代興斌，黃燕，孫雪梅

1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029

中藥治療淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)展

代興斌1，黃燕2，孫雪梅1

1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，江蘇 南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué)，江蘇 南京 210029

淋巴瘤；中藥材；蟾酥；砒霜；實(shí)驗(yàn)研究

近40年來，中草藥治療淋巴瘤做了大量的研究，取得了一定的成績。通過綜述近年中藥治療淋巴瘤的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究文獻(xiàn)，筆者發(fā)現(xiàn)夏枯草、黃芩、蟾酥、雷公藤、砒霜、金花茶、郁金/姜黃、牡丹皮、通關(guān)藤、附子、青蒿等單味中藥或中藥單體及中藥復(fù)方等在體外實(shí)驗(yàn)中均顯示出抗淋巴瘤作用。上述中藥抗淋巴瘤的主要機(jī)制在于細(xì)胞毒性、免疫調(diào)節(jié)、抗血管新生、去甲基化等，體現(xiàn)了中藥抗淋巴瘤的多途徑、多靶點(diǎn)優(yōu)勢(shì)。努力發(fā)掘中藥寶庫，研發(fā)天然抗淋巴瘤藥物，漸成為淋巴瘤治療領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)，具有廣闊的前景。傳統(tǒng)化療藥物存在療效不確切、毒副反應(yīng)大、價(jià)格昂貴等問題，隨著一批療效確切、不良反應(yīng)小的天然抗癌藥物的應(yīng)用，探索新型天然抗腫瘤藥物是目前腫瘤研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)。筆者將文獻(xiàn)報(bào)道的中醫(yī)藥抗淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究進(jìn)行回顧分析，重點(diǎn)總結(jié)藥物的種類、作用效應(yīng)及相關(guān)機(jī)制。

1 夏枯草

夏枯草具有清火明目、軟堅(jiān)散結(jié)等作用，因其含有三萜類、甾體類、黃酮類、香豆素類多種活性成分，顯示出明確的抗腫瘤活性[1～2]。不同濃度的夏枯草提取物作用于人B細(xì)胞淋巴瘤Raji細(xì)胞、T淋巴瘤Jurkat細(xì)胞48 h后均顯示出增殖抑制作用(MTT法)，二者的IC50分別為(18.01±0.92)μg/mL、(25.47±0.92)μg/mL；流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，夏枯草提取物在15、20和25 μg/mL濃度時(shí)對(duì)Raji、Jurkat細(xì)胞產(chǎn)生的早期凋亡率分別是(9.44±0.25)%、(21.68±0.46)%、(35.03± 0.35)%和(4.06±0.14)%、(13.59±0.23)%和(22.92±0.20)%，在同一濃度條件下，前者早期凋亡率高于后者(P＜0.01)；瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果顯示，隨著藥物濃度的提高，實(shí)驗(yàn)組細(xì)胞中Bcl-2蛋白的表達(dá)逐漸減弱，Bax蛋白的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，與空白對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；在相同濃度下，Raji細(xì)胞內(nèi)Bcl-2蛋白的下降水平和Bax蛋白的升高程度均高于Jurkat細(xì)胞，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。提示夏枯草提取物對(duì)淋巴瘤細(xì)胞具有抑制增殖、誘導(dǎo)凋亡的作用，對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤的療效可能優(yōu)于T細(xì)胞淋巴瘤，其機(jī)制可能與調(diào)節(jié)Bcl-2和Bax蛋白的表達(dá)有關(guān)[3]。有學(xué)者[4]研究了夏枯草經(jīng)水煎醇沉法制成的夏枯草注射液對(duì)Raji細(xì)胞增殖的影響和機(jī)制，該藥對(duì)Raji細(xì)胞的增殖具有明顯的抑制作用且呈劑量依賴性，IC50為0.118 mg/mL；形態(tài)學(xué)觀察進(jìn)一步證實(shí)了該藥可誘導(dǎo)Raji細(xì)胞的凋亡；免疫細(xì)胞化學(xué)研究顯示，藥物在50 mg/mL濃度作用48 h后，Raji細(xì)胞的Bcl-2蛋白表達(dá)水平升高，Bax蛋白的表達(dá)水平減弱，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。

