沈 朕， 王曉蘭， 韓雅萌， 關(guān)洪斌

(山東大學(xué) 海洋學(xué)院， 山東 威海 264209)

3種復(fù)方中藥飼料添加劑對(duì)刺參生長(zhǎng)及免疫力的影響

沈 朕， 王曉蘭， 韓雅萌， 關(guān)洪斌*

(山東大學(xué) 海洋學(xué)院， 山東 威海 264209)

為中藥飼料添加劑在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考，進(jìn)行了3種復(fù)方中藥飼料添加劑(A：黃精、靈芝和丹參各3 g，益母草2 g，山楂和甘草各1 g；B：人參9 g，黃芪、淫羊藿、杜仲、枸杞、金銀花和馬齒莧各6 g，香菇10 g，甘草3 g；C：靈芝和玉竹各15 g，板藍(lán)根、蒲公英和八角茴香各10 g，甘草5 g)對(duì)刺參生長(zhǎng)和免疫力的影響試驗(yàn)(試驗(yàn)期40 d)。結(jié)果表明：復(fù)方中藥飼料添加劑B、C均能顯著提高刺參的生長(zhǎng)性能，復(fù)方中藥飼料添加劑B對(duì)于生長(zhǎng)性能的促進(jìn)和提升餌料效率的效果尤為明顯，其特定生長(zhǎng)率(1.04%/d)和增重率(14.88%)分別為空白對(duì)照組的8倍和18倍(P<0.05)，餌料系數(shù)降低；復(fù)方中藥飼料添加劑A、B和C均能顯著提升刺參的免疫性能(P<0.05)，以復(fù)方中藥飼料添加劑B組的免疫指標(biāo)較突出，超氧化歧化酶(SOD)、溶菌酶(LZM)和過(guò)氧化氫酶(CAT)活性分別為60.21 U/mL、220.78 U/mL和818.38 U/mL。3種中藥復(fù)方添加劑均對(duì)水質(zhì)有一定的負(fù)面影響，水體中的氨氮、硝氮含量均高于空白對(duì)照組，但均明顯低于刺參所能承受的最大氨氮值。

海參； 刺參； 中藥添加劑； 生長(zhǎng)性能； 免疫性能； 水質(zhì)

海參是棘皮動(dòng)物門(mén)海參綱1 100種無(wú)脊椎動(dòng)物的統(tǒng)稱，海參養(yǎng)殖是重要的漁業(yè)產(chǎn)業(yè)之一。我國(guó)的海參品質(zhì)以黃渤海海域的刺參最佳，經(jīng)濟(jì)價(jià)值也相對(duì)較高[1]。近年來(lái)，人們?cè)桨l(fā)重視海參的食補(bǔ)價(jià)值，同時(shí)對(duì)于海參的研究不斷加深，海參的需求量不斷增大，養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，養(yǎng)殖密度增大導(dǎo)致疾病、生長(zhǎng)緩慢等問(wèn)題，因此提升海參的抗病能力和生長(zhǎng)性能對(duì)其養(yǎng)殖效益的提高具有重要意義。

我國(guó)對(duì)中草藥的研究已有上千年歷史，近年來(lái)，中草藥已被廣泛應(yīng)用于各類養(yǎng)殖業(yè)中，尤其是漁業(yè)養(yǎng)殖產(chǎn)業(yè)。中草藥是天然藥物，具有無(wú)抗藥性、無(wú)副作用等優(yōu)點(diǎn)，而且可顯著抑制水中致病弧菌的生長(zhǎng)[2]，促進(jìn)魚(yú)類生長(zhǎng)及免疫性能提升[3-5]。為尋找適合刺參生長(zhǎng)發(fā)育及提升其免疫能力的中藥添加劑配方，進(jìn)行了3種復(fù)方中藥飼料添加劑對(duì)刺參生長(zhǎng)和免疫力的影響試驗(yàn)，以期為中藥飼料添加劑在刺參養(yǎng)殖中的應(yīng)用提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 刺參及海水 試驗(yàn)用刺參購(gòu)買(mǎi)于榮成市寧津海參養(yǎng)殖場(chǎng)，在120 L塑料收納箱中進(jìn)行養(yǎng)殖。養(yǎng)殖用水為威海當(dāng)?shù)睾Ｓ蚝Ｋ?4—5月鹽度31.9‰，pH7.96)，為排除藻類及其他雜質(zhì)的影響，海水在使用前均靜置24 h，并用6層脫脂棉紗布進(jìn)行過(guò)濾。

