張春敭　楊　洋　劉東雷　朱登彥　趙　佳　吳　愷　吳　彬　張　巖　趙　松

(鄭州大學第一附屬醫(yī)院胸外科　河南省高等學校臨床醫(yī)學重點學科開放實驗室　鄭州大學腫瘤分子外科研究所 鄭州市胸部腫瘤重點實驗室，河南　鄭州　450052)

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Livin、Survivin蛋白在非小細胞肺癌中的表達及意義

張春敭楊洋劉東雷朱登彥趙佳吳愷吳彬張巖趙松

(鄭州大學第一附屬醫(yī)院胸外科河南省高等學校臨床醫(yī)學重點學科開放實驗室鄭州大學腫瘤分子外科研究所 鄭州市胸部腫瘤重點實驗室，河南鄭州450052)

〔摘要〕目的研究Livin、Survivin蛋白在非小細胞肺癌(NSCLC)中的表達及意義。方法采用免疫組化SP法檢測45例NSCLC病人的癌和癌旁組織標本中Livin及Survivin的表達，分析其與臨床參數(shù)的關(guān)系以及二者表達的相關(guān)性，并通過隨訪研究其與NSCLC患者5年生存率的關(guān)系。結(jié)果Livin和Survivin在NSCLC癌組織中的陽性表達率均顯著高于癌旁組織(P<0.05)，在NSCLC癌組織中的表達與患者性別、年齡、是否吸煙、癌組織類型、腫瘤的大小、分化程度和TNM分期均無關(guān)(P>0.05)，而與是否有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)(P<0.05)；Livin和Survivin的表達無相關(guān)性；Livin和Survivin表達陽性者5年生存率均明顯低于表達陰性者(P<0.05)。結(jié)論Livin和Survivin蛋白與NSCLC發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預后有關(guān)，對NSCLC臨床診斷和預后判斷具有一定的指導意義。

〔關(guān)鍵詞〕Livin；Survivin；非小細胞肺癌

第一作者：張春敭(1982-)，男，博士，主要從事胸部腫瘤的基礎(chǔ)與臨床診治研究。

肺癌中最常見的為非小細胞肺癌(NSCLC)，占肺癌總數(shù)的80%以上〔1〕。Livin和Survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAP)的新成員，已有大量研究證實，腫瘤細胞中二者有普遍過表達現(xiàn)象，已成為腫瘤預后和治療研究的新熱點〔2~4〕。本實驗旨在研究Livin和Survivin蛋白在NSCLC中的表達及其相關(guān)性，并分析其表達與5年生存率的關(guān)系。

1材料與方法

1.1一般資料收集鄭州大學第一附屬醫(yī)院2013年1~12月行手術(shù)切除的NSCLC患者的癌組織標本45例，以及相應(yīng)的距腫瘤邊緣5 cm以上的癌旁組織標本作為研究對象。全部患者術(shù)前均無放療、化療及其他抗腫瘤治療史。其中男28例，女17例，年齡36~75歲，平均(58.5±14.3)歲；吸煙者25例，非吸煙者20例；其中腺癌13例，鱗癌32例；高、中、低分化癌分別為14例、20例和11例；腫瘤直徑≥3 cm者34例，<3 cm者11例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者26例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者19例；TNM分期為Ⅰ~Ⅱ期者28例，Ⅲ~Ⅳ期者17例。

1.2檢測方法標本均以10%的甲醛固定，石蠟包埋，切3 μm厚片，免疫組化SP法染色。一抗為兔抗人Livin和Survivin 單克隆抗體，由北京博奧森公司提供；免疫組化試劑盒由上海國源生物技術(shù)有限公司提供，SP 通用型試劑盒由美國ZYMED公司提供。陽性對照為在同一條件下染色的Survivin和Livin 陽性切片，陰性對照為磷酸鹽緩沖液(PBS)代替一抗，試驗操作嚴格按說明書進行。

1.3結(jié)果判定以兩人雙盲法觀察。Survivin蛋白陽性表達為位于細胞質(zhì)的棕黃色顆粒，Livin蛋白陽性表達為位于細胞質(zhì)或細胞核中的棕黃色或棕褐色顆粒。每例切片隨機選取5個視野(400倍)，每個視野觀察并記錄100個腫瘤細胞中陽性細胞的染色強度和陽性細胞數(shù)。評分方法，(1)染色強度評分：0~3分相應(yīng)分別為無著色、淡黃色、棕黃色和棕褐色；(2)陽性細胞數(shù)評分：陽性細胞比例≤5%為0分，5%～25%為1分，25%～50%為2分，>50%為3分；染色強度得分乘以陽性細胞比得分為綜合評分結(jié)果，以綜合評分≤1分為陰性，綜合評分>1分為陽性。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS13.0軟件進行χ2檢驗。

2結(jié)果

2.1Livin和Survivin在癌組織和癌旁組織的表達Livin在NSCLC的癌組織和癌旁組織中的陽性表達率分別為68.9%(31例)和8.9%(4例)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)；Survivin在NSCLC的癌組織和癌旁組織中的陽性表達率分別為73.3%(33例)和6.7%(3例)，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

