崔俊林，曹　娟

(1.鐘祥市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北鐘祥 431900；2.臺(tái)州恩澤醫(yī)療集團(tuán)(中心)路橋醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江臺(tái)州 318050)

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·臨床研究·

乙二胺四乙酸依賴(lài)性假性血小板減少的分析

崔俊林1，曹娟2

(1.鐘祥市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，湖北鐘祥 431900；2.臺(tái)州恩澤醫(yī)療集團(tuán)(中心)路橋醫(yī)院檢驗(yàn)科，浙江臺(tái)州 318050)

摘要:目的探討乙二胺四乙酸依賴(lài)性假性血小板減少(EDTA-PTCP)的原因及鑒別要點(diǎn)和防范措施，減少或防止誤診誤治。方法對(duì)2013年1～12月鐘祥市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科發(fā)現(xiàn)的3例EDTA-PTCP患者分別用乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝管、肝素抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管采集靜脈血，而后用全自動(dòng)血液分析儀分別測(cè)定血小板數(shù)量，并用毛細(xì)血管血進(jìn)行血小板手工計(jì)數(shù)，且制作EDTA-K2抗凝血涂片和毛細(xì)血管血涂片，并用瑞氏染色鏡檢。結(jié)果EDTA-K2抗凝血的機(jī)測(cè)血小板結(jié)果均很低(<50×109/L)，血小板直方圖存在曲皺、尾部上翹、拖尾、無(wú)擬合曲線(xiàn)等異常；枸櫞酸鈉抗凝血和肝素抗凝血機(jī)測(cè)結(jié)果正常，血小板直方圖也正常；手工計(jì)數(shù)血小板數(shù)量正常，且涂片可見(jiàn)分布正常。3例均明確為EDTA-PTCP。結(jié)論EDTA-K2抗凝劑可引起血小板聚集，造成血小板假性減少。用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)EDTA-K2抗凝血時(shí)，若出現(xiàn)血小板減低而患者無(wú)出血傾向、血栓形成等相關(guān)血小板減少癥時(shí)，應(yīng)進(jìn)一步進(jìn)行人工計(jì)數(shù)、血涂片復(fù)查和更換抗凝劑等方法復(fù)檢，以減少或避免誤診誤治。

關(guān)鍵詞:血小板；乙二胺四乙酸；假性血小板減少

目前，全自動(dòng)血液分析儀在臨床檢驗(yàn)工作中廣泛應(yīng)用，乙二胺四乙酸(EDTA)是國(guó)際血液學(xué)標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì)(ICSH)推薦的血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)的抗凝劑。它的原理是能與血液中的鈣離子結(jié)合成螯合物，而使鈣離子失去凝血作用，從而阻止血液凝固。但其偶可誘導(dǎo)血小板發(fā)生體外聚集，血細(xì)胞自動(dòng)分析儀又不能加以識(shí)別，導(dǎo)致血小板計(jì)數(shù)低于實(shí)際值，而出現(xiàn)假性血小板減少現(xiàn)象，即EDTA依賴(lài)性假性血小板減少癥(EDTA-PTCP)，易造成誤診誤治，甚至引發(fā)醫(yī)療糾紛[1-2]。鐘祥市人民醫(yī)院2013年1～12月共發(fā)生3例EDTA-PTCP，現(xiàn)結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)分析報(bào)道如下。

1資料和方法

1.1一般資料本組3例，男2例，女1例，其中2例男性為接受健康體檢者，1例女性為擇期剖宮產(chǎn)手術(shù)的住院患者。3例患者均無(wú)皮膚黏膜出血、紫癜等明顯出血傾向。乙二胺四乙酸二鉀(EDTA-K2)抗凝的靜脈血用全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)均發(fā)現(xiàn)PLT<50×109/L，但末梢血涂片染色后鏡檢發(fā)現(xiàn)血小板分布正常，而且用肝素抗凝真空采血管、枸櫞酸鈉抗凝真空采血管重抽后血液分析儀計(jì)數(shù)和末梢血手工計(jì)數(shù)的血小板數(shù)量均在正常范圍。

1.2儀器和試劑Sysmex XE-2100 全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀及其配套試劑，德國(guó)賽力斯BE-XRM血凝儀及配套試劑，EDTA-K2真空采血管、枸櫞酸鈉抗凝真空采血管及肝素抗凝真空采血管(均由浙江康是醫(yī)療器械有限公司生產(chǎn))，SP-1000i 推片機(jī)，OLYMPUS-BX41顯微鏡，Neubauer 計(jì)數(shù)盤(pán)，載玻片(由天津玻璃廠生產(chǎn))，手工計(jì)數(shù)血小板稀釋液及瑞氏染液均參照《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操做規(guī)程》[3]由本實(shí)驗(yàn)室配制。

1.3臨床排查 仔細(xì)查體觀察患者有無(wú)皮膚、黏膜出血，排除血小板減少的相關(guān)性疾病，檢測(cè)凝血酶原時(shí)間(PT)、活化部分凝血活酶時(shí)間(APTT)、纖維蛋白原(FIB)、凝血酶時(shí)間(TT)。

