李瑩瑩

·臨床醫(yī)學(xué)·

水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥的作用研究

李瑩瑩

目的探討水通道蛋白(AQP)在子宮內(nèi)膜異位癥(EMs)中的作用。方法80例婦科患者作為研究對象,60例為子宮內(nèi)膜異位癥患者中32例取在位內(nèi)膜作為Eu-Em組,28例取異位內(nèi)膜作為Ec-Em組,另20例正常子宮內(nèi)膜婦科取正常子宮內(nèi)膜作為Co-Em組。測定兩組AQP-1與AQP-8的mRNA及蛋白表達(dá)情況,并對比分析。結(jié)果Ec-Em組mRNA與蛋白表達(dá)的△CtAQP-1、△CtAQP-8值為(11.98±2.34)、(0.06±0)、(11.09±0.59)、(0.02±0),與其他兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Eu-Em組與Co-Em組mRNA與蛋白表達(dá)的△CtAQP-1、△CtAQP-8值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論子宮內(nèi)膜異位癥患者有較強(qiáng)的AQP-1表達(dá),異位內(nèi)膜相比在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜有明顯變化,可見AQP及其相關(guān)蛋白可能與EMs病理發(fā)生與發(fā)展有關(guān),需加強(qiáng)重視。

子宮內(nèi)膜異位癥；水通道蛋白；血管內(nèi)膜生長因子；作用

子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生屬于不斷的過程,對于如何預(yù)防疾病復(fù)發(fā)則成為國際性難題,而研究認(rèn)為從疾病發(fā)生初始阻斷其種植十分關(guān)鍵［1］?；诖?針對子宮內(nèi)膜種植期間子宮內(nèi)膜細(xì)胞的遷徙分子機(jī)制進(jìn)行研究,對于防治子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生有著重要的意義,而其中以疏水性蛋白質(zhì)最為重要,介導(dǎo)液體轉(zhuǎn)運(yùn)及維持機(jī)體滲透平衡,甚至還參與并促進(jìn)細(xì)胞的遷徙,以及調(diào)節(jié)糖原代謝、脂肪代謝等,功能廣泛［2］。細(xì)胞遷徙屬于子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生與發(fā)展重要環(huán)節(jié),揭示EMs病理發(fā)生與發(fā)展可能和AQP-1等有關(guān)。為了進(jìn)一步探討AQP-1等與子宮內(nèi)膜異位癥的作用關(guān)系,本院實(shí)施了相關(guān)對照研究,現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2014年1月～2015年12月收治的婦科患者80例作為研究對象,60例為子宮內(nèi)膜異位癥患者,其中32例取在位內(nèi)膜作為Eu-Em組,28例取異位內(nèi)膜作為Ec-Em組,另20例正常子宮內(nèi)膜婦科取正常子宮內(nèi)膜作為Co-Em組。入選患者有完整臨床資料,自愿接受本研究,同時(shí)排除心肝腎等功能異常、接受過其他激素或抗子宮內(nèi)膜異位癥藥物治療的患者。Eu-Em組年齡21～43歲,平均年齡(30.5±6.6)歲；已婚28例,未婚4例。Ec-Em組年齡20～45歲,平均年齡(30.2±6.9)歲；已婚25例,未婚3例。Co-Em組年齡20～47歲,平均年齡(30.8±6.7)歲；已婚19例,未婚1例。三組患者一般資料比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 AQP-1與AQP-8的mRNA測定 采取實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)測定AQP-1與AQP-8的mRNA表達(dá)情況,獲取子宮內(nèi)膜組織標(biāo)本后液氮速凍,放置在-80℃超低溫冰箱中保存,檢測時(shí)用Trizol提取標(biāo)本總RNA；對RNA純度進(jìn)行檢測,確保樣本RNA A260/280在1.8～2.0。每個(gè)樣本分別取總RNA 2.5 μg實(shí)施逆轉(zhuǎn)錄,取其產(chǎn)物2 μl的cDNA作為模板,采取熒光定量PCR儀實(shí)施PCR擴(kuò)增,并采取熔點(diǎn)曲線進(jìn)行PCR反應(yīng)特異性判斷,根據(jù)△Ct(熒光曲線所得)計(jì)算結(jié)果,計(jì)算方法為△CtAQP-1= CtAQP-1-CtGAPDH,△CtAQP-8=CtAQP-8-CtGAPDH。

1.2.2 AQP-1與AQP-8蛋白表達(dá)水平測定 通過蛋白質(zhì)印跡法(Western blotting)進(jìn)行測定。將子宮內(nèi)膜組織剪碎,置入裂解液冰實(shí)施快速勻漿,并放置在冰上40 min,以14000 r/min的離心速度在4℃下離線處理,15 min后取上清液；利用BCA法實(shí)施蛋白質(zhì)定量,分裝保存；每個(gè)樣品均取50 μg實(shí)施SDSPAGE電泳分離,電壓為80 V,時(shí)間為1.5 h,電泳之后以硝酸纖維素膜濕轉(zhuǎn)化,電流為175 mA,時(shí)間為45 min,之后以牛奶封閉處理1 h,AQP-1與AQP-8一抗均采取鼠單克隆抗體,二抗則為HRP標(biāo)記的山羊抗小鼠免疫球蛋白(Ig)G(H+L),之后以化學(xué)發(fā)光顯色試劑盒顯影與化學(xué)發(fā)光成像分析儀成像,最后用Quantity one軟件處理［3］。

