(jié)腸注射冰醋酸、直腸擴(kuò)張聯(lián)合夾尾刺激的同時(shí)予0.3~0.5 g/mL(20 mL/kg)番瀉葉濃縮劑灌胃,每只每次2~2.5 mL,每日1次,持續(xù)灌胃4周。造模結(jié)束后根據(jù)大鼠排便粒數(shù)、布里斯托爾糞便量表(bristol stool form scale)、平均稀便級和糞便干濕比重、腹壁撤退反射評分等判斷其符合IBS慢性內(nèi)臟感覺過敏理論,并且模型大鼠腸黏膜無大體及組織學(xué)改變,從而判定造模成功。從中醫(yī)致病因素分析,番瀉葉味甘、苦,性寒,有小毒,有瀉熱行滯、通便利水之功,加之冰醋酸寒涼,二者共同作用,胃腸陽氣受損,日久及腎,故符合脾腎陽虛的病機(jī)要素,是制備脾腎陽虛證IBS動物模型較理想的方法。

        3.2脾胃濕熱證的IBS動物模型

        譚潔等[26]通過慢性應(yīng)激復(fù)合濕熱刺激法,成功建立脾胃濕熱型IBS-D大鼠模型,具體操作如下:以高糖高脂飼料喂養(yǎng)大鼠,第8天開始置于高溫高濕度環(huán)境;第15天開始予二鍋頭10 mL/kg,每日1次,灌胃,共7天;同時(shí)每日隨機(jī)予大鼠1種刺激,刺激方法共包括7種:禁水24小時(shí)、夾尾1分鐘、45℃環(huán)境5分鐘、4℃冰水游泳3分鐘、12小時(shí)明暗顛倒、禁食24小時(shí)、水平振蕩(160次/min)45分鐘等,連續(xù)兩天內(nèi)所予處理不相同,讓大鼠不能預(yù)料刺激的發(fā)生,共持續(xù)3周。同時(shí),徐秋穎等[27]應(yīng)用不可預(yù)見性應(yīng)激建立脾胃濕熱證IBS模型,并分析了模型大鼠在糞便性狀、腸道痛閾、行為/心理等方面的分?jǐn)?shù),認(rèn)為模型制備成功并具備可復(fù)制性。

        3.3脾胃虛寒證與脾胃虛弱證的IBS動物模型

        梁萬年、謝建群等[28、29]均認(rèn)為番瀉葉水煎劑灌胃加四肢束縛應(yīng)激刺激可造成IBS模型屬脾胃虛寒證,并分別以高良姜總黃酮、健脾溫中法治療后證實(shí)有效,但并無其他相關(guān)證型評價(jià)指標(biāo)。此法是否真的可以建立脾胃虛寒證IBS模型需要進(jìn)一步研究。

        鑒于脾胃虛寒證與脾胃虛弱證存在證型要素的不同,對符合脾胃虛弱證證候發(fā)展規(guī)律的IBS模型研究尚無共識。脾胃虛弱的病因多責(zé)之外邪侵襲中焦、飲食不調(diào)中傷脾胃、木旺克土或先天稟賦不足等,而IBS作為常見的功能性疾病,其肝經(jīng)疏泄失司和氣機(jī)運(yùn)化失常的病機(jī)貫穿整個(gè)病程[30]。尚未發(fā)現(xiàn)單純針對脾虛證的模型制備標(biāo)準(zhǔn);相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究也缺乏單獨(dú)針對此證型的制備與治療方法,多參照肝郁脾虛證的模型制備[31]或以方測證運(yùn)用溫中健脾湯藥進(jìn)行治療,如附子理中湯[32]、四君子湯和理中湯[33]等。

        3.4寒熱錯(cuò)雜證的IBS動物模型

        寒熱錯(cuò)雜證IBS根據(jù)病機(jī)發(fā)展及癥狀表現(xiàn)多歸屬于混合型腸易激綜合征(mix-predominant irritable bowel syndrome,IBS-M)[5],有研究顯示此證型在臨床患者中僅占1.98%[22]。目前缺乏關(guān)于此證型IBS及IBS-M的實(shí)驗(yàn)研究,關(guān)于這方面的模型制備及相關(guān)證型評價(jià)指標(biāo)均需繼續(xù)探索和研究。

