許聲豪

（福建省寧德市古田縣鶴塘鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，福建 古田 352265）

關(guān)于豬源鏈球菌的分離與鑒定思考

許聲豪

（福建省寧德市古田縣鶴塘鎮(zhèn)農(nóng)業(yè)服務(wù)中心，福建 古田 352265）

豬鏈球菌病指的是有多種致病鏈球菌感染所引起的一種人畜共患病，其主要特征為敗血癥、腦膜炎和關(guān)節(jié)炎等，是造成養(yǎng)殖戶減產(chǎn)的主要原因之一，若沒有及時(shí)控制和治療，還會(huì)威脅人的生命安全，給家庭和社會(huì)造成難以挽回的損失。當(dāng)前，受市場因素的影響，當(dāng)前我國養(yǎng)豬業(yè)不斷發(fā)展和壯大，豬鏈球菌病的發(fā)病率隨之升高。本文從某養(yǎng)豬場內(nèi)分離到的多豬鏈球菌為研究對象，對其進(jìn)行了分離和鑒定，系統(tǒng)的分析了豬源鏈球菌的病原學(xué)特性，希望能夠?yàn)轲B(yǎng)豬業(yè)的穩(wěn)定發(fā)展提供一些參考。

豬源鏈球菌；分離；鑒定；病原學(xué)特性

某養(yǎng)豬場飼養(yǎng)的40頭仔豬突發(fā)豬鏈球菌病，主要表現(xiàn)為體溫升高、呼吸不暢、食欲不振、嗜睡嚴(yán)重等癥狀，部分豬還出現(xiàn)了出血性紅斑、糞便過稀的情況。經(jīng)解剖檢查可見，患者腹部皮下組織、腹股溝淋巴結(jié)、肺部出血明顯[1]，脾胃腫脹、顏色變深，腎臟有少量紅色出血點(diǎn)。為抑制病情進(jìn)一步發(fā)展，該養(yǎng)豬場采用了抗菌藥物和抗生素對患豬進(jìn)行治療，但收效甚微。本文從病原學(xué)入手，對收集到的患豬病樣進(jìn)行了生態(tài)學(xué)、培養(yǎng)特性和血清血鑒定等試驗(yàn)，具體情況如下。

1 材料和方法

1.1 材料

分離和鑒定所用的材料均取自于該豬場病豬，主要有脾胃、淋巴結(jié)和皮膚等組織，所選用的工具均購于市場，包括微量生化管、藥敏紙片、鏈球菌乳膠凝集標(biāo)準(zhǔn)診斷試劑盒等，豬鏈球菌2型陽性血清、小白鼠由某農(nóng)業(yè)大學(xué)生物部提供。以上材料均符合試驗(yàn)要求。

1.2 細(xì)菌學(xué)檢查

取少量樣本，將其分別涂抹于普通瓊脂平板和鮮血瓊脂平板上，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)1 d，室內(nèi)溫度維持在36～37 ℃，革蘭氏染色后鏡檢。將鏡檢中發(fā)現(xiàn)的革蘭氏陽性成雙或短鏈狀菌落接種到馬丁瓊脂平板和血清瓊脂平板上，繼續(xù)培養(yǎng)1 d，溫度36～37 ℃，完成上述步驟后，選取某些較為可疑的菌落進(jìn)行染色處理，鏡檢觀察，然后接種到THB培養(yǎng)基中，進(jìn)行增菌培養(yǎng)。THB培養(yǎng)基中應(yīng)有葡萄糖（0.2%）、犢牛血清（1%）等輔助培養(yǎng)成分[2]，培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d。

1.3 生化和生長試驗(yàn)

將細(xì)菌學(xué)檢查中分離出來的純培養(yǎng)菌株取出，接種到血清瓊脂培養(yǎng)基中，培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d，完成該步驟后，觀察培養(yǎng)基中出現(xiàn)溶血現(xiàn)象的菌落，按照步驟，將其中的典型部分分別接種到葡糖糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖等培養(yǎng)基中，進(jìn)行常規(guī)生化試驗(yàn)和鑒別生化試驗(yàn)，記錄所得結(jié)果。最后，將不同培養(yǎng)基中生長出的菌株分別接種到NaCl、馬尿酸鈉、七葉苷、明膠液化等培養(yǎng)基中，進(jìn)行生長試驗(yàn)。

1.4 動(dòng)物致病性實(shí)驗(yàn)

選取8只體重為20～22 g左右的小白鼠，將THB培養(yǎng)皿培養(yǎng)朱的菌株，注射到4只小白鼠體內(nèi)，注射劑量為0.2 mL/只，另外4只注射生理鹽水，劑量0.2 mL/只，對比以上8只小白鼠的生存狀況。