1.1.2 中藥添加劑 試驗(yàn)用中藥購(gòu)于威海頤和堂醫(yī)藥連鎖店，烘焙干燥后用高速中藥粉碎機(jī)(ZN-500A)粉碎，過(guò)60目藥篩。中藥復(fù)方添加劑配方：A)黃精、靈芝和丹參各3 g，益母草2 g，山楂和甘草各1 g；B)人參9 g，黃芪、淫羊藿、杜仲、枸杞、金銀花和馬齒莧各6 g，香菇10 g，甘草3 g；C)靈芝和玉竹各15 g，板藍(lán)根、蒲公英和八角茴香各10 g，甘草5 g。

1.1.3 飼料 飼料配方：紫貽貝粉20%，海帶粉20%，海泥54%，酵母粉5%，混合維生素?zé)o機(jī)鹽1%。其中，紫貽貝粉購(gòu)買(mǎi)自威海家家悅水產(chǎn)部，烘干至恒重后，高速中藥粉碎機(jī)(ZN-500A)粉碎，過(guò)60目篩；海帶粉取自威海市小石島海參養(yǎng)殖場(chǎng)；混合維生素?zé)o機(jī)鹽為21金維他多維元素片粉末。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)

試驗(yàn)前對(duì)刺參進(jìn)行馴化1周，飼料為市售飼料與市售海泥粉以7∶3混合，使其適應(yīng)飼養(yǎng)環(huán)境，觀察沒(méi)有異樣后進(jìn)行試驗(yàn)。試驗(yàn)開(kāi)始前所有刺參饑餓處理24 h，挑選健康刺參稱重，此體重為初始體重。試驗(yàn)分為4個(gè)組，Ⅰ～Ⅲ組為中藥添加劑組，Ⅳ組為空白對(duì)照，每組2個(gè)平行。按照體重大小把刺參均勻投放到各養(yǎng)殖箱中，每箱10只。養(yǎng)殖期間每天上下午各吸底清掃養(yǎng)殖箱1次，下午換水1/3，每4 d徹底清洗養(yǎng)殖箱并換水。每天下午換水后喂食1次，投喂飼料量為箱中刺參總體重的3%，Ⅰ～Ⅲ組分別投喂中藥添加劑A～C配方，投喂量為飼料重量的0.3%并與飼料混合均勻，養(yǎng)殖時(shí)間為40 d，期間溫度保持在11～14℃，鹽度在31.6‰～31.9‰，溶解氧均高于6 mg/L。

1.3 指標(biāo)測(cè)定

1.3.1 生長(zhǎng)性能測(cè)定 試驗(yàn)結(jié)束后所有刺參饑餓處理24 h，在6層干紗布上靜止30 s后進(jìn)行稱重并記錄。選取每個(gè)箱中生長(zhǎng)狀況良好的6只刺參計(jì)入數(shù)據(jù)，排除刺參吐腸及死亡對(duì)試驗(yàn)結(jié)果的影響。參照文獻(xiàn)[6]的方法計(jì)算殘食量、特定生長(zhǎng)率(SGR)、增重率(WGR)和餌料系數(shù)。

1.3.2 免疫性能測(cè)定 刺參靜置30 min后從體壁切口處收集體腔液，并按照試驗(yàn)需求用體腔緩沖液稀釋，低溫保存[7]。分別用總超氧化歧化酶(T-SOD)測(cè)試盒A001-1、溶菌酶(LZM)檢測(cè)試劑盒A050和過(guò)氧化氫酶(Catalase CAT)檢測(cè)試劑盒A007-2(均購(gòu)自南京建成生物工程研究所)測(cè)定超氧化歧化酶、溶菌酶和過(guò)氧化氫酶。

1.3.3 水質(zhì)測(cè)定 每次進(jìn)行完全換水前收集樣本立即測(cè)量。用美國(guó)YSI公司型號(hào)YSI 556 MPS多參數(shù)水質(zhì)測(cè)量?jī)x測(cè)定水體鹽度、pH和溶解氧，使用溶氧空氣飽和度方法進(jìn)行溶解氧標(biāo)定。用硝基水楊酸法比色測(cè)定硝態(tài)氮，以KNO3溶液繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。采用納氏試劑光度法測(cè)定氨氮，測(cè)量波長(zhǎng)為425 nm。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)數(shù)據(jù)用軟件Excel2003進(jìn)行處理，用Spss 19.0進(jìn)行相關(guān)性檢驗(yàn)、單因素方差分析和LSD多重比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 生長(zhǎng)及免疫性能

