馮　潛，李　穎，顧　兵，張　穎

(徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221000)

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·論著·

(1-3)-β-D葡聚糖聯(lián)合半乳甘露聚糖抗原檢測(cè)在侵襲性真菌感染中的應(yīng)用價(jià)值

馮潛，李穎△，顧兵，張穎

(徐州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇徐州 221000)

摘要:目的探討(1-3)-β-D葡聚糖(G試驗(yàn))和半乳甘露聚糖抗原(GM試驗(yàn))檢測(cè)在侵襲性真菌感染(IFI)中的應(yīng)用價(jià)值。方法收集該院住院高危IFI患者126例，分別檢測(cè)患者血清(1-3)-β-D葡聚糖和半乳甘露聚糖水平，計(jì)算G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)及聯(lián)合檢測(cè)的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值(PPV)、陰性預(yù)測(cè)值(NPV)、假陽(yáng)性率、假陰性率。結(jié)果G試驗(yàn)的敏感度(83.0%)高于GM試驗(yàn)(77.4%)，而特異度(74.2%)低于GM試驗(yàn)(89.4%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。聯(lián)合檢測(cè)敏感度、特異度、PPV及NPV分別為92.5%、95.5%、92.1%、92.0%，其敏感度和特異度均高于G試驗(yàn)、GM試驗(yàn)單獨(dú)檢測(cè)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。結(jié)論G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)，能提高診斷準(zhǔn)確性，更有效地用于侵襲性真菌感染的早期診斷。

關(guān)鍵詞:侵襲性真菌感染；(1-3)-β-D葡聚糖；半乳甘露聚糖

侵襲性真菌感染是以侵襲深部組織和內(nèi)部以及全身為主的真菌感染，因其臨床表現(xiàn)常無(wú)特異性，故其誤診率、漏診率較高。近年來(lái)開(kāi)展的(1-3)-β-D葡聚糖(BG)和半乳甘露聚糖抗原(GM)的檢測(cè)已在臨床廣泛應(yīng)用，成為目前診斷侵襲性真菌感染的首選方法[1]。本研究分別通過(guò)檢測(cè)患者血清中的G抗原和GM抗原，探討其在侵襲性真菌感染中的應(yīng)用價(jià)值。

1資料與方法

1.1一般資料選取2014年10月至2015年3月在本院呼吸科、重癥醫(yī)學(xué)科及血液科住院的患者126例，其中男72例，女54例，年齡39～90歲，平均年齡54歲。按歐洲癌癥治療組織/侵襲性真菌感染協(xié)作組(EORTC)及我國(guó)真菌診斷的標(biāo)準(zhǔn)[2-3]分為確診組11例、臨床診斷組42例、擬診組7例和非真菌感染組66例。

1.2儀器與試劑

1.2.1儀器MB-80微生物快速動(dòng)態(tài)檢測(cè)系統(tǒng)，流水線式全自動(dòng)酶聯(lián)免疫工作站(ADC ELISA 180)，T02智能恒溫儀，高速離心機(jī)，振蕩器。

1.2.2試劑真菌BG檢測(cè)采用GKT-5M動(dòng)態(tài)真菌檢測(cè)試劑盒(光度法)，購(gòu)于北京金山川科技發(fā)展有限公司，批號(hào)：GKT232；GM檢測(cè)試劑盒，購(gòu)于法國(guó)Platelia Aspergillus，Bio-Rad公司，批號(hào)：4G0028。

1.3方法

1.3.1標(biāo)本收集與處理用一次性無(wú)菌無(wú)熱源真空采血管采取靜脈血4 mL，3 000 r/min離心10～15 min，分離血清，2 h內(nèi)檢測(cè)。

1.3.2G 試驗(yàn)嚴(yán)格按照儀器和試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。結(jié)果解釋：60 pg/mL以下，無(wú)深部真菌感染(隱球菌、接合菌除外)；60～100 pg/mL為觀察期，應(yīng)連續(xù)檢測(cè)；100 pg/mL以上，懷疑為深部真菌感染。

