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        牛病毒性腹瀉-粘膜病的流行狀況及防控研究進(jìn)展

        2016-03-07 08:42:10趙靜虎王華欣朱戰(zhàn)波
        關(guān)鍵詞:流行病學(xué)病毒性疫苗

        趙靜虎,王華欣,朱戰(zhàn)波

        (黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,大慶 163319)

        牛病毒性腹瀉-粘膜病的流行狀況及防控研究進(jìn)展

        趙靜虎,王華欣,朱戰(zhàn)波

        (黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院,大慶 163319)

        牛病毒性腹瀉病毒主要侵害牛,尤其是犢牛,引起以腹瀉(急性感染癥狀)和黏膜?。猿掷m(xù)性感染癥狀)為臨床特征的疾病,在全球廣泛分布,給養(yǎng)牛業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。除此之外,還可以感染豬和羊等動(dòng)物。近年來(lái),隨著規(guī)?;B(yǎng)殖的發(fā)展,牛病毒性腹瀉-粘膜病對(duì)養(yǎng)殖業(yè)的危害日益顯現(xiàn),該病已經(jīng)成為國(guó)內(nèi)外研究的熱點(diǎn)。主要對(duì)牛病毒性腹瀉-粘膜病的病原特性、分類、診斷方法、國(guó)內(nèi)外流行情況和防控現(xiàn)狀等研究進(jìn)展進(jìn)行了綜述。

        牛病毒性腹瀉—粘膜病;流行;防治

        1 病原概述

        牛病毒性腹瀉病毒(BVDV)是一種世界范圍廣泛分布的重要病原體。易感動(dòng)物主要是牛和豬,對(duì)綿羊、鹿、駱駝及其他野生動(dòng)物[1]也具有一定的感染性。對(duì)養(yǎng)牛業(yè)而言,其主要臨床癥狀包括牛的病毒性腹瀉、急性和慢性黏膜病、持續(xù)性感染、免疫抑制和繁殖障礙等,其致病機(jī)理目前尚不清楚[2]。

        BVDV基因組為單股正鏈RNA,全長(zhǎng)大約12.5 kb,該基因組編碼生成至少11種成熟的蛋白質(zhì)[3],其中Capsid、E0、E1、E2、P7為病毒的結(jié)構(gòu)蛋白,其余6種為非結(jié)構(gòu)蛋白[4,5]。BVDV感染細(xì)胞的類型、宿主趨向性與E2蛋白相關(guān)[6],但E2蛋白變異率比較高,導(dǎo)致BVDV能夠逃脫宿主的免疫[7]。

        BVDV從生物型上可分為致細(xì)胞病變型和非致細(xì)胞病變型。致細(xì)胞病變型BVDV的產(chǎn)生是因?yàn)樵谄銷S2/3蛋白編碼序列發(fā)生了某些基因突變,包括基因重復(fù),細(xì)胞mRNA序列插入和點(diǎn)突變,這使NS2/3蛋白二聚體裂解為NS2和NS3單獨(dú)的兩個(gè)蛋白,這種改變導(dǎo)致BVDV變的能夠殺死被感染的細(xì)胞。致細(xì)胞病變型BVDV通常是從持續(xù)感染的動(dòng)物身上分離得到,這些動(dòng)物的病情往往都已經(jīng)發(fā)展到嚴(yán)重的粘膜病了。有研究顯示,存在一些致細(xì)胞病變型的BVDV分離株,這些分離株在Npro基因、衣殼蛋白基因及NS4b蛋白基因都存在基因突變。當(dāng)致細(xì)胞病變BVDV突變后不再致病,按照其生物學(xué)特性改稱其為非致細(xì)胞病變型BVDV。另外,根據(jù)BVDV基因組5′-NTR區(qū)差異可將其分為兩種基因型,即BVDV-1和BVDV-2。由于單鏈基因組的性質(zhì),BVDV具有較高的突變率,在一些情況下可導(dǎo)致新的病毒基因型的出現(xiàn)。迄今已經(jīng)識(shí)別出至少17種不同亞型的BVDV-1(BVDV-1a至BVDV-1q),BVDV-2型又分為BVDV-2a、BVDV-2b、BVDV-2c和BVDV-2d 4個(gè)亞型[8]。BVDV-2型中BVDV-2a在全世界廣泛分布,基因型2b,2c和2d僅限于南美洲。最近在南美洲、北美洲和澳大利亞檢測(cè)出了疑似BVDV的HoBi樣病毒或稱其為BVDV-3型病毒。

