李彩東，林　靜，陳錫蓮，楊勇衛(wèi)，靳克儉，吳　斌

(1.蘭州市第二人民醫(yī)院肝病研究所，蘭州 730046；2.甘肅省醫(yī)學情報研究所，蘭州 730050)

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·論著·

細胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ及TGF-β在慢性乙型肝炎病毒感染者外周血中的表達及臨床意義的研究*

李彩東1，林靜2，陳錫蓮1，楊勇衛(wèi)1，靳克儉1，吳斌1

(1.蘭州市第二人民醫(yī)院肝病研究所，蘭州 730046；2.甘肅省醫(yī)學情報研究所，蘭州 730050)

摘要:目的探討HBV感染者外周血細胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β的表達水平變化的及臨床意義。方法選擇肝癌患者60例(HCC組)、肝硬化患者60例(LC組)、慢性乙型肝炎患者60例(CHB組)、慢性乙型肝炎病毒攜帶者60例(ASC組)和健康對照者40例(健康對照組)，采用酶聯(lián)免疫法檢測細胞因子表達水平，運用聚合酶鏈反應檢測HBV DNA載量，同時檢測各項生化指標。結果隨著患者病情加重，細胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β表達水平均呈逐漸升高的趨勢，且在肝硬化患者中達到最大值。與健康對照組相比，不同臨床類型HBV感染者細胞因子表達水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β在CHB患者外周血HBV DNA高載量組表達水平最高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。結論IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β可能參與了乙型肝炎的肝臟炎性損傷過程，且其表達水平與病毒量具有一定相關性。

關鍵詞:乙型肝炎；IL-15；IL-16；IFN-γ；TGF-β；臨床意義

人感染乙型肝炎病毒(HBV)病毒后的臨床轉歸差異巨大，如不積極治療，病情將不斷進展，肝臟發(fā)生纖維化，最終導致肝硬化和肝功能衰竭，HBV的慢性感染也是原發(fā)性肝癌諸多致病因素中最主要的致病因素之一[1]。乙型肝炎的發(fā)病與機體的免疫反應有關，細胞因子是一類由單核巨噬細胞、淋巴細胞等分泌的具有調節(jié)細胞功能的多肽物質，在機體的免疫反應中與乙肝病毒相互作用，相互影響[2]。目前，將細胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β結合，研究其在慢性乙型肝炎患者的發(fā)病機制中所發(fā)揮作用的報道尚不多見，本研究旨在探討HBV感染者血清IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β的表達及其與HBV DNA載量的相關性。

1資料與方法

1.1一般資料240例患者均為2014年7～12月在蘭州市第二人民醫(yī)院住院及肝病專家門診收治的HBV感染者，肝癌患者60例(HCC組)，肝硬化患者60例(LC組)，慢性乙型肝炎患者60例(CHB組)，慢性乙型肝炎病毒攜帶者60例(ASC組)，所有患者均未接受治療，排除其他疾病，其中男146例，女94例，年齡11～66歲，平均(45.38±12.72)歲，診斷符合2010年12月中華醫(yī)學會肝病學會和中華醫(yī)學會感染學會聯(lián)合制定的慢性乙型肝炎診治指南[3]中的診斷標準。健康對照組為同期門診健康體檢者40例，年齡23～58歲，平均(38.68±13.01)歲。所有操作程序均符合倫理委員會制定的倫理學標準，且所有研究對象均簽署知情同意書。

1.2檢測方法

1.2.1人血清細胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β檢測方法采用 ELISA法，試劑盒購自美國RD公司，嚴格按照說明書要求操作，使用科華ST-360酶標儀檢測。

1.2.2生化指標檢測方法谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)、總膽紅素(TBil)、血小板(PLT)均采用美國貝克曼(BECKMAN)AU-680全自動生化分析儀測定。

1.2.3HBV DNA 檢測方法采用美國ABI-7300熒光定量PCR分析儀進行基因擴增，試劑購自湖南圣湘生物科技有限公司。結果判斷：<102IU/mL為陰性，102～104IU/mL為低載量組，105～106IU/mL為中載量組，>107IU/mL為高載量組。