1.3 觀察指標(biāo) 觀察記錄三組患者內(nèi)膜中AQP-1與AQP-8的mRNA水平與蛋白表達(dá)水平,并對比分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示,采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)。P<0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

Ec-Em組mRNA與蛋白表達(dá)的△CtAQP-1、△CtAQP-8值為 (11.98±2.34)、(0.06±0)、(11.09±0.59)、(0.02±0), 與其他兩組比較,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；Eu-Em組與Co-Em組mRNA與蛋白表達(dá)的△CtAQP-1、△CtAQP-8值比較,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表1。

表1 三組AQP-1、AQP-8的mRNA與蛋白表達(dá)水平比較(±s)

表1 三組AQP-1、AQP-8的mRNA與蛋白表達(dá)水平比較(±s)

注：與其余兩組比較,aP<0.05

組別 例數(shù) △Ct AQP-1 △CtAQP-8 mRNA 蛋白表達(dá) mRNA 蛋白表達(dá)Co-Em組 20 15.67±0.94 0.13±0.04 8.79±0.52 0.12±0.04 Ec-Em組 28 11.98±2.34a 0.06±0a 11.09±0.59a 0.02±0aEu-Em組 32 14.56±1.76 0.09±0.02 8.67±0.97 0.68±0.04

3 討論

子宮內(nèi)膜異位癥屬于常見婦科疾病,盡管其發(fā)病病因與機(jī)制目前無確切統(tǒng)一定論,但普遍認(rèn)為與水通道蛋白家族(AQPs)有關(guān)［4］。AQPs可介導(dǎo)液體轉(zhuǎn)運(yùn),維持機(jī)體的滲透平衡,同時(shí)還能參與細(xì)胞的遷徙以及調(diào)節(jié)脂肪與糖代謝等,有著十分廣泛的功能。近幾年,一些研究顯示AQPS在女性生殖系統(tǒng)疾病發(fā)生及發(fā)展中均發(fā)揮了重要的作用,而細(xì)胞遷徙是子宮內(nèi)膜異位癥主要環(huán)節(jié),可見子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生與發(fā)展和AQPs密切相關(guān)［5］。此外,血管內(nèi)皮生長因子是血管形成的主要因子,而且在腫瘤血管生成中有著重要作用［6］?；诖?作者參閱相關(guān)文獻(xiàn)及結(jié)合自身經(jīng)驗(yàn),認(rèn)為AQPS及其mRNA等對于子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制有著重要的作用,需加強(qiáng)研究與探討。

本次研究主要針對AQPS成員之一AQP-1的mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)進(jìn)行了研究,結(jié)果顯示異位癥患者異位內(nèi)膜AQP-1的mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)水平要顯著高于正常子宮內(nèi)膜及在位內(nèi)膜(P<0.05)。從研究結(jié)果中可以看出,AQP-1的mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)在子宮內(nèi)膜異位癥患者中的表達(dá)呈現(xiàn)一定的正相關(guān),這結(jié)果在一定程度上為“在位內(nèi)膜決定論”提供了新的依據(jù),同時(shí)證實(shí)異位內(nèi)膜組織中前述二者的表達(dá)有一定相關(guān)性,顯示二者在子宮內(nèi)膜異位癥中可能有協(xié)同關(guān)系,共同促進(jìn)其發(fā)生與發(fā)展,同時(shí)本研究顯示異位內(nèi)膜中AQP-8的mRNA及其蛋白質(zhì)表達(dá)低于在位內(nèi)膜及正常內(nèi)膜,與相關(guān)文獻(xiàn)結(jié)果類似［7］。

綜上所述,子宮內(nèi)膜異位癥患者有較強(qiáng)的AQP-1表達(dá),相比在位內(nèi)膜與正常內(nèi)膜婦女有明顯變化,可見AQP及其相關(guān)蛋白可能與EMs病理發(fā)生與發(fā)展有關(guān),需加強(qiáng)重視。

［1］韋成厚,牛剛,沈宏偉,等.子宮內(nèi)膜異位癥異位和在位內(nèi)膜中水通道蛋白1的表達(dá)及意義.中國計(jì)劃生育學(xué)雜志,2012,20(3):156-159.

［2］廖百花,張秋實(shí),趙愛萍,等.水通道蛋白1與子宮內(nèi)膜異位癥新生血管形成的關(guān)系.廣東醫(yī)學(xué),2013,34(16):2450-2453.

［3］宋誌,龐淑潔.水通道蛋白1在子宮內(nèi)膜異位癥癌變中的表達(dá)及意義.中國現(xiàn)代醫(yī)學(xué)雜志,2011,21(7):811-813,817.

［4］韋成厚,牛剛,沈宏偉,等.水通道蛋白1在子宮內(nèi)膜異位癥患者血清和腹腔液中的表達(dá)及意義.實(shí)用婦產(chǎn)科雜志,2012,28(4):310-312.

［5］韋成厚,周蓓,牛剛,等.水通道蛋白1在子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)病機(jī)制中的作用.廣東醫(yī)學(xué),2011,32(10):1350-1352.

［6］郭曉燕,吳瑞瑾,林俊,等.子宮內(nèi)膜異位癥在位和異位內(nèi)膜水通道蛋白的表達(dá).吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版),2011,37(6):1015-1018.

［7］郭曉燕.水通道蛋白在子宮內(nèi)膜異位癥患者在異位內(nèi)膜組織的表達(dá).浙江大學(xué),2011.

10.14164/j.cnki.cn11-5581/r.2016.24.007

2016-11-10］

廣東省佛山市衛(wèi)生局科研項(xiàng)目(項(xiàng)目編號：2014189)

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