        2 BVDV的流行病學(xué)特征

        2.1 傳染源

        病畜和帶毒動(dòng)物是牛病毒性腹瀉(BVD)的主要傳染源。病畜的分泌物、尿液、血液、精液和流產(chǎn)胎兒等均可引起牛場(chǎng)BVD的發(fā)生,現(xiàn)在認(rèn)為,持續(xù)感染牛(PI)是引起B(yǎng)VD發(fā)病的主要來(lái)源。

        2.2 傳播途徑

        BVDV可通過(guò)水平傳播和垂直傳播感染宿主。BVDV可通過(guò)呼吸道和消化道傳播,也可通過(guò)胎盤、交配和人工授精直接傳染易感動(dòng)物。BVDV能通過(guò)胎膜屏障進(jìn)入胎兒體內(nèi),產(chǎn)出的胎兒為PI牛,終身帶毒、排毒。持續(xù)感染會(huì)導(dǎo)致流產(chǎn)、胎兒死亡、卵泡功能不全等繁殖性疾病,并且會(huì)導(dǎo)致奶牛產(chǎn)量下降,免疫抑制,進(jìn)而導(dǎo)致疾病的協(xié)同并發(fā)。檢測(cè)和清除PI牛是防治本病的重點(diǎn)與難點(diǎn)。

        2.3 易感動(dòng)物

        BVDV可感染黃牛、豬、水牛、牦牛、羊駝、山羊、綿羊、鹿和野生反芻動(dòng)物。各種年齡的牛對(duì)該病毒均易感,尤其是6~18月齡犢牛,而且肉牛比奶牛更容易感染此病。

        2.2 心肌酶譜指標(biāo)與心率減速力的相關(guān)性分析 心肌酶譜指標(biāo)與心率減速力水平呈負(fù)相關(guān)(P<0.05),見(jiàn)表2。

        2.4 流行特點(diǎn)

        BVD多呈地方性流行和季節(jié)性流行,在封閉集約化養(yǎng)殖場(chǎng)多以暴發(fā)式發(fā)病。此病在新疫區(qū)急性病例多,老疫區(qū)很少發(fā)生,多呈隱性感染,發(fā)病率和病死率很低。BVD在一年四季均可發(fā)生,但在冬末和春季多發(fā)。

        3 BVDV的流行狀況

        自1946年于北美洲首次發(fā)現(xiàn)BVD以來(lái),目前已呈全球性分布,尤其在美國(guó)和歐洲等畜牧業(yè)發(fā)達(dá)的國(guó)家。近年來(lái),通過(guò)對(duì)歐美等國(guó)家中分離得到的BVDV毒株作系統(tǒng)進(jìn)化樹分析[7],結(jié)果顯示:加拿大和美國(guó)多流行的是BVDV-1a和BVDV-1b基因型,在印度主要流行BVDV-1 b基因型,比利時(shí)主要流行BVDV-1 b或BVDV-2基因型;澳大利亞流行BVDV-1c基因型;而北美BVDV-2基因型比較多見(jiàn)。血清流行病學(xué)調(diào)查表明,美國(guó)[9]牛群血清陽(yáng)性率為50%,澳大利亞為89%,加拿大為84%,南美洲國(guó)家為85%。

        1980年,BVDV首次在中國(guó)由李佑民檢測(cè)和鑒定出來(lái),隨后大量學(xué)者對(duì)BVDV進(jìn)行了流行病學(xué)調(diào)查,調(diào)查結(jié)果表明新疆[10]、內(nèi)蒙古、甘肅、寧夏、青海、河南、江蘇、廣西、河北、福建、黑龍江[11]、吉林[12]、遼寧、浙江、湖南、江西[13]、上海[14]和重慶[15]等20多個(gè)省市均有本病的發(fā)生。邢思毅等[24]對(duì)2012到2014三年間黑龍江部分地區(qū)奶牛BVDV抗體血清流行病學(xué)調(diào)查表明,血清陽(yáng)性率為64.10%,2014的陽(yáng)性率為70.33%,比2012的59.63%和2013年的61.7%要高很多,說(shuō)明在2012到2014三年間,BVDV血清陽(yáng)性率有逐年上升的趨勢(shì)。比魏偉等報(bào)道的黑龍江地區(qū)2006到2008年間平均BVDV血清陽(yáng)性率58.50%要高。