從表中看出，刺參的特定生長(zhǎng)率及增重率均以Ⅱ組最高，分別為1.04%/d和14.88%；Ⅲ組次之，分別為0.22%/d和6.88%；Ⅰ組最低，分別為-0.05%/d和-0.69%。Ⅱ組、Ⅲ組的特定生長(zhǎng)率和增重率均顯著高于空白對(duì)照(Ⅳ組)，Ⅰ組顯著低于空白對(duì)照。Ⅱ組的復(fù)方中藥添加劑對(duì)促進(jìn)生長(zhǎng)性能和提升餌料效率的效果尤為明顯，其特定生長(zhǎng)率、增重率分別為對(duì)照的8倍和18倍，餌料系數(shù)則降低52.8%。Ⅲ組的特定生長(zhǎng)率、增重率分別為對(duì)照組的1.7倍和8.3倍，餌料系數(shù)則降低18.8%。

刺參飼喂復(fù)方中藥添加劑的超氧化歧化酶、溶菌酶和過(guò)氧化氫酶活性均顯著高于對(duì)照。超氧化歧化酶活性以Ⅲ組最高，達(dá)62.87 U/mL，顯著高于Ⅰ組和Ⅱ組；Ⅰ組、Ⅱ組分別為60.31 U/mL和60.21 U/mL，組間差異不顯著。溶菌酶活性以Ⅱ組最高，達(dá)220.78 U/mL，顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組；Ⅰ組、Ⅲ組分別為206.69 U/mL和212.24 U/mL，組間差異顯著。過(guò)氧化氫酶活性以Ⅱ組最高，達(dá)818.38 U/mL，顯著高于Ⅰ組和Ⅲ組；Ⅰ組、Ⅲ組分別為759.09 U/mL和663.92 U/mL，組間差異顯著。

表 各組刺參的生長(zhǎng)及免疫性能

注：同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。

Note：Different lowercase letters in the same column indicated 5% significant level.

圖示 各組刺參養(yǎng)殖水體氨氮及硝氮的含量

Fig. Contents of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen in the aquatic water of each group

2.2 養(yǎng)殖水質(zhì)

從圖示看出，刺參飼喂復(fù)方中藥添加劑的水體氨氮、硝氮含量均高于對(duì)照。表明，投放復(fù)方中藥添加劑會(huì)明顯提升水中的氨氮含量，Ⅰ組、Ⅱ組的氨氮含量均約為Ⅲ組的2倍和對(duì)照的4倍。Ⅰ組、Ⅲ組的硝氮含量均約為對(duì)照的2倍，Ⅱ組略高于對(duì)照。

3 結(jié)論與討論

3.1 復(fù)方中藥添加劑對(duì)刺參生長(zhǎng)性能的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，3種復(fù)方中藥添加劑對(duì)刺參的生長(zhǎng)影響不盡相同，其中，復(fù)方中藥添加劑A對(duì)刺身生長(zhǎng)有負(fù)面影響，降低餌料系數(shù)，說(shuō)明此添加劑對(duì)刺參的進(jìn)食效率有一定負(fù)面影響。復(fù)方中藥添加劑B、C對(duì)刺參生長(zhǎng)性能有顯著提升作用，其中以復(fù)方中藥添加劑B的效果最佳，其刺參的特定生長(zhǎng)率、增重率分別為1.04%/d和14.88%，是對(duì)照的8倍和18倍；餌料系數(shù)為2.68，比對(duì)照組低52.8%。究其原因可能與復(fù)方中藥添加劑B中加入了大量的人參有關(guān)，因?yàn)槿藚⒅泻胸S富的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)如人參皂甙、有機(jī)酸及酯類和多種重要的氨基酸，從而促進(jìn)刺參的生長(zhǎng)。