2.2Livin和Survivin的表達與臨床指標的關(guān)系在不同性別、年齡、是否吸煙、癌組織類型、腫瘤的大小、分化程度和TNM分期的患者中，Livin和Survivin在NSCLC癌組織中的表達差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05)；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者Livin和Survivin的陽性率均明顯高于無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者(P<0.05)，見表1。

2.3Livin與Survivin在NSCLC癌組織中表達的關(guān)系在Livin表達陽性的31例NSCLC癌組織中，Survivin陽性表達22例(71.0%)，在Livin表達陰性的14例NSCLC癌組織中，Survivin陽性表達11例(78.6%)，Livin與Survivin表達不具有相關(guān)性(χ2=0.29,P>0.05)。

2.4Livin和Survivin的表達與5年生存率的關(guān)系5年生存率在Livin和Survivin陽性組分別為25.8%(8/31)和30.3%(10/33)，陰性組分別為64.3%(9/14)和66.7%(8/12)，差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。

表1　Livin與Survivin的陽性表達與NSCLC臨床參數(shù)的關(guān)系〔n(%)〕

3討論

Livin和Survivin是作用較強的凋亡抑制因子〔5〕，過表達可引起細胞凋亡不足，與腫瘤發(fā)生和進展關(guān)系密切。覃國亮等〔6〕報道Survivin陽性表達率與NSCLC臨床分期和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。王棟等〔7〕研究也指出Survivin蛋白表達的陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和NSCLC腫瘤分期高度相關(guān)，而Livin蛋白表達陽性率則均與之無關(guān)。但張久榮等〔8〕報道Survivin蛋白表達的陽性率與NSCLC分化程度相關(guān)，而與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，Livin 蛋白表達的陽性率與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，而Survivin和Livin蛋白表達二者之間并無相關(guān)性，與韓寶林〔9〕的研究結(jié)果類似。

本研究結(jié)果提示Livin和Survivin可能在NSCLC的發(fā)生、發(fā)展中起重要作用，可能成為NSCLC診斷的新指標和潛在的治療靶點。但二者在NSCLC癌組織中的表達并不具有相關(guān)性，且二者可能參與了NSCLC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，對預后判斷具有一定的提示作用。另外本研究提示Livin和Survivin 的陽性表達在一定程度上提示NSCLC預后不良?？傊琇ivin和Survivin蛋白與NSCLC發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)移及預后有關(guān)，對NSCLC臨床診斷和預后判斷具有一定的指導意義，有望成為NSCLC治療的潛在靶點，為NSCLC的免疫治療提供新的思路。

4參考文獻

1徐燕，王孟昭.非小細胞肺癌免疫治療進展〔J〕.中國肺癌雜志，2014；17(1)：34.

2王棟，錢有輝.凋亡抑制蛋白 livin 的研究進展〔J〕.熱帶醫(yī)學雜志，2011；11(11)：1335-8.

3孟憲紅，莊麗維，付宜利.Livin 和 Survivin 在結(jié)腸癌及不同類型結(jié)腸腺瘤中的表達〔J〕.哈爾濱醫(yī)科大學學報，2011；45(1)：51-4.

4伍干元，李建軍，李龍平.Survivin 及 Livin 在中耳膽脂瘤組織中的表達及相關(guān)性研究〔J〕.中國實用醫(yī)藥，2011；6(1)：3-4.

5趙國徽，王家宏，賈志勇，等.Survivin 與結(jié)直腸癌關(guān)系的研究進展〔J〕.包頭醫(yī)學院學報，2011；27(6)：132-4.

6覃國亮，馬廣耀，冼磊，等.非小細胞肺癌中 Survivin 的表達及其臨床意義的研究〔J〕.微創(chuàng)醫(yī)學，2013；8(4)：400-2.

7王棟，錢有輝，王光鎖，等.Livin，Survivin 蛋白在非小細胞肺癌胞核中的表達及意義〔J〕.熱帶醫(yī)學雜志，2013；11(2)：10.

8張久榮，李田，陳石.Survivin 和 Livin 蛋白在非小細胞肺癌中的表達及臨床意義〔J〕.臨床肺科雜志，2012；17(1)：101-3.

9韓寶林.Bax，Livin 和 Survivin 在非小細胞肺癌組織中的表達〔J〕.天津醫(yī)藥，2012；40(5)：513-5.

〔2015-08-10修回〕

(編輯李相軍/滕欣航)

通訊作者：趙松(1963-)，男，主任醫(yī)師，博士生導師，主要從事胸部腫瘤的基礎(chǔ)與臨床診治研究。

基金項目：河南省高?？萍紕?chuàng)新團隊(13IRTSTHN011)

〔中圖分類號〕R655.4

〔文獻標識碼〕A

〔文章編號〕1005-9202(2016)04-0794-03；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.04.010