2結果

2.1慢性HBV感染者及健康對照組血清細胞因子水平檢測結果與健康對照組比較，慢性HBV感染者ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β水平均顯著升高，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05或P<0.01)，結果見表1。

2.2慢性HBV感染者及健康對照組血清肝功能檢測結果隨著病情的進一步發(fā)展，慢性HBV感染者肝功能炎癥損害加重。與健康對照組相比，ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血ALT、AST、TBIL水平均顯著升高，差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.01或P<0.05)，結果見表2。

表1　　慢性HBV感染者及健康對照組血清細胞因子

與健康對照組比較，a：P<0.05，b：P<0.01。

表2　　慢性HBV感染者及健康對照組血清肝功能

與健康對照組比較，a：P<0.05，b：P<0.01。

2.3CHB組不同HBV DNA載量細胞因子檢測結果探討CHB組不同HBV DNA載量患者外周血細胞因子水平，結果顯示CHB組HBV DNA(+)高載量患者IL-15、IL-16、IFN-γ和TGF-β水平最高，與HBV DNA(+)中載量患者相比，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)，結果見表3。

組別nHBVDNA(lgIU/mL)IL-15(ng/mL)IL-16(ng/mL)IFN-γ(ng/mL)TGF-β(ng/mL)HBVDNA(+)高157.61±0.39216.19±30.42119.43±16.48253.71±23.00386.06±23.42HBVDNA(+)中196.19±0.66165.14±14.3070.34±14.38158.17±17.84282.16±18.70HBVDNA(+)低263.41±0.82188.43±24.6897.60±11.61181.99±13.59343.78±22.55

3討論

人類一旦不幸感染了HBV后，能否徹底清除病毒，是否導致肝臟疾病慢性化，可能更大程度上依賴于個體針對乙肝病毒產(chǎn)生的免疫水平[4]。細胞因子作為宿主對炎癥反應產(chǎn)生的重要免疫調節(jié)介質，在宿主清除HBV病毒的免疫應答的過程中發(fā)揮重要的作用。IL-15是1994年Grabstein等[5]在檢測猿腎上皮細胞系CV-1/EBNA培養(yǎng)上清液時發(fā)現(xiàn)的一種細胞因子。IL-16在炎癥和腫瘤發(fā)生、自身免疫疾病、免疫治療方面起著重要的作用。Th1細胞和自然殺傷細胞在免疫應答過程中可以產(chǎn)生細胞因子IFN-γ，它是具有高度生物活性的一種細胞因子，抑制Th2細胞增殖分化，以往的研究已證實它具有抗腫瘤、抗病毒和免疫調節(jié)三大功能。TGF-β[6]主要由肝星狀細胞(hepatic stellate cell，HSC)和枯否細胞(kupper cell，KC)產(chǎn)生，其除具有抑制肝細胞增殖、激活HSC、誘導肝細胞凋亡，促進其產(chǎn)生細胞外基質并抑制細胞外基質降解的作用，主要與肝纖維化有關。

本研究對240例慢性HBV感染者進行分組研究，結果發(fā)現(xiàn)，與健康對照組比較，慢性HBV感染者ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β均水平顯著升高；隨著病情的不斷發(fā)展，細胞因子水平不斷升高且在LC組中細胞因子水平最高，說明IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β 水平的高低在一定程度上能夠反映肝細胞損害的嚴重程度，其參與了肝臟炎性損傷過程，與肝炎病情輕重密切相關。提示IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β參與了乙肝、肝硬化、肝癌等肝病的發(fā)病過程。

ALT、AST和TBIL是目前臨床上反映肝細胞功能的最常用指標之一，ALT測定反映肝細胞損傷的靈敏度較高[7]。本研究中，慢性HBV感染者ASC組、CHB組、LC組和HCC組外周血ALT、AST、TBIL隨著病情的不斷加重均顯著升高；說明隨著肝功能損害程度加重，機體內(nèi)的細胞因子變化程度顯著，細胞免疫明顯增強。

