劉 敏 李麗娟（通訊作者） 肖 文 鄒云梅 耿成銳

（1.大理大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理671000；2.大理大學(xué)東喜瑪拉雅資源與環(huán)境研究所，云南大理671000；3.大理大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

大理地區(qū)不同血清學(xué)檢測(cè)試劑對(duì)雞血中HEV的檢測(cè)

劉 敏1，2李麗娟1（通訊作者） 肖 文2鄒云梅3耿成銳3

（1.大理大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院，云南大理671000；2.大理大學(xué)東喜瑪拉雅資源與環(huán)境研究所，云南大理671000；3.大理大學(xué)農(nóng)學(xué)與生物科學(xué)學(xué)院，云南大理671000）

目的 了解大理地區(qū)雞中戊型肝炎病毒（HEV）感染情況及比較兩家公司生產(chǎn)的HEV檢測(cè)試劑對(duì)雞血清HEV抗體的檢測(cè)效果。方法 分別采集大理古城和下關(guān)菜市場(chǎng)雞血92份和91份，應(yīng)用兩家公司生產(chǎn)的HEV抗體試劑盒檢測(cè)雞血清中HEV抗體。結(jié)果 183份雞血清中用試劑A1、A2、B1和B2檢測(cè)，分別檢出2份、2份、2份和3份陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率分別為1.09%、1.09%、1.09%和1.64%。兩家公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑和戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑對(duì)同一份雞血清檢測(cè)，沒(méi)有相同的陽(yáng)性結(jié)果，陰性結(jié)果符合率很高。結(jié)論 大理地區(qū)雞中存在HEV，同時(shí)兩家公司生產(chǎn)的HEV抗體檢測(cè)試劑可以作為研究雞群中HEV的流行病調(diào)查，但檢測(cè)靈敏度不高，需研制更靈敏的檢測(cè)試劑。

戊型肝炎病毒；雞；HEV-抗體檢測(cè)試劑；血清學(xué)檢測(cè)

戊型肝炎是由戊型肝炎病毒（Hepatitis E virus，HEV）引起的一種急性限性傳染性疾病，主要經(jīng)糞-口途徑傳播[1]，全球廣泛分布。研究顯示HEV是一種無(wú)囊膜的單股正鏈RNA病毒[2]，一般呈不規(guī)則球形，基因組全長(zhǎng)約7.3kb[3]，包含三個(gè)開放讀碼框分別編碼具有各自功能的蛋白質(zhì)，其中用于檢測(cè)HEV的IgM抗體診斷試劑盒和IgG抗體診斷試劑盒就是通過(guò)這些蛋白質(zhì)的特殊抗原表位進(jìn)行識(shí)別[4-5]。機(jī)體感染HEV一段時(shí)間后，首先產(chǎn)生的是IgM抗體，但I(xiàn)gM抗體在急性期后較快消退，一般可持續(xù)2～3個(gè)月[6]。而IgG抗體出現(xiàn)晚于IgM抗體，但在急性期內(nèi)含量持續(xù)增多，一直到恢復(fù)期，并且可繼續(xù)維持高水平1.0～4.5年，甚至更久[7]。而禽戊型肝炎病毒（Avian hepatitis E virus，Avian HEV）在2004年第八次國(guó)際病毒分類委員會(huì)上與豬戊型肝炎病毒被歸為戊肝病毒屬（Hepevirus），其與人戊型肝炎病毒和豬戊型肝炎病毒的同源性較低，但在ORF2蛋白上存在共有的抗原表位，因而采用檢測(cè)人戊型肝炎病毒抗體的試劑在理論上是可行的，但檢驗(yàn)的效果可能不理想。本實(shí)驗(yàn)采用兩家公司都生產(chǎn)的IgM抗體診斷試劑盒和IgG抗體診斷試劑盒對(duì)大理地區(qū)183份雞血血清進(jìn)行HEV抗體檢驗(yàn)，探究大理地區(qū)雞中HEV的存在狀況及比較兩家公司生產(chǎn)的HEV檢測(cè)試劑檢驗(yàn)效果哪種更好。

1 資料與方法

1.1 一般資料：雞血血清樣本采集時(shí)間為2015年7月23日，分別從古城菜市場(chǎng)采集雞血血清92份，從下關(guān)泰興菜市場(chǎng)采集雞血血清91份，共183份。

1.2 試劑：試劑A1：上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）；試劑A2：上?？迫A生物工程股份有限公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）。試劑B1：北京萬(wàn)泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgM抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）；試劑B2：北京萬(wàn)泰藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的戊型肝炎病毒IgG抗體診斷試劑盒（酶聯(lián)免疫法）。以上實(shí)際操作及結(jié)果判定按照各自的說(shuō)明書嚴(yán)格進(jìn)行。（注：+表示陽(yáng)性結(jié)果，-表示陰性結(jié)果，陰性表示陰性對(duì)照，陽(yáng)性表示陽(yáng)性對(duì)照，空白表示空白對(duì)照）。

1.3 方法：無(wú)菌采集大理地區(qū)古城和和下關(guān)兩菜市場(chǎng)的雞血血清，靜置過(guò)夜分離血清。分別用試劑A1、A2和試劑B1、B2對(duì)同一份雞血血清標(biāo)本進(jìn)行實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)，使用Excel處理軟件分別比較試劑A1和B1對(duì)雞血血清中IgM抗體檢測(cè)結(jié)果，比較試劑A2和B2對(duì)雞血血清中IgG抗體檢測(cè)結(jié)果。

