楊顯榮 吉林省德惠市肉品管理辦公室 130300

豬病診斷和防治過(guò)程中PCR技術(shù)的應(yīng)用

楊顯榮 吉林省德惠市肉品管理辦公室 130300

近些年，豬病發(fā)生的幾率越來(lái)越高，且病癥也越來(lái)越嚴(yán)重，這使得養(yǎng)豬業(yè)的發(fā)展也受到極大的影響。在豬病的診斷與防治中，最重要的就是精確快速地找到導(dǎo)致豬病發(fā)生的病原菌，這樣才能根據(jù)病原菌的種類(lèi)，采取有針對(duì)性的措施來(lái)加以應(yīng)對(duì)。故開(kāi)發(fā)一種能夠迅速對(duì)豬病進(jìn)行診斷的技術(shù)就變得十分重要，而應(yīng)用PCR技術(shù)則能很好地滿(mǎn)足這一要求。

1　PCR技術(shù)概況

在豬病診斷與防治中，PCR技術(shù)主要有三個(gè)優(yōu)點(diǎn)：一是操作簡(jiǎn)便，二是具有高速度的擴(kuò)增效果，三是具有較高的特異性。目的基因在PCR技術(shù)下，能夠在非常短的時(shí)間內(nèi)被快速擴(kuò)增，從而達(dá)到檢測(cè)微量基因的目的。同時(shí)在PCR技術(shù)中，特異性會(huì)受到靶序列兩頭的引物—寡核苷酸所影響。由于PCR技術(shù)的不斷發(fā)展，目前PCR技術(shù)在傳統(tǒng)基礎(chǔ)上又不斷衍生出了幾類(lèi)新型的技術(shù)，例如PCR多重技術(shù)、PCR熒光定量技術(shù)，以及RT-PCR技術(shù)，這些技術(shù)在檢測(cè)動(dòng)物疫病方面具有非常重要的意義和作用。

2　豬病診斷和防治過(guò)程中PCR技術(shù)的應(yīng)用

（1）檢測(cè)單一病毒—豬圓環(huán)病毒。實(shí)驗(yàn)人員按照基因儲(chǔ)存庫(kù)中豬圓環(huán)病毒的基因序列ORF2來(lái)對(duì)擴(kuò)增引物進(jìn)行設(shè)計(jì)，并利用該病毒的臨床分離基因來(lái)作為模板基因，然后對(duì)反應(yīng)條件進(jìn)行適當(dāng)?shù)暮Y選，從而形成一種能夠?qū)ωi圓環(huán)病度2型進(jìn)行檢測(cè)的PCR方法。結(jié)果表明，用這一方法對(duì)豬圓環(huán)病毒2型擴(kuò)增基因以后，得到目的基因的片段長(zhǎng)度為559bp，而在相等條件下，對(duì)其他能夠引起類(lèi)似豬病的感染病毒進(jìn)行檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，其實(shí)驗(yàn)的結(jié)果均呈陰性，說(shuō)明此種檢測(cè)方法具有非常好的特異性。同時(shí)通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，經(jīng)檢測(cè)的30個(gè)臨床病料，總共81份，其結(jié)果具有非常高的準(zhǔn)確率，這說(shuō)明PCR檢測(cè)方法具有較好的可行性，因此能夠?yàn)樨i場(chǎng)養(yǎng)殖提供準(zhǔn)確的防疫依據(jù)。

（2）檢測(cè)單一病毒—豬瘟病毒。在眾多豬病中，豬瘟具有非常嚴(yán)重的危害，而且會(huì)給養(yǎng)豬業(yè)的經(jīng)濟(jì)效益造成非常大的損失。目前，盡管?chē)?guó)內(nèi)相關(guān)部門(mén)已經(jīng)采取了多種措施來(lái)對(duì)豬瘟進(jìn)行預(yù)防和控制，但是結(jié)果都很不理想。而隨著PCR技術(shù)的應(yīng)用，人們根據(jù)設(shè)計(jì)引物的不同，建立了RT-PCR技術(shù)來(lái)對(duì)豬瘟進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果表明，其能夠?qū)ωi瘟病毒的核酸序列進(jìn)行擴(kuò)增，而且這一擴(kuò)增具有明顯的特異性，同時(shí)檢測(cè)結(jié)果的可靠性也非常高，因此能夠?qū)ωi瘟進(jìn)行快速診斷和防治。

（3）檢測(cè)單一病毒—呼吸與繁殖綜合癥。此類(lèi)豬病主要發(fā)生于母豬，進(jìn)而傳染給仔豬。這種病癥不僅會(huì)對(duì)母豬的繁殖造成影響，同時(shí)還會(huì)對(duì)仔豬的存活率及免疫功能造成較大的影響。因此可以運(yùn)用快速診斷的結(jié)果來(lái)對(duì)該病進(jìn)行有效的防治。實(shí)驗(yàn)人員利用聚合酶中的鏈?zhǔn)椒磻?yīng)來(lái)對(duì)這一病癥進(jìn)行了檢測(cè)，而且經(jīng)過(guò)不斷研究和試驗(yàn)，最終建立了該病癥的檢測(cè)方法PCR法。使用該種檢測(cè)方法的注意事項(xiàng)為：首先，若RNA是從陳舊的樣品中進(jìn)行提取的，則容易發(fā)生降解反應(yīng)，而在電泳實(shí)驗(yàn)中，新鮮的樣品則會(huì)有三條明顯的RNA，而且外形也相對(duì)完整。其次是在RNA在提取以后，進(jìn)行cDNA反轉(zhuǎn)錄后，在－20℃時(shí)經(jīng)歷1周，就會(huì)出現(xiàn)降解反應(yīng)。

（4）檢測(cè)混合病毒。多重PCR技術(shù)主要指的是將兩種以上的引物加到一個(gè)反應(yīng)系統(tǒng)里面，與一般的PCR技術(shù)進(jìn)行對(duì)比發(fā)現(xiàn)，這一技術(shù)能夠?qū)煞N或者兩種以上的豬病病菌進(jìn)行同時(shí)檢測(cè)，并且還能獲得非常準(zhǔn)確的檢測(cè)結(jié)果，同時(shí)反應(yīng)的速度非常快，而且非常靈敏，因此具有非常好的應(yīng)用效果。在對(duì)豬病進(jìn)行檢測(cè)和防治的過(guò)程中，經(jīng)常會(huì)遇到兩種或者兩種以上病毒混合感染的情況，而且長(zhǎng)期以來(lái)大量的獸醫(yī)都只是利用以往的經(jīng)驗(yàn)來(lái)進(jìn)行診斷和治療，因此極易錯(cuò)過(guò)最佳的治療時(shí)機(jī)。而應(yīng)用PCR技術(shù)進(jìn)行豬病的診斷和防治就變得非常有價(jià)值。

3　總結(jié)

綜上所述，目前針對(duì)豬病中容易引起病癥的病毒及病原體等，實(shí)驗(yàn)人員設(shè)計(jì)了5種PCR技術(shù)檢測(cè)方法，主要是應(yīng)對(duì)豬瘟、呼吸與繁殖綜合癥及腦炎等，因?yàn)檫@幾種病癥常常混合在一起對(duì)豬體進(jìn)行感染。采用多重PCR能夠產(chǎn)生的擴(kuò)增產(chǎn)物主要有三種，即263bp、380bp和508bp，而且檢測(cè)的靈敏性比傳統(tǒng)的檢測(cè)技術(shù)要高出數(shù)倍，這說(shuō)明多重PCR技術(shù)在進(jìn)行豬病診斷和防治過(guò)程中具有非常高的靈敏性和特異性。