        Zhong等[16]對(duì)我國(guó)西部牛場(chǎng)牛群感染情況進(jìn)行了調(diào)查,平均感染率為43.39%,病毒基因型主要為1 b型。李慶超等[17]進(jìn)行流行病學(xué)調(diào)查發(fā)現(xiàn),BVDV-1型是我國(guó)主要的流行毒株。何延華等研究報(bào)道稱從我國(guó)分離并測(cè)序的BVDV全基因組序列與其他毒株有較大的差異性[10]。王新平等[18]、駱延波等[19]將分離得到的毒株歸為BVDV-1a和1b亞型。任敏等[20-21]報(bào)道了從新疆、青海和山東牛病料中分離到BVDV-2型病毒。李娜等[22-23]對(duì)新疆地區(qū)的奶牛BVDV感染情況進(jìn)行了調(diào)查,經(jīng)核酸序列同源性比較和系統(tǒng)發(fā)育分析,表明該地區(qū)的主要流行株為BVDV-1b亞型和BVDV-1c亞型。

        4 BVDV檢測(cè)方法的研究進(jìn)展

        4.1 病毒分離鑒定

        4.2 電鏡觀察

        電鏡技術(shù)很少用于BVD的診斷,但在病原學(xué)研究方面,電鏡觀察是其研究的常用技術(shù)之一。將新鮮病料或細(xì)胞培養(yǎng)物直接進(jìn)行負(fù)染或者做成超薄切片,通過(guò)電鏡觀察病毒粒子形態(tài)特征進(jìn)行診斷。趙月蘭等[25]將BVDV分離株用磷鎢酸負(fù)染,在電鏡下觀察病毒形態(tài)結(jié)構(gòu)顯示:病毒粒子直徑為40~60 mn,形態(tài)略呈圓形,與BVDV顆?;疽恢?。

        4.3 血清學(xué)診斷方法

        血清學(xué)診斷方法中最常用的是酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),包括檢測(cè)抗體的間接ELISA和檢測(cè)抗原的抗原捕獲ELISA等。此外,病毒中和試驗(yàn)(VNT)和免疫熒光技術(shù)(IFA)也可用于檢測(cè)BVDV。在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中,病毒中和試驗(yàn)和抗原捕獲ELISA是最常用的檢測(cè)技術(shù),該方法符合OIE推薦的病原檢測(cè)方法要求。

        4.4 分子生物學(xué)技術(shù)

        分子生物學(xué)技術(shù)在實(shí)驗(yàn)室應(yīng)用最多的是耳組織或血液樣品的RT-PCR和實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè),實(shí)時(shí)熒光定量PCR具有特異性高、敏感性強(qiáng)、快速和重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn),同時(shí)實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR的靈敏度比RT-PCR的高100倍。根據(jù)BVDV國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株基因序列,在其最保守的5'端非編碼區(qū)序列設(shè)計(jì)合成一對(duì)特異性引物,經(jīng)PCR擴(kuò)增鑒定,擴(kuò)增后產(chǎn)物還可用于后續(xù)基因的測(cè)序和分析鑒定。此外,BVDV單克隆抗體技術(shù)也可用于BVDV的診斷。

        5 BVDV的防控現(xiàn)狀及建議

        5.1 疫苗使用情況

        BVDV疫苗包括常規(guī)疫苗和新型疫苗,而常規(guī)疫苗又分為弱毒苗、滅活苗和聯(lián)合疫苗,新型疫苗又分為亞單位疫苗、DNA疫苗[26]和利用卡介苗作為載體進(jìn)行研究的新型疫苗。

        弱毒疫苗存在一個(gè)安全性的問(wèn)題,弱毒苗比死苗或滅活苗的危險(xiǎn)性更大,因?yàn)槿醵久缧枰紤]其恢復(fù)致病力的可能性。而目前市場(chǎng)上的滅活苗主要有諾華(Novartis)公司的Bovidec○RBVD Virus vaccine、輝瑞公司(Pfizer)的Pestigard○RBVD vaccine以及金宇保靈、揚(yáng)州優(yōu)邦聯(lián)合生產(chǎn)的的牛病毒性腹瀉-粘膜病、傳染性鼻氣管炎二聯(lián)滅活疫苗。弱毒苗主要是勃林格殷格翰公司(Boehringer-Ingelheim)的BOVELA○R。