2 黃芩

黃芩味苦，性寒，能清熱燥濕、瀉火解毒、止血，主要含黃酮類化合物，如黃芩素、黃芩黃酮Ⅱ和黃芩甙等。Takashi等[5]將黃芩粉末溶于二甲基亞砜(Dimethyl sulfoxide或DMSO)后用于包括淋巴瘤細(xì)胞(Daudi，Raji，Ramos，NCEB1)、白血病細(xì)胞和骨髓瘤細(xì)胞等12種惡性血液病細(xì)胞株，體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，該藥對(duì)包括急性淋巴細(xì)胞白血病、淋巴瘤、骨髓瘤在內(nèi)的多種淋巴系統(tǒng)惡性腫瘤具有較高的敏感性，對(duì)3種代表性細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度分別為：Nalm-6，12.3 μg/mL；Daudi，4.57 μg/mL；NCI-H929，5.01μg/mL。在50 μg/mL的濃度下作用72 h后進(jìn)行細(xì)胞周期分析，結(jié)果各細(xì)胞的S期細(xì)胞比例明顯減少，而處于sub-G1期的細(xì)胞數(shù)目明顯增加。在同樣濃度下作用48 h，Nalm-6、Daudi和NCI-H929三種細(xì)胞的早期凋亡率分別為13%、14%和10%，死亡率分別為3%、8%和28%。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，該藥的作用機(jī)制在于：破壞腫瘤細(xì)胞的線粒體，對(duì)Bcl基因家族的調(diào)節(jié)，提高CDK抑制因子p27的水平，降低原癌基因c-myc的水平。同時(shí)質(zhì)譜分析表明，黃芩含有21%的黃芩苷，黃芩苷是黃芩抗腫瘤作用的主要活性成分。為提高黃芩的利用度，Wang等[6]研制了漢黃芩素磁性納米顆粒，并對(duì)其抗淋巴瘤效果進(jìn)行了研究，結(jié)果表明，該藥物能夠抑制細(xì)胞增殖，阻滯細(xì)胞周期，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。進(jìn)一步的機(jī)制研究發(fā)現(xiàn)，該藥物顯著上調(diào)Caspase-3和Caspase-8的表達(dá)，survivin和cyclin-E的表達(dá)明顯降低。

3 蟾酥

蟾酥是中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍的耳后腺、皮膚腺所分泌的白色漿液的干燥品，吲哚堿衍生物為其主要有效成分。其水溶性提取物(蟾酥注射液)作用于淋巴瘤U937細(xì)胞24 h后可產(chǎn)生增殖抑制作用，光鏡和電鏡觀察可出現(xiàn)核著邊、核碎片和凋亡小體，瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)進(jìn)一步驗(yàn)證了該藥的誘導(dǎo)凋亡效果[7]。

4 雷公藤

雷公藤為衛(wèi)矛科植物雷公藤的根、葉、花，其性溫涼，味辛苦，具有清熱解毒、舒筋活血、祛風(fēng)通絡(luò)、消腫止痛的作用。雷公藤內(nèi)酯醇是其重要活性成分，其作用于Raji細(xì)胞24、48和72 h后可產(chǎn)生11.02%～81.05%的抑制率，這種效應(yīng)呈時(shí)間和劑量依賴性；同時(shí)，可將細(xì)胞阻滯于G0/G1期；形態(tài)學(xué)觀察可見胞體固縮、核碎裂及凋亡小體等細(xì)胞凋亡的特征[8]。雷公藤的作用機(jī)制比較復(fù)雜，藥理研究表明[9]，該藥可通過上調(diào)環(huán)氧化酶(Cyclooxygenase，COX)(前列腺素內(nèi)氧化酶還原酶)-2的表達(dá)而抑制 U937細(xì)胞前列腺素(prostaglandins，PGs)-2的合成，從而作用于機(jī)體的炎癥、腫瘤等病理狀態(tài)。

5 砒霜

砒霜是以毒攻毒中藥的代表藥物，其性熱，味辛酸，有毒，主要有效成分是三氧化二砷(As2O3)。其抑制白血病細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞分化、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的作用已獲得國際認(rèn)可。為探討As2O3對(duì)淋巴瘤血管新生的影響，鐘璐等[10]應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈技術(shù)和酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)了藥物作用前后Raji、Jurkat細(xì)胞內(nèi)VEGF基因和蛋白的表達(dá)，As2O3作用24、48和72 h后兩種細(xì)胞VEGF和VEGF mRNA的表達(dá)量均較給藥前明顯減少(P＜0.01)，且這種效應(yīng)與藥物作用的時(shí)間明顯相關(guān)。據(jù)此可推測(cè)，As2O3可通過阻斷淋巴瘤細(xì)胞生長所需的血管條件而發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖的作用。