1.3.3GM試驗(yàn)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。試驗(yàn)原理采用酶聯(lián)免疫一步夾心法，根據(jù)換算公式Index=標(biāo)本OD值/臨界值對(duì)照OD值均值，將標(biāo)本OD值換算為系數(shù)I值，I<0.05被認(rèn)為是GM抗原陰性；I≥0.50被認(rèn)為是GM抗原陽(yáng)性。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理以臨床確診IFI為真陽(yáng)性，以非IFI為真陰性，做四格表分析評(píng)價(jià)G試驗(yàn)和GM 試驗(yàn)與聯(lián)合診斷的價(jià)值。采用SPSS17.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，兩組間計(jì)量資料比較用χ2檢驗(yàn),以P<0.05 為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。計(jì)算單項(xiàng)試驗(yàn)和聯(lián)合試驗(yàn)的敏感度、特異度、陽(yáng)性預(yù)測(cè)值、陰性預(yù)測(cè)值、假陽(yáng)性率和假陰性率。

2結(jié)果

2.1G試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果分析126例患者中G試驗(yàn)陽(yáng)性61例，陰性65例，陽(yáng)性率為48.4%，見(jiàn)表1。以臨床確診IFI為真陽(yáng)性53例，排除IFI診斷為真陰性66例，行四格表分析。G試驗(yàn)敏感度、特異度、PPV、NPV、假陽(yáng)性率及假陰性率分別為83.0%、74.2%、72.1%、84.5%、25.8%、17.0%，見(jiàn)表2。

2.2GM試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果分析126例患者中GM試驗(yàn)陽(yáng)性48例，陰性78例，陽(yáng)性率為38.1%，見(jiàn)表1。GM試驗(yàn)敏感度、特異度、PPV、NPV、假陽(yáng)性率及假陰性率分別為77.4%、89.4%、85.4%、83.1%、10.6%、22.6%，見(jiàn)表2。G試驗(yàn)的敏感度高于GM試驗(yàn)，而特異度低于GM試驗(yàn)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.3G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果分析G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)并聯(lián)檢測(cè)的敏感度為92.5%，高于G試驗(yàn)(83.0%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；串聯(lián)檢測(cè)特異度為95.5%，高于GM試驗(yàn)(89.4%)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，詳見(jiàn)表3。

表1　　G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)結(jié)果

表2　　G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)敏感度、特異度、PPV、NPV假陽(yáng)性率、假陰性率比較

-：無(wú)數(shù)據(jù)。

表3　　G試驗(yàn)與GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)結(jié)果

-：無(wú)數(shù)據(jù)。

3討論

侵襲性真菌感染的發(fā)生率和病死率呈逐年上升趨勢(shì)，作為“金標(biāo)準(zhǔn)”的病原微生物培養(yǎng)，因其耗時(shí)長(zhǎng)、敏感度低的缺點(diǎn)，給臨床診斷帶來(lái)一定的局限性。而B(niǎo)G和GM抗原檢測(cè)憑借其耗時(shí)短、敏感度和特異度較高等優(yōu)點(diǎn)在臨床上得到廣泛推廣。

真菌中除外接合菌和隱球菌，其細(xì)胞壁成分中有50%以上都是BG[4]，真菌經(jīng)人體吞噬細(xì)胞吞噬消化后，能夠持續(xù)釋放高含量的BG，后者可特異性激活鱟變形細(xì)胞裂解物中的G因子，最終形成凝固蛋白，故名G試驗(yàn)。GM是一種特異性熱穩(wěn)定多糖成分，廣泛存在于曲霉菌細(xì)胞壁上，它是曲霉菌菌絲最早釋放的抗原。GM試驗(yàn)的優(yōu)勢(shì)在于GM釋放量與菌量呈正比，可以反映其感染程度；且由于曲霉菌定植時(shí)釋放入血量極少，有助于侵襲與定植的鑒別。臨床上常多次連續(xù)檢測(cè)G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)，作為治療療效監(jiān)測(cè)的指標(biāo)。

本研究結(jié)果顯示，G試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與臨床最終診斷結(jié)果的差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而GM試驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果與臨床最終診斷結(jié)果的差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，此結(jié)果與國(guó)內(nèi)有關(guān)研究結(jié)果基本一致[5]。G試驗(yàn)的敏感度(83.0%)高于GM試驗(yàn)(77.4%)，GM試驗(yàn)的特異度(89.4%)高于G試驗(yàn)(74.2%)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，表明G試驗(yàn)雖能提示深部真菌感染的存在，卻無(wú)法鑒定具體種屬；GM試驗(yàn)雖特異度較高，但因其敏感度不高往往造成一定程度的漏診。因此，G試驗(yàn)只可作為篩查侵襲性真菌感染的第一步。國(guó)內(nèi)外對(duì)GM試驗(yàn)的Meta分析表明，其在造血干細(xì)胞移植及血液系統(tǒng)腫瘤患者中的敏感度為70%～82%，特異度為82%～92%[6]，與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果(敏感度77.4%、特異度89.4%)基本一致。

