丁麗艷，何寶國(guó)，宋 斌，李同豹，郭立宏，董正德，丁昕穎，李 平

(1.黑龍江省畜牧研究所，黑龍江 齊齊哈爾 160005；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 160000)

?

提高肉羊胚胎移植妊娠率的綜合措施

丁麗艷1，何寶國(guó)2，宋 斌1，李同豹1，郭立宏1，董正德1，丁昕穎1，李 平1

(1.黑龍江省畜牧研究所，黑龍江 齊齊哈爾 160005；2.齊齊哈爾醫(yī)學(xué)院，黑龍江 齊齊哈爾 160000)

肉羊胚胎移植技術(shù)操作環(huán)節(jié)復(fù)雜，各個(gè)環(huán)節(jié)密切相連，其中一個(gè)環(huán)節(jié)失敗，結(jié)果都會(huì)前功盡棄，所以影響肉羊胚胎移植妊娠率的因素較多，本文主要從胚胎、受體、技術(shù)、環(huán)境等幾方面因素探討提高肉羊胚胎移植妊娠率的措施，充分發(fā)揮肉羊胚胎移植技術(shù)的育種價(jià)值，以獲得更大的經(jīng)濟(jì)效益。

肉羊；供體；受體；胚胎移植；妊娠率

羊的胚胎移植技術(shù)是通過采用外源激素對(duì)優(yōu)秀供體母羊進(jìn)行超排處理，在胚胎發(fā)育早期從子宮內(nèi)將胚胎取出，在體外處理后，再移植到另一只同種的經(jīng)過同期化的受體羊內(nèi)，使其在受體內(nèi)發(fā)育成新個(gè)體，直至分娩[1]。羊胚胎移植可極大地提高優(yōu)秀供體母羊的利用率，是羊的純種繁育、快速擴(kuò)繁及提高優(yōu)質(zhì)種羊繁殖率的重要措施之一，同時(shí)可使種羊?qū)崿F(xiàn)批量同期生產(chǎn)，便于飼養(yǎng)管理，提高成活率，降低生產(chǎn)成本。羊的胚胎移植過程是系統(tǒng)的復(fù)雜的生物工程，任何一個(gè)環(huán)節(jié)因素都直接影響胚胎移植效果，現(xiàn)主要從以下幾方面來探討提高羊的胚胎移植妊娠率。

1 胚胎因素

1.1 供體的選擇

提供胚胎的母畜稱為供體，選擇合適的供體肉羊是移植成功與否的前提和基礎(chǔ)。選擇經(jīng)濟(jì)價(jià)值和育種價(jià)值較高，健康無(wú)病，生殖機(jī)能正常，結(jié)構(gòu)較好，體型外貌符合品種要求，遺傳性能穩(wěn)定，年齡在2～5歲的優(yōu)質(zhì)肉羊。

1.2 供體羊的發(fā)情鑒定及人工授精

供體超數(shù)排卵后，用試情公羊進(jìn)行試情，試情時(shí)間不少于30min。如果供體羊鳴叫、精神不安、食欲減退、陰道流出大量黏液、主動(dòng)接受試情羊的爬跨或爬跨試情羊并追隨公羊者為發(fā)情。

精液要求來源于同品種公羊，公羊譜系健全，遺傳性能穩(wěn)定，生產(chǎn)性能優(yōu)良，精液品質(zhì)良好。

確認(rèn)發(fā)情后，即進(jìn)行第一次輸精，之后每隔12h輸精1次，共輸精3～4次直至供體不再表現(xiàn)發(fā)情為止。

公羊精子在母羊體內(nèi)保持活力的持續(xù)時(shí)間為24～48h，而卵子排出后，保持有受精能力的持續(xù)時(shí)間為12～16h，所以做到適時(shí)發(fā)情、適時(shí)輸精是非常關(guān)鍵的。否則會(huì)造成難以受精或即使受精也會(huì)出現(xiàn)早期胚胎退化等現(xiàn)象，因而影響胚胎的質(zhì)量。