3.2 復(fù)方中藥添加劑對(duì)刺參免疫性能的影響

超氧化物歧化酶(SOD)可使對(duì)機(jī)體造成傷害的游離基轉(zhuǎn)化為過(guò)氧化氫和氧，防止自由基促使疾病發(fā)生和機(jī)體衰老。溶菌酶(LZM)能分解致病菌的黏多糖，破壞細(xì)胞壁，還可與帶負(fù)電荷的病毒蛋白直接結(jié)合，使病毒失活，該酶具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。過(guò)氧化氫酶(CAT)用來(lái)催化代謝過(guò)程產(chǎn)生的廢物過(guò)氧化氫，避免其對(duì)機(jī)體造成傷害。體液免疫是海參抵抗外來(lái)微生物入侵的主要防御體系[8]，所以選用以上3種免疫酶作為刺參的免疫指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果表明，3種復(fù)方中藥添加劑均可提高超氧化歧化酶的活性，其中，復(fù)方中藥添加劑A、B的酶活性相當(dāng)，C略高于前兩組。溶菌酶活性大小為B>C>A，均顯著高于對(duì)照組。過(guò)氧化氫酶活性B>A>C，但均遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于空白對(duì)照組。綜合來(lái)看，復(fù)方中藥添加劑B促進(jìn)免疫效果提升的作用好于A和C?？赡芘c復(fù)方中藥添加劑B中加入大量的人參、黃芪有關(guān)，因?yàn)槿藚⒑写罅咳藚⒍嗵?，可以通過(guò)影響機(jī)體細(xì)胞免疫，提高動(dòng)物自身免疫性能；人參皂甙對(duì)于細(xì)胞吞噬活性、超氧化物歧化酶活力、一氧化氮酶活力有著明顯的提升作用[9]。黃芪中的黃芪多糖能促進(jìn)抗體生成，也有提高免疫力的作用[10]，可以顯著提升海參體內(nèi)溶菌酶的基因表達(dá)量，增強(qiáng)海參自身的免疫能力[11]。

3.3 復(fù)方中藥添加劑對(duì)刺參養(yǎng)殖水質(zhì)的影響

試驗(yàn)結(jié)果表明，3種復(fù)方中藥添加劑對(duì)刺參養(yǎng)殖水質(zhì)均有一定的負(fù)面影響，水體中的氨氮、硝氮含量均高于空白對(duì)照組，但均明顯低于海參所能承受的最大氨氮值。養(yǎng)殖期溶解氧含量保持在6 mg/L以上，水中氧氣充足，硝態(tài)氮主要形式為完全氧化的硝酸氮鹽，易使海洋生物致病的亞硝酸鹽含量極低。

[1] 何 翠，黃國(guó)強(qiáng).全國(guó)及主要刺參養(yǎng)殖省份刺參養(yǎng)殖狀況分析[J].漁業(yè)信息與戰(zhàn)略，2014，29(1):24-30.

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(責(zé)任編輯： 馮 衛(wèi))

Effects of Three Kinds of Compound Traditional Chinese Medicine Feed Additives on Growth and Immunity Performance ofStichopusjaponicus

SHEN Zhen, WANG Xiaolan, HAN Yameng, GUAN Hongbin*

(MarineCollege,ShandongUniversity，Weihai,Shandong264209,China)

To provide references for applying traditional Chinese medicine feed additives in culture ofS.japonicus, three different kinds of Chinese traditional medicine(A: sealwort 3 g, lucid ganoderma 3 g, Salvia miltiorrhiza 3 g, motherwort 2 g, hawthorn 1 g and liquorice 1 g; B: ginseng 9 g, Astragalus membranaceus 6 g, herba epimedii 6 g, Eucommia ulmoides 6 g, medlar 6 g, honeysuckle 6 g, purslane 6 g, mushroom 10 g, liquorice 3 g; C: lucid ganoderma 15 g, radix polygonati officinalis 15 g, isatis root 10 g, dandelion 10 g, illicium verum 10 g, liquorice 5 g) were used as feed additive to find out the effects onS.japonicusgrowth and immunity(test period 40 d). Results: B and C could significantly enhance the growth performance ofS.japonicus.Especially B, the specific growth rate(1.04%/d) and weight gain rate(14.88%) of which were respectively eight times and 18 times that of the control(P<0.05). The food coefficient decreased; A, B and C could all significantly enhance the immunity performance ofS.japonicus(P<0.05). B had the prominent performance, SOD, LZM and CAT of which were respectively 60.21 U/mL, 220.78 U/mL and 818.38 U/mL. All the three kinds of feed additives had negative effects on water quality, contents of ammonia nitrogen and nitrate nitrogen in the water were all higher than the control, while obviously lower than the maximum nitrate nitrogen valueS.japonicuscould endure.

sea cucumber;Stichopusjaponicas; Chinese traditional medicine additive; growth performance；immune performance; water quality

2016-01-27； 2016-03-07修回

威海市海洋研究院資助項(xiàng)目“刺參親參性腺良好發(fā)育相關(guān)技術(shù)研究”(1070413421205)

沈 朕(1990-)，男，在讀碩士，研究方向：基因工程。E-mail：570501747@qq.com

*通訊作者：關(guān)洪斌(1961-)，男，副教授，博士，從事逆境生理、基因表達(dá)與動(dòng)物營(yíng)養(yǎng)研究。E-mail：guanhongbin@sdu.edu.cn

1001-3601(2016)04-0170-0103-03

S968.9

A