        傳統(tǒng)疫苗存在種種不足之處,迫使大量學(xué)者將精力投入到新型疫苗的研制當(dāng)中。S.Harpin等[26]成功構(gòu)建了含有BVDV E2基因的重組質(zhì)粒,將該質(zhì)粒接種小鼠后,可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生特異性抗體,抗體可存在6個(gè)月之久。S.Harpin等將構(gòu)建的DNA疫苗以裸體的DNA疫苗(N-DNA)和脂質(zhì)體包裹的疫苗(LDNA)兩種形式免疫牛,結(jié)果表明:兩者都可產(chǎn)生中和抗體。

        而重組卡介苗的研究表明,卡介苗作為細(xì)菌活載體,比利用重組病毒活載體更為方便,且適用范圍更廣,生產(chǎn)過(guò)程更簡(jiǎn)單,穩(wěn)定性更強(qiáng)。因此,利用卡介苗作為載體進(jìn)行新型疫苗的研究會(huì)成為一個(gè)熱點(diǎn)。

        5.2 防控建議

        首先要做好環(huán)境衛(wèi)生管理,其次做好免疫預(yù)防工作,最后對(duì)疑似感染牛進(jìn)行隔離和藥物治療,如果發(fā)現(xiàn)持續(xù)性感染的牛應(yīng)立即淘汰。

        針對(duì)我國(guó)BVD的流行情況,建議首先做好分子流行病學(xué)的調(diào)查,確定BVDV的基因類型,方便后續(xù)藥物和疫苗的有效使用。其次,必須對(duì)進(jìn)出口動(dòng)物及生物制品進(jìn)行嚴(yán)格的檢疫,并加強(qiáng)我國(guó)獸用生物制品BVDV污染監(jiān)測(cè)以及畜群BVDV凈化工作。歐美等國(guó)家已經(jīng)啟動(dòng)了國(guó)家和區(qū)域性的BVDV防控和根除計(jì)劃并取得了顯著效果。最后,建立和健全BVDV檢測(cè)體系,尤其要檢測(cè)并清除PI牛。加強(qiáng)預(yù)防工作,對(duì)畜群進(jìn)行特異性的的疫苗接種,并改進(jìn)飼養(yǎng)管理及獸醫(yī)防疫制度。

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        Advances in Epidemic Situation and Prevention of Bovine Viral Diarrhea—Mucosal Disease

        Zhao Jinghu,Wang Huaxin,Zhu Zhanbo
        (College of Animal Science and Technology,Heilongjiang Bayi Agriculture University,Daqing 163319)

        Bovine viral diarrhea virus was a major disease in cattle,especially in calves,it caused clinical symptoms characterized by diarrhea(acute infection symptoms)and mucosal disease(chronic persistent infection symptoms).It was widely distributed in the world,which caused large economic losses to cattle breeding industry.In addition,it infected pigs,sheep and other animals.In recent years,with the development of large-scale farming,bovine viral diarrhea-mucosal disease hazards to the aquaculture industry became more and more urgent,the research of the disease at home and abroad.In this paper,the pathogenic characteristics of bovine viral diarrhea-mucosal disease,classification,diagnostic methods,domestic and international epidemic situation and prevention and control of the status quo were reviewed.

        Bovine viral diarrhea-mucosal disease;popular;prevention and treatment

        S855.3

        A

        1002-2090(2016)06-0122-04

        10.3969/j.issn.1002-2090.2016.06.025

        2015-10-20

        “十二五”科技部科技支撐計(jì)劃課題(2012BAD12B05-2);黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)研究生創(chuàng)新科研項(xiàng)目(YJSCX2015-Y20);省科技廳課題(GC13B402)。

        趙靜虎(1992-),男,黑龍江八一農(nóng)墾大學(xué)動(dòng)物科技學(xué)院2014級(jí)碩士研究生。

        朱戰(zhàn)波,教授,博士研究生導(dǎo)師,E-mail:zhanbozhu@163.com。

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