1.3 胚胎采集

手術(shù)沖胚時(shí)，術(shù)者手臂及手術(shù)部位周圍羊毛要刮凈，皮膚要消毒，與胚胎接觸的一切器具、沖卵液等都要進(jìn)行消毒滅菌處理，防止污染胚胎，盡量做到無(wú)菌操作；沖卵液要事先預(yù)熱，防止對(duì)胚胎形成冷應(yīng)激。

1.4 胚胎的保存

鮮胚移植時(shí)，胚胎在體外保存時(shí)間最好不要超過2h，以降低外環(huán)境的不良影響，提高移植受胎率。如果確有其他因素影響，不能及時(shí)移植，胚胎需要保存較長(zhǎng)時(shí)間，應(yīng)每隔2h換1次胚胎保存液，保存溫度不宜太高，要緩慢降溫至20～25℃保存[2]。

2 受體因素

2.1 受體的選擇

接受胚胎的母畜稱為受體，受體羊是胚胎移植成功的基礎(chǔ)。選擇適應(yīng)性強(qiáng)，體型較大，泌乳能力強(qiáng)，膘情中等，體質(zhì)強(qiáng)健，繁殖率高，無(wú)生殖道疾病，可繁殖的2～4歲的經(jīng)產(chǎn)母羊，老齡羊及單胎品種羊處理效果較差，一般可選擇經(jīng)產(chǎn)的小尾寒羊作為受體。

2.2 供、受體的同期化程度

供、受體羊的同期發(fā)情水平是影響移植妊娠率的關(guān)鍵因素。在胚胎移植中，供體母羊和受體母羊兩者生殖系統(tǒng)處于相同的生理狀態(tài)，胚胎才能在受體母羊內(nèi)繼續(xù)發(fā)育生長(zhǎng)，這就需要供體和受體發(fā)情時(shí)間吻合，二者子宮環(huán)境一致。供體和受體的同步發(fā)情差越小，受胎率越高，一般選擇供體與受體同步發(fā)情差在±12h以內(nèi)，移植妊娠率較高[3]。

2.3 受體的飼養(yǎng)管理

受體羊手術(shù)前2個(gè)月應(yīng)進(jìn)行強(qiáng)化飼養(yǎng)。在胚胎移植的前期和后期，要保持均衡的營(yíng)養(yǎng)水平和良好的體況，防止過肥或過瘦，蛋白質(zhì)飼料、能量飼料、礦物質(zhì)飼料、維生素等要合理搭配，不要隨意變換，避免長(zhǎng)途運(yùn)輸、意外驚嚇、變換環(huán)境，防止出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)。防止飼喂腐敗變質(zhì)的飼草飼料，還要注意防疫和驅(qū)蟲。在受體進(jìn)行同期發(fā)情處理前，要完成所有疫苗接種和驅(qū)蟲工作。在胚胎移植期間，不要隨意使用抗寄生蟲類藥物和疫苗等，避免一些藥物對(duì)胚胎形成和發(fā)育造成影響。

對(duì)術(shù)后羊只進(jìn)行精心管理，除了注射必要的抗感染藥物外，還應(yīng)隨時(shí)觀察羊的采食、排泄情況，必要時(shí)，還要測(cè)量體溫、檢查傷口。發(fā)現(xiàn)感染，立即采取措施。受體羊隨著胎兒的發(fā)育，對(duì)營(yíng)養(yǎng)的需求量增加，尤其是懷孕后期，不僅要供給足夠的營(yíng)養(yǎng)豐富的精、粗飼料，還要注意礦物元素和維生素A、維生素D、維生素E的供給，特別是胡蘿卜的補(bǔ)充，圈舍保持清潔、干燥，飼養(yǎng)密度不宜太大，避免引起流產(chǎn)。