        4討論

        IBS根據(jù)疾病表現(xiàn)屬于中醫(yī)“泄瀉”“便秘”“腹脹”“腹痛”等范疇,病位涉及肝、脾、腎三臟。2011年《腸易激綜合征中西醫(yī)結(jié)合診療共識意見》[5]確定本病包括肝郁氣滯證、大腸燥熱證、肝氣乘脾證、脾胃虛弱證、寒熱夾雜證等5個(gè)中醫(yī)證型。而關(guān)于本病的證型分布規(guī)律,許多學(xué)者認(rèn)為并不局限于此:吳皓萌等[30]根據(jù)臨床患者辨證論治分為肝郁脾虛、脾腎陽虛、肝陽上亢、濕邪中阻、肝氣郁滯、肝氣乘脾、脾胃虛弱、大腸濕熱、脾胃氣滯等9 個(gè)證型;時(shí)樂等[34]認(rèn)為其證候分布涉及脾胃虛弱、肝胃郁熱、脾胃陽虛、脾胃陰虛、肝胃不和、脾虛濕困、肝郁脾虛、中氣下陷、肝腸氣滯、脾腎陽虛等。然而,建立相應(yīng)病證結(jié)合動物模型的研究卻并未隨著證型分布的研究而深入。

        在已知的IBS動物實(shí)驗(yàn)中,常見以單純疾病模型混淆病證結(jié)合模型,部分研究對模型種類和證型的選擇原因不明確,既無法體現(xiàn)中醫(yī)中藥對證型的針對性,也無法確定模型大鼠的疾病趨勢;又存在通過以方測證的形式驗(yàn)證模型的證候?qū)傩?,忽略了方劑對不同證型的重疊效果,無法突出證候的特征性癥狀和方劑辨證施治的特異性效果。

        目前許多學(xué)者已意識到病證結(jié)合模型并非單純綜合現(xiàn)代病理造模和傳統(tǒng)中醫(yī)病因造模兩種方式,而是強(qiáng)調(diào)整體影響因素,模仿疾病及證型形成的自然狀態(tài)[35-36],然而整體觀納入造模方式存在操作因素復(fù)雜、可控性差、實(shí)驗(yàn)成本增加等困難,目前研究較少,存在阻力。而證候模型判斷缺乏標(biāo)準(zhǔn),尤其是缺乏體現(xiàn)中醫(yī)四診信息特點(diǎn)的判定方式[37],無法為進(jìn)一步進(jìn)行實(shí)驗(yàn)?zāi)P吞剿魈峁?qiáng)有力的參考,也是亟待解決的問題和值得進(jìn)一步研究的方向。

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        (本文編輯: 韓虹娟)

        Disease and pattern-based Irritable Bowel Syndrome(IBS)Animal ModelsLIYi-jie,WEIWei,SUXiao-lan,etal.DongzhimenHospitalofBeijingUniversityofChineseMedicine,Beijing100700,China

        【Abstract】In this review, we summarize experimental animal models of irritable bowel syndrome (IBS) based on differentiation of disease and pattern in traditional Chinese medicine ( TCM) . Our findings show that the corresponding animal models involve only a few patterns, instead of covering all the patterns. Liver-qi stagnation pattern, the pattern of the liver overacting on the spleen, yang deficiency pattern of the spleen and kidney and the pattern of dampness-heat in the spleen and stomach are patterns most often studied. This review summarizes the research progress of the above models from the perspective of pattern types.

        【Key words】Irritable bowel syndrome;Animal models;Combination of disease and pattern

        (收稿日期:2015-05-04)

        Corresponding author:WEI Wei, E-mail: sxxtyy@sina.com

        【中圖分類號】R256.3

        【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A

        doi:10.3969/j.issn.1674-1749.2016.02.045

        作者簡介:李依潔(1989- ),女,2014級在讀博士研究生。 研究方向:中西醫(yī)結(jié)合治療脾胃病。E-mail:lyj.lyj.lyj@163.com通訊作者: 蘇曉蘭( 1982- ) , 女, 博士研究生, 住院醫(yī)師。研究方向: 中西醫(yī)結(jié)合消化病學(xué)。E-mail:suxiaolan1982@126.com

        基金項(xiàng)目:國家自然基金青年基金項(xiàng)目(81403389)

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