2 結(jié)果

2.1 大理地區(qū)雞血血清戊型肝炎病毒抗體檢測(cè)：使用戊型肝炎病毒抗體檢測(cè)試劑盒A1、A2、B1和B2對(duì)大理地區(qū)雞血血清中戊型肝炎病毒抗體的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 大理地區(qū)雞血血清戊型肝炎病毒抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 對(duì)古城92份雞血血清IgM抗體檢測(cè)結(jié)果：采用試劑A1對(duì)古城菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgM抗體進(jìn)行檢測(cè)，只有A3和B10孔是陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率為2.17%（2/92），其余結(jié)果都是陰性結(jié)果。

采用試劑B1對(duì)古城菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgM抗體進(jìn)行檢測(cè)，只有C1孔是陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率為1.09%（1/92），其余結(jié)果都是陰性結(jié)果。

由以上試驗(yàn)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，試劑A1和B1陽(yáng)性結(jié)果相同的為0份，陰性結(jié)果相同的有89份。

2.3 對(duì)下關(guān)91份雞血血清IgM抗體檢測(cè)結(jié)果：采用試劑A1對(duì)下關(guān)菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgM抗體進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)陽(yáng)性結(jié)果，結(jié)果都是陰性結(jié)果。

采用試劑B1對(duì)古城菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgM抗體進(jìn)行檢測(cè)，只有H3孔是陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率為1.10%（1/91），其余結(jié)果都是陰性結(jié)果。

由以上試驗(yàn)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，試劑A1和B1陽(yáng)性結(jié)果相同的為0份，陰性結(jié)果相同的有90份。

2.4 對(duì)古城92份雞血血清IgG抗體檢測(cè)結(jié)果：采用試劑A2對(duì)古城菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，無(wú)陽(yáng)性結(jié)果，結(jié)果都是陰性結(jié)果。

采用試劑B2對(duì)古城菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，只有D2孔是陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率為1.09%（1/92），其余結(jié)果都是陰性結(jié)果。

由以上試驗(yàn)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，試劑A2和B2陽(yáng)性結(jié)果相同的為0份，陰性結(jié)果相同的有91份。

2.5 對(duì)下關(guān)91份雞血血清IgG抗體檢測(cè)結(jié)果：采用試劑A2對(duì)下關(guān)菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，C5和D2孔是陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率為2.20%（2/91），其余結(jié)果都是陰性結(jié)果。

采用試劑B2對(duì)下關(guān)菜市場(chǎng)采集的雞血血清的IgG抗體進(jìn)行檢測(cè)，B2和C2孔是陽(yáng)性結(jié)果，陽(yáng)性率為2.20%（2/91），其余結(jié)果都是陰性結(jié)果。

由以上試驗(yàn)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，試劑A2和B2陽(yáng)性結(jié)果相同的為0份，陰性結(jié)果相同的有87份。

3 討論

本實(shí)驗(yàn)研究顯示A1、A2、B1和B2對(duì)大理地區(qū)雞血血清中HEV抗體的陽(yáng)性率分別為1.09%、1.09%、1.09%和1.64%，結(jié)果證明了HEV在大理地區(qū)雞群中存在，與耿彥生[8]等研究報(bào)道的雞血清抗體陽(yáng)性率3.58%的結(jié)果相似。

試劑A1和試劑B1對(duì)HEV-IgM抗體檢測(cè)陽(yáng)性檢出率相同，該結(jié)果與王昌敏等[9]研究表明的兩種戊型肝炎病毒IgM抗體捕獲法診斷試劑對(duì)各類樣本檢測(cè)結(jié)果完全相同的研究結(jié)果相反。出現(xiàn)上述情況的原因可能是雞中的HEV屬于禽戊型肝炎病毒，與哺乳動(dòng)物HEV有較大的差異，使得采用基因Ⅰ型HEV結(jié)構(gòu)區(qū)內(nèi)ORF2和ORF3重組蛋白或合成肽為抗原[11]和以E2蛋白為構(gòu)象型抗原[5]的兩家公司生產(chǎn)的診斷試劑檢出不相符。試劑B2對(duì)HEV-IgG抗體檢測(cè)陽(yáng)性檢出率略高于試劑A2，與閆強(qiáng)等實(shí)驗(yàn)結(jié)論一致。

由于禽HEV和人HEV的ORF2區(qū)域在氨基酸水平具有56%～62%同源性，ORF2蛋白抗原及相應(yīng)單克隆或多克隆抗體存在交叉反應(yīng)，因此用哺乳動(dòng)物HEV ORF2蛋白為抗原制備HEV檢測(cè)試劑可以檢測(cè)禽HEV抗體，但檢測(cè)的靈敏度可能不高。因此進(jìn)行HEV在雞群中的流行病調(diào)查，采取這兩家任一廠家生產(chǎn)的診斷試劑盒都是可行的，但是要更準(zhǔn)確研究雞中HEV存在狀況，研制針對(duì)禽HEV的檢測(cè)試劑是很有必要的。

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R331

B 學(xué)科分類代碼： 31044

1001-8131（2016）05-0553-02

2016-05-04

云南省科技廳基礎(chǔ)研究面上項(xiàng)目（2013FB060）；大理市科學(xué)技術(shù)項(xiàng)目（2014F06）