3 技術(shù)因素

胚胎移植操作技術(shù)人員必須既要有胚胎移植的理論知識(shí)，又要有較為熟練的外科手術(shù)經(jīng)驗(yàn)，操作規(guī)范、移植位置適宜、動(dòng)作迅速、胚胎體外停留時(shí)間短，受胎率高。實(shí)踐證明，通過子宮角采集的6～7日齡的胚胎，要比通過輸卵管采集的3日齡以內(nèi)的胚胎受胎率高，且供體羊不易發(fā)生黏連，胚胎移植效果較好。

4 環(huán)境因素

4.1 無(wú)菌操作

手術(shù)前要對(duì)所有接觸胚胎的手術(shù)器械、液體、培養(yǎng)皿等進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理。實(shí)驗(yàn)室要徹底清潔并用紫外線燈照射消毒。手術(shù)人員術(shù)前進(jìn)行手臂消毒并穿戴無(wú)菌工作衣、帽、口罩和手套。

4.2 移植季節(jié)

羊的發(fā)情周期受光照和溫度影響，具有季節(jié)性。在繁殖季節(jié)，母羊的卵巢處于活動(dòng)狀態(tài)，卵泡發(fā)育才能成熟，表現(xiàn)正常發(fā)情；在非繁殖季節(jié)母，羊的卵巢機(jī)能活動(dòng)處于靜止?fàn)顟B(tài)，不表現(xiàn)發(fā)情和排卵[2]。因此，胚胎移植的適宜季節(jié)應(yīng)依據(jù)當(dāng)?shù)氐臍夂蜃兓?、羊的發(fā)情狀況來選擇，胚胎移植應(yīng)在羊的發(fā)情季節(jié)來進(jìn)行。當(dāng)外界溫度超過30℃時(shí)，母羊繁殖的一系列過程都會(huì)受到影響，最后會(huì)導(dǎo)致胚胎移植失敗。所以胚胎移植最好避開高溫季節(jié)，集中在羊的繁殖季節(jié)進(jìn)行，實(shí)踐證明，溫度適宜的秋季受體胚胎移植效果最佳，其次是春季，冬季和夏季不宜實(shí)施胚胎移植手術(shù)。

4.3 移植溫度

移植手術(shù)室和檢胚操作室的溫差要盡可能縮小，檢胚操作室的溫度應(yīng)控制在20～25℃[4]。避免溫差大影響胚胎質(zhì)量，從而影響移植妊娠率。

5 小結(jié)

胚胎移植技術(shù)作為良種肉羊快速繁育的重要手段，在生產(chǎn)實(shí)踐中得到了一定的推廣應(yīng)用，但還沒有完全達(dá)到產(chǎn)業(yè)化階段，這是因?yàn)榕咛ヒ浦膊僮鳝h(huán)節(jié)復(fù)雜，影響妊娠率的因素比較多，妊娠率還較低，相信隨著人們對(duì)這些因素的不斷研究和一一解決，胚胎移植技術(shù)一定能在羊的育種中發(fā)揮更大的作用。

[1] 李延春.羊胚胎移植實(shí)用技術(shù)[M].北京：金盾出版社，2014.

[2] 胡月超，辛英霞，楊玉英，等.羊胚胎移植技術(shù)要點(diǎn)[J].新農(nóng)業(yè)，2010(6)：13-14.

[3] 谷振慧，王志剛，張英杰，等.羊胚胎移植影響因素的研究進(jìn)展[C]. 2014年全國(guó)養(yǎng)羊生產(chǎn)與學(xué)術(shù)研討會(huì)議論文集.山東：68-69.

[4] 孫尚信，黃玉琴.環(huán)境因素對(duì)羊胚胎移植妊娠率的影響[J].中國(guó)畜牧獸醫(yī)，2008，35(5)：149-152.

2016-09-05

丁麗艷(1971-)，女，黑龍江綏化人，研究生，研究員，研究方向?yàn)閯?dòng)物繁殖、分子生物育種。

10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.11.045

S826.3+6

B

2095-9737(2016)11-0051-02