唐先梅等[8]研究發(fā)現(xiàn)HBV感染者血清IL-15和IL-16水平明顯高于健康對照組，HBV高載量組感染者血清IL-15和IL-16水平明顯高于健康對照組和低載量組。本研究結果顯示，在CHB組隨著IL-15和IL-16水平的增高，HBV DNA載量也逐漸增高，在HBV DNA高載量組達最大值。這一研究結果提示血清IL-15和IL-16水平變化與乙肝病毒的復制水平有關，可能參與了機體清除HBV的過程，這和HBV持續(xù)存在和復制水平有關。相反，在HBV攜帶者(ASC)組HBV DNA低載量組血清IL-15和IL-16水平達最大值。隨著血清IL-15和IL-16水平的增高，HBV DNA載量逐漸降低，提示IL-15和IL-16與HBV的清除有關，它可激活肝細胞自身抗病毒機制，抑制HBV DNA復制[9]。HBV DNA高載量組患者血清IFN-γ和TGF-β水平均高于中載量組和低載量組。我們的研究結果顯示隨著IFN-γ水平的增高，HBV DNA載量逐漸升高，提示IFN-γ與HBV的清除有關，它可激活肝細胞自身抗病毒機制，抑制HBV DNA復制。同時HBV DNA的持續(xù)存在，導致肝實質細胞受損，TGF-β的表達被啟動且表達增加。

綜上所述，慢性HBV感染是一個由多種免疫細胞和細胞因子參與的復雜過程，各種免疫細胞和細胞因子間相互影響、調節(jié)和制約[10]。本研究結果表明，在慢性乙型肝炎的發(fā)生和發(fā)展過程中細胞因子IL-15、IL-16、IFN-γ、TGF-β水平可能起重要作用，聯(lián)合檢測這4種細胞因子可作為評估慢性乙型肝炎病情嚴重程度的重要指標，并有望成為慢性肝病治療的新靶點。

參考文獻

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Expression of peripheral blood IL-15,IL-16,IFN-γ and TGF-β cytokines

in patients with hepatitis B virus infection and its clinical significance*

LiCaidong1,LinJing2,ChenXilian1,YangYongwei1,JinKejian1,WuBin1

(1.LiverDiseasesResearchInstitute,LanzhouMunicipalSecondPeople′sHospital,Lanzhou,Gansu730046,China;

2.GansuProvincialResearchInstituteofMedicalInformation,Lanzhou,Gansu730050,China)

Abstract:ObjectiveTo investigate the expression levels of peripheral blood cytokines(IL-15,IL-16,IFN-γ and TGF-β) in the patients with hepatitis B virus(HBV group) infections and its clinical significance.Methods60 cases of hepatocellular cancer(HCC),60 cases of liver cirrhosis(LC group),60 cases of chronic hepatitis B(CHB group),60 hepatitis B virus carriers(ASC group and 40 healthy control individuals (control group) were selected.The expression levels of cytokines were detected by using the enzyme linked immunosorbent assay(ELISA) and HBV DNA loads were measured by using real time fluorescence quantitative polymerase chain reaction.Meanwhile,the biochemical indexes were detected.ResultsWith the disease aggravation,the expression levels of cytokines IL-15,IL-16,IFN-γ and TGF-β showed a gradually increasing trend,and reached a maximum value in the patients with liver cirrhosis.In the comparison with the healthy control group,the expression level of cytokines were significant increased in different clinical types of HBV infections,the differences were statistically significant(P<0.05 or P<0.01).The expression levels of IL-15,IL-16,IFN-γ and TGF-β were highest in the high HBV DNA loads group among the patients with CHB,the difference was statistically significant (P<0.05).ConclusionIL-15,IL-16,IFN-γ and TGF-β might be involved in the liver inflammatory injury process in hepatitis B,moreover their expression levels have certain correlation with the viral quantity.

Key words:hepatitis B;cytokines;IL-15；IL-16；IFN-γ；TGF-β;clinical significance

(收稿日期：2015-08-10)

DOI:10.3969/j.issn.1673-4130.2016.01.002

文獻標識碼：A

文章編號：1673-4130(2016)01-0003-03

*基金項目：蘭州市城關區(qū)科技計劃項目(2014-4-1)。

作者簡介：李彩東，女，主任藥師，主要從事慢性乙肝的發(fā)病機制研究及治療研究。