李俊燕　陶　楓　吳新星　譚英姿　陸　灝

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院內(nèi)分泌科　糖尿病研究所　中醫(yī)臨床重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上?！?01203)

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錳超氧化物歧化酶基因多態(tài)性與2型糖尿病的相關(guān)性

李俊燕陶楓吳新星1譚英姿陸灝

(上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院內(nèi)分泌科糖尿病研究所中醫(yī)臨床重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，上海201203)

〔摘要〕目的探討上海漢族人群中錳超氧化物歧化酶(MnSOD)基因多態(tài)性位點(diǎn)rs4880(V16A)與2型糖尿病的關(guān)系。方法已經(jīng)確診的1 234例2型糖尿病患者作為病例組，選取1 272例正常健康個體作為對照組。收集研究對象血液標(biāo)本5 ml，提取全基因組DNA。應(yīng)用Taqman基因分型技術(shù)進(jìn)行多態(tài)性檢測。結(jié)果MnSOD基因rs4880位點(diǎn)基因型及等位基因頻率分布在病例組和對照組中比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異〔基因型：P=0.009 1；等位基因：P=0.006 8，OR=1.26(1.07~1.49)〕。結(jié)論MnSOD基因rs4880單核苷酸多態(tài)性可能與上海漢族人群2型糖尿病的發(fā)生具有相關(guān)性。

〔關(guān)鍵詞〕2型糖尿病；基因多態(tài)性；錳超氧化物歧化酶；漢族

1上海電子信息職業(yè)技術(shù)學(xué)院

第一作者：李俊燕(1981-)，女，助理研究員，主要從事內(nèi)分泌疾病研究。

研究表明，氧化應(yīng)激是2型糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)生和發(fā)展的重要因素〔1〕。受損的抗氧化防御系統(tǒng)會增加體內(nèi)氧化應(yīng)激水平，導(dǎo)致2型糖尿病的發(fā)生。錳超氧化物歧化酶(MnSOD)作為體內(nèi)線粒體重要的抗氧化酶，可清除O2-，抵御氧化應(yīng)激。目前研究發(fā)現(xiàn)，MnSOD基因rs4880位點(diǎn)突變可引起信號肽空間構(gòu)象發(fā)生改變，從而使MnSOD轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體的速率降低，影響MnSOD進(jìn)入線粒體發(fā)揮抗氧化作用，繼而增加了氧化應(yīng)激，導(dǎo)致糖尿病及其并發(fā)生的發(fā)生〔2〕。本研究擬探討MnSOD基因rs4880是否與中國上海地區(qū)漢族人群2型糖尿病相關(guān)。

1資料與方法

1.1一般資料選擇2011年9月至2014 年2月在上海中醫(yī)藥大學(xué)附屬曙光醫(yī)院入院就診的上海漢族2 型糖尿病患者作為病例組。2 型糖尿病的診斷根據(jù)1999年WHO指南。納入標(biāo)準(zhǔn)：空腹血漿葡萄糖(FPG)≥7.0 mmol/L 或口服葡萄糖耐量試驗(yàn)(OGTT)餐后2 h 血糖≥11.1 mmol/L 或既往有確切糖尿病病史。排除抗谷氨酰脫氫酶(GAD)和抗胰島細(xì)胞抗體(IAA)或者ICA陽性的糖尿病患者。選擇同期在該院體檢中心的健康體檢者作為對照組，F(xiàn)PG<5.6 mmol/L 和OGTT餐后2 h血糖<7.8 mmol/L，或者糖化血紅蛋白(HbA1c)<5.6%，未服用任何影響糖脂代謝的藥物，無糖尿病家族史。研究方案經(jīng)該院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)，研究對象均自愿簽署了書面知情同意書，了解實(shí)驗(yàn)內(nèi)容。

1.2方法

1.2.1一般資料收集使用統(tǒng)一設(shè)計(jì)的流行病學(xué)調(diào)查問卷，由經(jīng)過統(tǒng)一培訓(xùn)并合格的醫(yī)生面對面對研究對象進(jìn)行年齡、身高、體重、腰圍、臀圍、血壓等體格檢查并計(jì)算體重指數(shù)(BMI)，同時(shí)調(diào)查人口社會學(xué)特征、生活習(xí)慣、個人及家族疾病史等。

1.2.2血生化指標(biāo)的測定研究對象清晨空腹抽取靜脈血，檢測FPG，HbA1c、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)等生化指標(biāo)。

1.2.3基因組DNA的提取所有研究對象空腹抽取靜脈血1 ml，充分抗凝處理，采用全血基因組AxyPrep DNA小量抽提試劑盒(杭州愛思進(jìn)生物技術(shù)有限公司)提取DNA，置于-80℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.4MnSOD基因rs4880位點(diǎn)分型檢測rs4880 Taqman探針由Life technology公司設(shè)計(jì)提供，采用Taqman基因分型技術(shù)，Applied Biosystems公司的9700PCR儀進(jìn)行反應(yīng)檢測。

