麥碧 胡桂英 張華

免疫組化P16蛋白在不同級(jí)別宮頸病變中表達(dá)差異的分析

麥碧 胡桂英 張華

目的分析免疫組織化學(xué)(免疫組化)技術(shù)檢測(cè)P16蛋白在不同級(jí)別宮頸病變中表達(dá)差異的效果。方法60例不同級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變(CIN,CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)各20例)患者及20例宮頸癌患者作為研究對(duì)象,采用免疫組化技術(shù)檢測(cè)其P16蛋白的表達(dá)情況。結(jié)果CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)、宮頸癌患者的P16陰性、弱陽性、陽性、強(qiáng)陽性例數(shù)分別為1、16、3、0例,0、13、5、2例,0、11、5、4例,0、5、7、8例。不同病變程度患者P16蛋白表達(dá)情況比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其表達(dá)強(qiáng)度隨著患者病情加重而增加。結(jié)論在不同級(jí)別宮頸病變中實(shí)施P16免疫組化檢測(cè),能使患者的診斷更加正確,具有重要的應(yīng)用價(jià)值,能為后期的治療方式提供有利依據(jù),值得在進(jìn)一步推廣及運(yùn)用。

不同級(jí)別；宮頸病變；表達(dá)差異；免疫組織化學(xué)；P16蛋白

宮頸癌為臨床婦科較為常見的惡性腫瘤。而宮頸上皮內(nèi)瘤變則作為宮頸癌的癌前病變,及時(shí)處理宮頸上皮內(nèi)瘤變能有效預(yù)防宮頸癌發(fā)生,因此,需要對(duì)各級(jí)別的宮頸上皮內(nèi)瘤變進(jìn)行鑒別［1,2］,本院對(duì)P16蛋白在不同級(jí)別宮頸上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌中的表達(dá)差異進(jìn)行深入研究,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收取2014年6月～2015年7月的婦科門診患者手術(shù)切除或者病理活檢的60例CIN患者及20例宮頸癌患者作為研究對(duì)象,其中CINⅢ級(jí)患者20例、CINⅡ級(jí)患者20例、CINⅠ級(jí)患者20例。患者年齡20～40歲,平均年齡(30.21±4.67)歲。

1.2 方法

1.2.1 免疫組化染色方法 免疫組化采用的單克隆羊抗鼠為第二抗體,單克隆鼠抗人抗體抗P16為第一抗體。所有的宮頸上皮內(nèi)瘤變以及宮頸癌組織石蠟標(biāo)本均進(jìn)行連續(xù)切片,切片厚為4 μm左右,對(duì)石蠟切片實(shí)施蘇木素伊紅染色,確保病變存在,剩余切片均實(shí)施免疫組化P16染色,切片主要使用APES溶液制作而成的膠片,實(shí)施二甲苯脫蠟,將切片置于預(yù)熱為98℃的抗原修復(fù)液中,采用微波爐實(shí)施抗原修復(fù),修復(fù)時(shí)間為15 min,待冷卻后,采用PBS液進(jìn)行沖洗,每次沖洗時(shí)間為5 min,然后將第二抗體加入,在室溫內(nèi)35 min后,最后復(fù)染采用DAB顯色蘇木素,數(shù)秒鐘后用流水進(jìn)行沖洗,實(shí)施梯度酒精脫水后封片。

1.2.2 免疫組化染色結(jié)果判定方式 免疫組織化學(xué)判定方式為兩方面：細(xì)胞中表達(dá)部位和表達(dá)強(qiáng)度部位。陽性結(jié)果主要為黃色以及棕黃色染色,表達(dá)部位在人體細(xì)胞核或者細(xì)胞漿,表達(dá)強(qiáng)度參照臨床半定量標(biāo)準(zhǔn),按照患者陽性細(xì)胞比例、分布情況進(jìn)行記錄,標(biāo)準(zhǔn)如下。陰性：陽性細(xì)胞數(shù)、單個(gè)細(xì)胞染色<5%。弱陽性：陽性細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞團(tuán)染色在5%～25%。陽性：陽性細(xì)胞數(shù)、簇狀或者片狀細(xì)胞染色在25%～51%。強(qiáng)陽性：陽性細(xì)胞數(shù)、彌散細(xì)胞染色>50%。