還有學(xué)者以高度甲基化的淋巴瘤細(xì)胞株CA46作為研究基因甲基化和表達(dá)關(guān)系的實(shí)驗(yàn)對(duì)象，開展了As2O3逆轉(zhuǎn)該細(xì)胞p16基因甲基化狀態(tài)和調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄作用的實(shí)驗(yàn)研究[11]，結(jié)果顯示，不同濃度的As2O3均能明顯抑制CA46細(xì)胞的生長，明顯增加G0/G1期細(xì)胞的比例；與對(duì)照組相比，藥物作用72 h后p16基因的甲基化程度明顯減弱，可逆轉(zhuǎn)異常的甲基化現(xiàn)象，同時(shí)甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3A、DNMT3B的表達(dá)明顯下降，且呈濃度依賴性，DNMT1的表達(dá)未出現(xiàn)改變。因此，As2O3具有細(xì)胞周期調(diào)控和抑制腫瘤細(xì)胞增殖的作用，主要機(jī)制在于抑制甲基轉(zhuǎn)移酶DNMT3A和DNMT3B的表達(dá)，使p16基因去甲基化，恢復(fù)其活性。

6 金花茶

金花茶為中國廣西地區(qū)常用草藥，具有清熱解毒、利尿消腫等功效。Peng等[12]從其中提取了一種新的酰化黃酮糖苷類化合物，并進(jìn)一步驗(yàn)證了該化合物抗淋巴瘤的藥理作用，在不同濃度下(10，25，50，100，200，400μM)作用24 h后可對(duì)U937細(xì)胞產(chǎn)生不同程度的增殖抑制作用，IC50為140.1μM，流式細(xì)胞儀檢測(cè)發(fā)現(xiàn)該化合物可增加U937細(xì)胞的早期死亡率，這種效應(yīng)與其提高細(xì)胞內(nèi)Casepase-3的活性有關(guān)。

7 郁金/姜黃

二者為同一植物的不同藥用部位，均可活血散瘀和行氣止痛，前者為姜科植物姜黃的塊根，后者為其干燥根莖；前者性味辛苦寒，行氣力強(qiáng)，且涼血，后者性味辛苦溫，祛瘀力勝。二者均含有姜黃酮、姜黃素等多種抗腫瘤成分。欖香稀屬我國開發(fā)研制的Ⅱ類非細(xì)胞毒性抗腫瘤藥物，其本質(zhì)是從溫郁金中提取的抗癌有效成分，已廣泛用于腫瘤的臨床治療。實(shí)驗(yàn)研究表明，不同濃度的欖香稀(15～40μg/mL)對(duì)B細(xì)胞淋巴瘤Raji細(xì)胞不僅具有生長抑制作用，而且具有誘導(dǎo)凋亡作用，均呈量效和時(shí)效關(guān)系；細(xì)胞周期分析顯示，S期和G2/M期細(xì)胞的比例明顯減少，而G0/G1期細(xì)胞的比例明顯升高；體內(nèi)研究證實(shí)，給予皮下荷瘤的SCID小鼠連續(xù)14天腹腔注射欖香烯(125 mg/kg)，能產(chǎn)生明顯抑瘤效果(腫瘤抑制率達(dá)75.36%)，且具有良好的耐受性。尚有研究表明[13]，3.125～50μM的姜黃素作用24 h可顯著抑制Raji細(xì)胞增殖(抑制率17.3%～88.48%)，促進(jìn)Raji細(xì)胞的凋亡，與濃度、作用時(shí)間呈正相關(guān)，而相同濃度的姜黃素對(duì)外周血單個(gè)核細(xì)胞(PBMNC)無顯著抑制作用，提示姜黃素具有選擇性細(xì)胞毒性。Western blot法定量測(cè)定姜黃素25μM作用24 h后Raji細(xì)胞Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)，結(jié)果顯示，給藥組細(xì)胞Caspase-8和Caspase-9的表達(dá)高于對(duì)照組；姜黃素通過增強(qiáng)細(xì)胞死亡受體Fas的表達(dá)，激活Caspase-8，進(jìn)而啟動(dòng)Caspase級(jí)聯(lián)反應(yīng)，激活線粒體下游Caspase-9效應(yīng)酶，最終誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。