1.5 溶血試驗(yàn)

溶血試驗(yàn)分為兩種，及平板法和接觸法。平板法指的是將鏈球菌接種在鮮血平板上（5%），培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d，觀察菌落的生長情況，若其周圍有明顯的溶血環(huán)，則判斷為陽性。接觸法指的是將菌株接種在THB培養(yǎng)皿中，培養(yǎng)溫度37 ℃，培養(yǎng)時(shí)間1 d，然后取50 μ L菌液，滴注在頂板上，將其與血紅細(xì)胞混合，觀察1 h后得出鑒定結(jié)果。

1.6 藥敏試驗(yàn)

采用紙片擴(kuò)散法，將選定的鏈球菌接種在THB培養(yǎng)基中，培養(yǎng)24 h后，將生理鹽水稀釋，放入振蕩器中震蕩，得出渾濁液，在無菌操作中，使用習(xí)慣吸取0.2 mL放于血清瓊脂平板上，注意涂抹均勻，加蓋靜置5 min后將藥敏試紙貼在平板上，輕輕按壓，使其貼附在培養(yǎng)基表面。每個(gè)平板均貼5張藥敏試紙，試紙與試紙之間的距離應(yīng)在2 cm左右。完成以上操作后，將培養(yǎng)基放入溫箱，培養(yǎng)20～24 h，觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果。若抑菌圈直徑達(dá)到了15 mm或以上，則判斷為高度敏感，若抑菌圈直徑在10～15 mm之間，則判斷為中度敏感，若未超過10 mm，則判斷為耐藥[3]。

2 結(jié)果與分析

2.1 細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果

細(xì)菌學(xué)檢查結(jié)果顯示，菌落中有大量的革蘭氏陽性、短鏈狀、散在的球菌。分離結(jié)果顯示，菌落在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上生長情況良好，大部分菌落呈圓形，表面光滑，邊緣整齊，顏色為灰色或者灰白色，并帶有一些小的菌落有明顯的β型溶血。普通瓊脂培養(yǎng)基上菌落生長狀況一般。

2.2 生化和生長試驗(yàn)結(jié)果

分離菌株受溫度影響較大，36～37 ℃時(shí)生長良好，10 ℃或40 ℃時(shí)生長不良或者不能生長。分離菌株能夠發(fā)酵葡糖糖、乳糖、麥芽糖、蔗糖、山梨醇、木糖，NaCL、馬尿酸鈉、七葉苷、明膠液化的生化結(jié)果均為陰性。

2.3 動(dòng)物致病試驗(yàn)結(jié)果

接種病料的4四只白鼠均在20 h內(nèi)死亡，剖檢發(fā)現(xiàn)，白鼠的肝脾、腎臟組織明顯變大，膀胱充盈，胸腔積液，心臟出血。對白鼠胸腔積液進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢后發(fā)現(xiàn)，有很多單個(gè)或承兌的短鏈革蘭氏陽性球菌。其余4只小白鼠存活情況良好，未出現(xiàn)不良反應(yīng)，此結(jié)果表明，分離菌株有較強(qiáng)的致病性。

2.4 溶血試驗(yàn)結(jié)果

兩種方法檢測結(jié)果均顯示為β型溶血。

2.5 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

分離菌株對頭孢噻呋、頭孢他啶、阿莫西林、氧氟沙星高敏，對阿米卡星、氯霉素、環(huán)丙沙星中敏，對青霉素、恩諾沙星、卡那霉素、紅霉素、慶大霉素、強(qiáng)力霉素、新霉素抗藥。

3 結(jié)論

根據(jù)以上檢驗(yàn)結(jié)果，若出現(xiàn)豬鏈球菌病史，應(yīng)先進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，避免濫用抗生素，根據(jù)實(shí)際情況選擇適當(dāng)?shù)慕o藥途徑，保證連續(xù)用藥。同時(shí)，做好綜合性的防護(hù)措施，搞好衛(wèi)生，定期消毒，加強(qiáng)管理，定期免疫接種，提高豬的抗病能力。

[1]江甜，胡智斌，谷長勤，等.7型豬鏈球菌的分離鑒定及特性[J].中國獸醫(yī)學(xué)報(bào)，2011，31（10）.

[2]趙海忠，王生奎，張以芳.豬鏈球菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)[J].湖北畜牧獸醫(yī)，2008，（5）：1453–1457.

[3]李肖梁，馬有智，方維煥，等.豬源鏈球菌的分離與鑒定[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2003，（10）：8-9.

（編輯：張淑鳳）

S852.61

B

1006-799X(2016)18-0105-01

許聲豪（1960-），男，福建古田人，獸醫(yī)師，主要從事獸醫(yī)工作。