1.3 觀察指標(biāo) 免疫組化檢測(cè)P16蛋白在不同程度宮頸病變中的表達(dá)情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。單向有序計(jì)數(shù)資料采用秩和檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

不同宮頸病變程度患者P16蛋白表達(dá)情況比較,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其表達(dá)強(qiáng)度隨著患者病情加重而增加。見表1。

表1 P16蛋白在不同程度宮頸病變中的表達(dá)情況比較［n(%)］

3 討論

P16蛋白為蛋白激酶抑制劑,對(duì)患者細(xì)胞生長周期具有負(fù)調(diào)控作用,相關(guān)研究表面,P16蛋白在癌前病變和宮頸癌中表現(xiàn)均為過度表達(dá),是由于人乳頭瘤病毒(HPV)早期基因E7從而使蛋白失活所致,P16蛋白被稱為在宮頸癌和宮頸上皮內(nèi)瘤變具有特異性和敏感性的標(biāo)志物,也可以作為宮頸刮片診斷和宮頸病理的補(bǔ)充檢查,P16蛋白過度表示能預(yù)示HPV基因異常表達(dá),為早期診斷宮頸癌的標(biāo)志物。我院通過對(duì)免疫組化P16蛋白在不同級(jí)別宮頸病變中表達(dá)差異進(jìn)行分析,研究結(jié)果顯示,P16蛋白在臨床宮頸上皮內(nèi)瘤變?cè)\斷中具有極其重要的意義［3,4］。

由本研究結(jié)果可見,P16蛋白在CINⅠ級(jí)、CINⅡ級(jí)表達(dá)中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),CINⅡ級(jí)中P16蛋白表達(dá)強(qiáng)度明顯強(qiáng)于CINⅠ級(jí),CINⅠ級(jí)中P16蛋白的表達(dá)強(qiáng)度主要為弱陽性,占總數(shù)的80.00%,并未見強(qiáng)陽性病例情況,同時(shí)存在1例陰性病例。而在CINⅡ級(jí)中未發(fā)現(xiàn)陰性病例,弱陽性占總數(shù)的65.00%,陽性和陽性病例顯著增加。CINⅡ級(jí)為宮頸癌患者的癌前病變,對(duì)于該疾病應(yīng)早期實(shí)施干預(yù)措施,當(dāng)CINⅡ級(jí)、CINⅠ級(jí)診斷出現(xiàn)困難時(shí),應(yīng)再次實(shí)施P16蛋白免疫組織染色,確保診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性。防止錯(cuò)失治療時(shí)機(jī)和過度治療。在臨床細(xì)胞學(xué)診斷中,將CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)兩種病變稱作宮頸上皮內(nèi)高度病變。但臨床對(duì)CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)的處理具有不同。本研究結(jié)果顯示,P16蛋白表達(dá)強(qiáng)度在CINⅢ級(jí)、CINⅡ級(jí)表達(dá)中差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),研究顯示,在CINⅢ級(jí)中其強(qiáng)陽性病例相對(duì)增加,弱陽性相對(duì)減少。由此證明,P16蛋白是CINⅡ級(jí)、CINⅢ級(jí)較為良好的鑒別方式［5-7］,能有效地對(duì)宮頸上皮內(nèi)高度病變進(jìn)行分流。

P16蛋白表達(dá)強(qiáng)度隨著宮頸病變的級(jí)別增加,其表達(dá)強(qiáng)度不斷增強(qiáng),因此在不同級(jí)別宮頸病變中實(shí)施P16蛋白免疫組化檢測(cè),能使患者的診斷更加正確,具有重要的應(yīng)用價(jià)值,能為之后的治療方式提供有利依據(jù),值得在進(jìn)一步推廣及運(yùn)用。

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10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.24.008

2016-09-30］

511400 廣東省婦幼保健院婦科