2結(jié)果

2.1兩組一般臨床資料和代謝指標(biāo)比較兩組間年齡、性別以及低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。校正年齡、性別后結(jié)果顯示，病例組的BMI、收縮壓(SBP)、舒張壓(DBP)、FPG、HbA1c、TC明顯高于對照組，尿酸(Urea)和高密度脂蛋白膽固醇(HDL-C)明顯低于對照組(P<0.001)。見表1。

2.2Hardy-Weinberg平衡檢驗(yàn)MnSOD基因rs4880多態(tài)性位點(diǎn)在對照組基因型頻率分布符合Hardy-Weinberg 平衡。

2.3MnSOD基因rs4880多態(tài)性位點(diǎn)等位基因頻率分布與2 型糖尿病的關(guān)系MnSOD基因rs4880多態(tài)性位點(diǎn)等位基因在病例組與對照組中分布的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。見表2。

2.4MnSOD基因rs4880多態(tài)性位點(diǎn)基因型頻率分布與2 型糖尿病的關(guān)系MnSOD基因rs4880多態(tài)性位點(diǎn)基因型在病例組與對照組中分布的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.009)。見表3。

表1　兩組一般臨床資料和代謝指標(biāo)比較±s)

表2　MnSOD基因rs4880多態(tài)性位點(diǎn)在兩組的分布情況

表3　MnSOD基因rs4880 多態(tài)性位點(diǎn)

3討論

氧化應(yīng)激是2型糖尿病及其并發(fā)癥發(fā)生的主要因素。研究發(fā)現(xiàn)，許多抗氧化酶包括內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)、NADHA及MnSOD等與抗氧化以及抗氧化屏障有關(guān)〔4~6〕。

線粒體氧化損傷是2型糖尿病主要發(fā)病機(jī)制胰島β細(xì)胞功能受損的主要因素，MnSOD可以保護(hù)胰腺β細(xì)胞免受氧化壓力，提高β細(xì)胞的生存，增加胰島素分泌細(xì)胞〔7〕。MnSOD主要位于線粒體基質(zhì)，負(fù)責(zé)清除線粒體中約80%的氧化自由基〔8〕。據(jù)報(bào)道，2型糖尿病患者的MnSOD的活性水平明顯低于健康受試者〔9〕。人類MnSOD基因位于染色體6q25區(qū)，其中基因外顯子2的功能多態(tài)性位點(diǎn) rs4880(Ala16Val)與線粒體氧化應(yīng)激相關(guān)〔10〕。該多態(tài)位點(diǎn)的突變可引起MnSOD信號肽空間構(gòu)象發(fā)生改變，即C→T突變可導(dǎo)致信號肽位置上丙氨酸(Ala)→纈氨酸(Val)的改變，此時(shí)信號肽空間構(gòu)象由α螺旋→β折疊，這種α螺旋結(jié)構(gòu)具有兩親性，可有效地引導(dǎo)MnSOD由胞質(zhì)進(jìn)入線粒體，而β折疊則使得信號肽與線粒體內(nèi)膜上相關(guān)受體的正確識別受到影響，使MnSOD轉(zhuǎn)運(yùn)至線粒體的速率降低30%~40%，繼而影響MnSOD進(jìn)入線粒體發(fā)揮抗氧化作用，導(dǎo)致2型糖尿病以及冠狀動脈疾病風(fēng)險(xiǎn)〔9〕。對日裔美國人群研究發(fā)現(xiàn)，MnSOD rs4880多態(tài)性與2型糖尿病相關(guān)〔2〕。 楊瑩等〔11〕對昆明漢族人群研究發(fā)現(xiàn)，rs4880與2型糖尿病及糖尿病腎病顯著相關(guān)，與日本人群和俄羅斯人群相比其基因型和等位基因頻都存在顯著性差異。本研究也發(fā)現(xiàn)rs4880(Ala16Val)與中國上海漢族人群2型糖尿病顯著相關(guān)。這些結(jié)果表明，活性氧清除不足可能與2型糖尿病的易感性有關(guān)。本研究考察了MnSOD基因多態(tài)性與上海漢族人群易感性之間的相關(guān)性，但是MnSOD是否直接通過影響抗氧化水平而引發(fā)糖尿病，抑或MnSOD基因多態(tài)性通過與鄰近治病基因相互作用導(dǎo)致疾病，其具體作用機(jī)制尚未可知，有待深入研究。

4參考文獻(xiàn)

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〔2015-04-25修回〕

(編輯袁左鳴)

通訊作者：陸灝(1969-)，男，主任醫(yī)師，主要從事內(nèi)分泌疾病臨床和科研工作。

基金項(xiàng)目：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No.81403359)；上海市教育委員會科研創(chuàng)新項(xiàng)目(No.13YZ042)；上海市衛(wèi)生局資助項(xiàng)目(No.20124076)；上海高校青年教師培養(yǎng)資助計(jì)劃項(xiàng)目(No.ZZszy12015)；上海市中醫(yī)臨床重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室(No.14DZ2273200)；上海市中醫(yī)藥事業(yè)發(fā)展三年行動計(jì)劃項(xiàng)目(No.ZYSNXD-CC-YJXYY)

〔中圖分類號〕R587

〔文獻(xiàn)標(biāo)識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)04-0832-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.028