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        梨貯藏期黑斑病菌的分離與培養(yǎng)條件研究

        2016-03-08 11:03:07梁魁景高小寬侯曉杰
        河北果樹 2016年3期

        梁魁景,高小寬,侯曉杰

        (衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000)

        梨貯藏期黑斑病菌的分離與培養(yǎng)條件研究

        梁魁景,高小寬,侯曉杰

        (衡水學(xué)院生命科學(xué)系 河北衡水 053000)

        供試各菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng),平均日生長速率、產(chǎn)孢量、菌落顏色及菌落厚度差異顯著。培養(yǎng)6 h時,該菌株的萌發(fā)率能達(dá)到最高峰;適宜菌絲生長的最適溫度為28℃,最適pH值為8。

        梨;黑斑病菌;分離;培養(yǎng)

        1 材料與方法

        1.1 供試材料 梨果實(shí)采自河北省衡水市桃城區(qū)舊城村。培養(yǎng)基為PDA培養(yǎng)基。

        1.2 病原菌的分離 采集梨黑斑病果實(shí),按常規(guī)方法進(jìn)行組織分離、單孢純化、培養(yǎng)、保存。根據(jù)柯赫氏法則將分離獲得的菌株接種到梨果實(shí)上,觀察能否產(chǎn)生典型的黑斑病病斑。

        1.3 病原菌生長特性的觀察 將分離獲得的病原菌分別移植于PDA培養(yǎng)基上,28℃保濕培養(yǎng)2周后,用打孔器(直徑6 mm)在菌落邊緣打孔,再將菌絲塊放置于新鮮的培養(yǎng)基上。28℃恒溫培養(yǎng)箱光照條件下培養(yǎng)。每天同一時間測量菌落直徑并觀察、記載菌落顏色及厚度。培養(yǎng)2周后測量產(chǎn)孢量。每處理重復(fù)3次。

        1.4 不同時期孢子萌發(fā)率的觀察 供試病原菌培養(yǎng)2周后,洗出菌株的孢子液,置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),分別于 2、4、6、8、10、12 h后觀察并記錄各菌株的孢子發(fā)芽率。

        1.5 pH值對孢子萌發(fā)率影響的觀察 取250 mL的錐形瓶,裝入200 mL蒸餾水,用1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的H2SO4調(diào)pH值分別至 4、5、6、7、8、9、10、11高壓滅菌20 min。然后分別將不同菌株的孢子懸浮液2 mL加入不同pH值的錐形瓶中,搖勻后分別置于28℃恒溫培養(yǎng)箱培養(yǎng),6 h后觀察分生孢子發(fā)芽率。每處理重復(fù)3次。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 病原菌的鑒定 把分離獲得的病原菌接種到健康梨果實(shí)上。通過對產(chǎn)生的病斑進(jìn)行再次分離,挑取單孢純化,獲得病原菌菌株。在顯微鏡下分別觀察供試病原菌的形態(tài)特征。結(jié)果表明:供試病原菌菌株的分生孢子梗單生或數(shù)根束生,褐色或暗褐色。分生孢子棒狀或倒棒狀,褐色或黑褐色,有縱隔1~2個、橫隔2~4個,橫隔處有縊縮現(xiàn)象。根據(jù)供試病原菌的形態(tài)特征和培養(yǎng)性狀,鑒定該病原菌為半知菌亞門絲孢綱絲孢目鏈格孢屬真菌。

        2.2 菌株的生物學(xué)特性 觀察結(jié)果表明:供試菌株在PDA培養(yǎng)基上培養(yǎng)后,其日平均生長速率、菌落顏色、產(chǎn)孢量及菌落厚度均有顯著差異。菌株菌落顏色較淺,呈灰色,菌落薄,氣生菌絲密。

        2.3 培養(yǎng)時間對孢子發(fā)芽率的影響 結(jié)果表明:在不同培養(yǎng)時間菌株孢子的萌發(fā)率有顯著不同。培養(yǎng)6 h時,該菌株的發(fā)芽率能達(dá)到最高峰,其中萌發(fā)率最高達(dá)84.5%;8 h和10 h計數(shù)時,孢子萌發(fā)率基本不變。

        2.4 pH值對孢子發(fā)芽率的影響 觀察結(jié)果表明:病原菌菌株在pH為8時的孢子萌發(fā)率最高(為85%),當(dāng)pH大于9以后孢子萌發(fā)率顯著下降;pH大于10后病原菌孢子萌發(fā)均受抑制,pH為11時病原菌孢子完全不萌發(fā)。

        3 結(jié)論與討論

        本試驗(yàn)通過對梨黑斑病病原菌的生物學(xué)特性觀察,可知供試3個菌株孢子在顯微鏡下形態(tài)差異不明顯;病原菌的日平均生長速率、菌落顏色、孢子萌芽率及產(chǎn)孢量均不相同,表明梨黑斑病病原菌存在多樣性。

        在本試驗(yàn)中觀察到,菌株孢子的發(fā)芽率在不同培養(yǎng)時間內(nèi)顯著不同。在不同pH的情況中,pH大于10病原菌孢子萌發(fā)均受抑制,pH為11時病原菌孢子完全不萌發(fā)。菌株在pH為8左右時的孢子萌發(fā)率最高。這些試驗(yàn)結(jié)果可用于對梨黑斑病病害防治,如應(yīng)用硫酸銨、氯化銨等作為增效劑來提高化學(xué)藥劑和生物農(nóng)藥對梨黑斑病的防治效果。

        [1] 張?zhí)煊睿袊婢荆旱谑礞湼矜邔賉M].北京:科學(xué)出版社,2003:32~42.

        [2] JanisiewiczWJ,KorstenL.Biologicalcontrol of postharvest diseases of fruits.Annual Reviews of Phytopathology,2002,40:411~441.

        [3] 胡紅菊,王友平,甘宗義,等.梨種質(zhì)資源對黑斑病的抗行評價[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2006,37(4):394~396.

        [4] 何漢祚,桂卿,喬志宏,等.梨黑斑病的發(fā)生規(guī)律與防治技術(shù)[J].山西果樹,1995(4):28~29.

        S436.612.1+4

        A

        1006-9402(2016)03-0004-01

        2016-03-26

        河北省科技計劃項(xiàng)目(項(xiàng)目編號:15226505)

        梁魁景,男,碩士,講師,現(xiàn)主要從事園林植物病原微生物方面的研究工作。E-mail:zwbh201011@163.com。

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