本實(shí)驗(yàn)中G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)單獨(dú)檢測(cè)的假陽(yáng)性率和假陰性率都較高，均超過(guò)10%。造成G試驗(yàn)假陽(yáng)性的因素常見(jiàn)于使用含葡聚糖的靜脈制劑、紗布等醫(yī)療物品；服用多糖類抗腫瘤類藥物及多黏菌素、磺胺類藥物等。此外，鏈球菌敗血癥患者、標(biāo)本脂血、黃疸及污染時(shí)也可出現(xiàn)假陽(yáng)性。而某些抗真菌藥物的使用、局灶性曲霉菌病等亦可導(dǎo)致G試驗(yàn)假陰性。GM試驗(yàn)假陽(yáng)性常見(jiàn)于某些半合成青霉素，如哌拉西林的使用、食用可能含GM的牛奶等高蛋白食物及污染的大米[7-8]、自身免疫性肝炎、非粒細(xì)胞缺乏癥及新生兒和兒童。另外，當(dāng)釋放入血的GM并不持續(xù)存在而被很快清除時(shí)可導(dǎo)致假陰性。

本研究結(jié)果顯示，單獨(dú)檢測(cè)G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的敏感度和特異度并不高，而聯(lián)合檢測(cè)則在一定程度上彌補(bǔ)了各自不足，提高了整個(gè)試驗(yàn)的敏感度和特異度，降低了假陽(yáng)性率或假陰性率。本實(shí)驗(yàn)中，并聯(lián)檢測(cè)對(duì)IFI敏感度可達(dá)92.5%，串聯(lián)檢測(cè)特異度可達(dá)95.5%，其敏感度和特異度均高于G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)的單獨(dú)檢測(cè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。串聯(lián)檢測(cè)的PPV為92.1%，即當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果均為陽(yáng)性時(shí)，提示患者合并IFI的可能性非常高，需結(jié)合臨床盡早進(jìn)行經(jīng)驗(yàn)性抗真菌治療；而聯(lián)合檢測(cè)的NPV為92.0%，即當(dāng)試驗(yàn)結(jié)果均為陰性時(shí)，提示患者合并IFI的可能性并不高，結(jié)合臨床并連續(xù)動(dòng)態(tài)觀察G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)，有助于排除IFI的診斷，降低漏診率和誤診率。

綜上所述，G試驗(yàn)和GM試驗(yàn)聯(lián)合檢測(cè)診斷侵襲性真菌感染，可以提高試驗(yàn)結(jié)果的敏感度和特異度，降低假陽(yáng)性率和假陰性率，為臨床及時(shí)準(zhǔn)確地抗真菌治療提供有效的數(shù)據(jù)支撐，提高患者生存率和治愈率。

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Application value of detection of (1-3)-β-D glucan combined with

galactomannan antigen in invasive fungal infections

FengQian,LiYing△,GuBing,ZhangYing

(DepartmentofClinicalLaboratory,AffiliatedHospitalofXuzhouMedicalCollege,Xuzhou,Jiangsu221000,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the application value of detecting serum (1-3)-β-D glucan(G test) and galactomannan antigen(GM test) in invasive fungal infections(IFI).MethodsA total of 126 patients with risk factors for IFI in our hospital were collected.The level of serum (1-3)-β-D glucan and galactomannan of all patients were detected.The sensitivity,specificity,positive predictive value (PPV),negative predictive value (NPV),fasle positive rate and false negative rate of G test,GM test and joint detection were calculated.ResultsThe sensitivity of G test was higher than that of GM test(83.0% vs.77.4%) and the specificity was lower than that of GM test(74.2% vs.89.4%),the differences were statistically significant(P<0.05).The sensitivity,specificity,PPV and NPV of the combined detection of G and GM were 92.5%,95.5%,92.1% and 92.0% respectively.The sensitivity and the specificity of the combined detection were higher than that of single G test and GM test respectively,and the differences were statistically significant(P<0.05).ConclusionThe joint detection of G test and GM test could improve the diagnostic accuracy and be more effectively used for the early diagnosis of invasive fungal infections.

Key words:invasive fungal infections;(1-3)-β-D glucan;galactomannan

(收稿日期：2015-07-18)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.031

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：1673-4130(2016)01-0071-03

作者簡(jiǎn)介：馮潛，男，初級(jí)檢驗(yàn)醫(yī)師，主要從事臨床微生物免疫檢驗(yàn)研究。△通訊作者，E-mail：154357456@qq.com。