1.4血小板復(fù)查

1.4.1儀器法 分別用EDTA-K2抗凝管、肝素抗凝管和枸櫞酸鈉抗凝管采患者靜脈血2 mL，充分混勻，嚴(yán)格按照操作規(guī)程，在30 min內(nèi)應(yīng)用Sysmex XE-2100全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀分別測(cè)定血小板。血小板的參考范圍是(100～300)×109/L。

1.4.2手工法取毛細(xì)血管血20 μL按《全國(guó)臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》(3版)的操作方法進(jìn)行血小板手工計(jì)數(shù)。

1.4.3瑞氏染色分別用患者毛細(xì)血管血涂片1 張，EDTA-K2抗凝靜脈血涂片1 張，用瑞氏染液染色，在顯微鏡下觀察血小板分布情況。

2結(jié)果

本組均排除采血不當(dāng)、抗凝劑與血液混勻不均導(dǎo)致的血小板減少。查體發(fā)現(xiàn)3例均無(wú)皮膚、黏膜出血，且凝血功能檢測(cè)正常。EDTA-K2抗凝靜脈血用儀器法檢測(cè)的血小板數(shù)量仍很低(<50×109/L)，且血小板直方圖存在曲皺、尾部上翹、拖尾、無(wú)擬合曲線(xiàn)等異常，散點(diǎn)圖也有異常情況，血涂片顯示血小板聚集、巨大血小板、血小板衛(wèi)星現(xiàn)象等。枸櫞酸鈉抗凝靜脈血和肝素鋰抗凝靜脈血用儀器法檢測(cè)的血小板數(shù)量都處于正常范圍，且血小板直方圖圖形正常。用手工法計(jì)數(shù)的毛細(xì)血管血小板數(shù)量也處于正常范圍，并且毛細(xì)血管血涂片顯示血小板分布正常，血小板2～4個(gè)聚集或散在分布，未見(jiàn)明顯片狀聚集現(xiàn)象。EDTA-K2抗凝血涂片顯示，血小板大量聚集，成簇甚至成片，偶見(jiàn)散在在分布。根據(jù)上述結(jié)果，明確3例均為EDTA-PTCP，詳見(jiàn)表1。

表1　　3例患者的血小板檢測(cè)結(jié)果(×109/L)

3討論

3.1EDTA-PTCP的病理機(jī)制EDTA-PTCP的病理機(jī)制并不是很明確，目前認(rèn)為EDTA-PTCP的發(fā)生可能與血小板表面存在某種隱匿性抗原有關(guān)[4-5]。由于EDTA鹽可導(dǎo)致血小板活化，血小板形態(tài)發(fā)生改變，致使血小板表面某種隱匿性抗原表位構(gòu)象改變，這些活化的血小板與存在于血漿中的自身抗體結(jié)合后，激活了細(xì)胞膜中某些能活化血小板纖維蛋白原受體的活性物質(zhì)，促使血小板與纖維蛋白原聚集成團(tuán);也有研究資料表明，EDTA-PTCP是由于EDTA鹽抗凝時(shí)可誘導(dǎo)血小板互相聚集，堆積發(fā)生衛(wèi)星現(xiàn)象(血小板圍繞在單核細(xì)胞或淋巴細(xì)胞周?chē)尸F(xiàn)衛(wèi)星現(xiàn)象)[6]，致使全自動(dòng)血細(xì)胞分析儀不能確認(rèn)血小板而計(jì)數(shù)偏低[7]。

3.2防范EDTA-PTCP的措施在日常檢驗(yàn)工作中，對(duì)EDTA 抗凝的標(biāo)本進(jìn)行血細(xì)胞分析儀計(jì)數(shù)時(shí)出現(xiàn)血小板減少的現(xiàn)象，必須認(rèn)真查看并分析其血小板直方圖，看有無(wú)擬合曲線(xiàn)或血小板聚集警告提示，并制作血涂片染色鏡檢，觀察有無(wú)血小板聚集成堆或成簇的現(xiàn)象。對(duì)于PLT<50×109/L的患者，應(yīng)及時(shí)和臨床醫(yī)生溝通，在了解患者無(wú)紫癜且無(wú)出血癥狀與體征，凝血功能正常的情況下，要重新采樣復(fù)查，并進(jìn)行不同的方法比對(duì)，如末梢血手工稀釋計(jì)數(shù)、枸櫞酸鈉和肝素抗凝血計(jì)數(shù)，同時(shí)制作血涂片瑞氏染色，顯微鏡下觀察血小板是否有聚集現(xiàn)象，獲得準(zhǔn)確的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，避免因?yàn)镋DTA鹽作為抗凝劑造成的血小板假性減少的情況。當(dāng)然，這種情況發(fā)生率極低。一旦發(fā)生，會(huì)給臨床醫(yī)生帶來(lái)錯(cuò)誤指導(dǎo)，就會(huì)給患者增加一些臨床不必要的檢查，甚至出現(xiàn)誤診、誤治現(xiàn)象。因此，檢驗(yàn)人員一定要有高度的責(zé)任心，提高檢驗(yàn)質(zhì)量，避免上述情況的發(fā)生。

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(收稿日期：2015-07-25)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.049

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)01-0105-02