8 牡丹皮

牡丹皮為著名清熱涼血、活血祛瘀中藥，含有牡丹酚、芍藥苷等多種成分，近年來發(fā)現(xiàn)的新成份沒食子酸具有抗腫瘤、抗炎、抗氧化、抑菌和保護(hù)心腦血管等多種藥理作用。韓國的一項(xiàng)關(guān)于沒食子酸免疫調(diào)節(jié)作用的研究發(fā)現(xiàn)[14]，沒食子酸能夠解除調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)對(duì)CD4+T細(xì)胞效應(yīng)因子的抑制作用，能夠抑制Treg向腫瘤組織的趨化和遷移；經(jīng)沒食子酸處理后，Treg表面分子標(biāo)記(CTLA-4、CCR4、CXCR4和TNFR)和Foxp3的表達(dá)均明顯減少，說明沒食子酸可以通過下調(diào)Treg轉(zhuǎn)錄因子Foxp3發(fā)揮對(duì)Treg的抑制效應(yīng)；研究者進(jìn)一步將其用于鼠源性T細(xì)胞淋巴瘤(EL4)的體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該藥能夠明顯抑制小鼠淋巴瘤的生長，并延長小鼠的生存時(shí)間，但在Treg缺失的荷瘤小鼠的體內(nèi)沒有取得這種反應(yīng)，由此說明沒食子酸的抑瘤效應(yīng)與其對(duì)CD4+CD25+Treg的調(diào)節(jié)作用；沒食子酸能夠顯著降低荷瘤小鼠脾臟內(nèi)CD4+CD25+Foxp3 Treg的數(shù)量，尤其是明顯減少腫瘤浸潤C(jī)D25+Foxp3 Treg的數(shù)量。上述結(jié)果表明，該藥能夠用于逆轉(zhuǎn)免疫抑制，可以輔助腫瘤免疫治療以提高綜合治療的療效。

9 其他單味中藥

如通關(guān)藤[15]、附子[16]、青蒿[17]等在體外實(shí)驗(yàn)中均顯示出抗淋巴瘤的作用。

10 中藥復(fù)方

透膿散源于明·陳實(shí)功的《外科正宗》，由黃芪、穿山甲(炒末)、川芎、當(dāng)歸、皂角針等組成，具有補(bǔ)益氣血、托毒透膿的功效，為托毒潰膿之名方。實(shí)驗(yàn)研究表明[18]，該方可以抑制Raji細(xì)胞的增殖，這種抑制效應(yīng)呈時(shí)間和濃度依賴性；在125、250和500 μg/mL的濃度下作用48 h可導(dǎo)致(12.23± 1.98)%、(20.97±3.96)%和(30.4±4.87)%的凋亡率，與對(duì)照組(6.02±1.01)%比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。分子機(jī)制研究提示，在250 μg/mL的濃度下作用48 h即可以提高Raji細(xì)胞內(nèi)NF-κB基因和蛋白的水平，而降低細(xì)胞內(nèi)Bad，Caspase-9和Caspase-3 mRNA與蛋白表達(dá)。遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院的院內(nèi)制劑千金遂水丸對(duì)人胃惡性淋巴瘤，小腸淋巴瘤、結(jié)腸惡性淋巴瘤裸鼠原位移植模型均具有抑制作用[19]。

以上可以看出，中醫(yī)藥對(duì)淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究逐步深入，研究者多選擇具有清熱解毒、活血化瘀及補(bǔ)益正氣等功效的中藥進(jìn)行抗淋巴瘤的實(shí)驗(yàn)研究，其中相關(guān)藥物的單體或有效成分的研究占主要地位。值得注意的是，中藥復(fù)方的研究不僅顯示出確切療效，而且相關(guān)的分子作用機(jī)理也逐漸清晰，這對(duì)傳統(tǒng)中醫(yī)藥的發(fā)展具有更重要的意義。同時(shí)，研究的角度除了中藥的細(xì)胞毒作用以外，還有免疫調(diào)節(jié)、抗血管新生、去甲基化等，也證實(shí)了中醫(yī)藥多途徑、多靶點(diǎn)的作用模式和優(yōu)勢(shì)。當(dāng)然，大部分中藥對(duì)淋巴瘤起作用的有效成分或有效部位尚不明確，具體的分子作用機(jī)制也需要深入的研究闡明。

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（責(zé)任編輯：劉淑婷）

R286

A

0256-7415（2016）06-0252-04

10.13457/j.cnki.jncm.2016.06.112

2016-01-20

代興斌（1981-），男，博士，主治醫(yī)師，研究方向：血液系統(tǒng)疾病。