劉振宇,徐佳璐

(哈爾濱國(guó)家糧油質(zhì)量檢測(cè)中心，黑龍江 哈爾濱 150070 )

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玉米醇溶蛋白檢測(cè)方法研究

劉振宇,徐佳璐

(哈爾濱國(guó)家糧油質(zhì)量檢測(cè)中心，黑龍江 哈爾濱 150070 )

摘要：玉米是我國(guó)北方主要的飼用糧品種之一，而玉米醇溶蛋白存在于玉米的胚乳中，是玉米蛋白中的主要成分之一，然而這種蛋白不能夠被動(dòng)物吸收和利用，含量過高反而會(huì)使得家畜對(duì)其他營(yíng)養(yǎng)成分的消化和吸收能力下降，現(xiàn)通過回收率試驗(yàn)等研究比濁法對(duì)于醇溶蛋白的檢驗(yàn)效果，為尋找出最佳的實(shí)驗(yàn)方法提供了依據(jù)。

關(guān)鍵詞：玉米；醇溶蛋白；萃取

1方法原理

將樣品粉碎至所需細(xì)度后，經(jīng)過脫脂，用有機(jī)溶劑萃取，之后測(cè)定其吸光度，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較的出醇溶蛋白含量。再通過回收率試驗(yàn)等，評(píng)價(jià)其檢驗(yàn)結(jié)果準(zhǔn)確性。

2儀器與材料

主要儀器設(shè)備：磁力加熱攪拌器；紫外可見分光光度計(jì)；渦旋混合器。perten3100錘式旋風(fēng)磨、數(shù)顯電熱恒溫干燥箱、JA-203N千分之一電子天平；可調(diào)速離心機(jī)、HY4調(diào)速多用振蕩器等。

試劑及配制：100%丙酮；玉米醇溶蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品；100%異丙醇；2-巰基乙醇；三氯乙酸(試驗(yàn)中所有未特殊說(shuō)明的試劑均為分析純)。含0.6%2-巰基乙醇55.0%異丙醇溶液配制：將2-巰基乙醇3mL及異丙醇275mL依次加入到500mL容量瓶中，用蒸餾水定容，充分混勻后靜置待用。三氯乙酸溶液(0.15mol/L)配制：將三氯乙酸12.5g加入到500mL容量瓶中，用蒸餾水定容，充分混勻后靜置待用。

樣品選擇：8個(gè)品種的玉米屬于馬齒型或半馬齒型，分別為：先玉335、龍丹48，樣品由哈爾濱市糧食研究所提供。玉米中的DM、CP含量測(cè)定依據(jù)《飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)》[1]。

3實(shí)驗(yàn)方法

樣品準(zhǔn)備：將除雜后的玉米樣品分別置于數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，在50℃下干燥24h。接著將干燥并冷卻后的樣品分別用錘式旋風(fēng)磨進(jìn)行粉碎，最后通過60目篩，通過率90%以上。將粉碎后的樣品再次置于數(shù)顯電熱鼓風(fēng)干燥箱內(nèi)，設(shè)定溫度為105℃，繼續(xù)干燥3h，冷卻備用。

脫脂：準(zhǔn)確稱取1.000g玉米樣品，移入150mL錐形瓶中，加入丙酮(分析純)20mL，在磁力攪拌器上進(jìn)行混勻1h。稱量干燥過的Φ12.5cm定量濾紙的質(zhì)量m1，記錄數(shù)據(jù)(精確至0.001g)，將已知質(zhì)量的濾紙折疊后置于布氏漏斗上對(duì)丙酮與玉米粉混合物進(jìn)行過濾，用少量丙酮反復(fù)沖洗3～4次直至洗凈。將濾紙置于烘箱中于50℃下烘干24h。冷卻后稱重記錄濾紙及干物質(zhì)的質(zhì)量m2，精確到0.001g。計(jì)算脫脂后干物質(zhì)的質(zhì)量(m0)：m0=m2-m1。

提?。河梅治鎏炱椒謩e準(zhǔn)確稱取0.200g脫脂后樣品。置于50mL離心管中，向其中加入配置好的醇溶液各20mL，置于磁力攪拌器上充分混勻后，置于離心機(jī)上離心15min，移取上層清液0.5mL，加入到配置好的三氯乙酸溶液5.5mL的10mL圓底玻璃試管內(nèi)，混勻，靜置30min進(jìn)行比色。

標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制：分別吸取0.5mL濃度為0μg/mL，0μg/L、0.05μg/L、0.25μg/L、0.35μg/L、0.45μg/L、0.65μg/L、0.75μg/L、0.85μg/L玉米醇溶蛋白標(biāo)準(zhǔn)溶液，配置好的三氯乙酸溶液5.5mL的10mL比色皿內(nèi)，旋渦混勻后靜置30min，在波長(zhǎng)為440nm處測(cè)定吸光度。以玉米醇溶蛋白的標(biāo)準(zhǔn)含量(μg/L)為縱坐標(biāo)，以吸光度數(shù)值為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：準(zhǔn)確移取醇溶蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品(0.650μg/L)和先玉335號(hào)樣品，測(cè)定吸光度，靜置20min、30min、40min、50min、60min后各測(cè)定一次吸光度。所測(cè)結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別為2.056%和2.133%，說(shuō)明該實(shí)驗(yàn)在1h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

回收試驗(yàn)：準(zhǔn)確稱取醇溶蛋白標(biāo)準(zhǔn)樣品，配制成濃度為1.00μg/L的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液。實(shí)驗(yàn)時(shí)將其梯度稀釋至0.1μg/mL，0.2μg/mL，0.3μg/ mL，0.4μg/mL，0.5μg/mL，0.6μg/mL，0.7μg/mL，0.8μg/mL，0.9μg/mL 以及1.0μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別測(cè)定其吸光度，將所有的結(jié)果進(jìn)行線性回歸計(jì)算，縱坐標(biāo)為峰面積，橫坐標(biāo)為濃度，計(jì)算出線性關(guān)系，同時(shí)得到相關(guān)系數(shù)[2]。

向做好前處理好的十份龍丹48樣品A～J中依次加入0.5mL十個(gè)梯度濃度的標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加水平從小到大依次為0.01～1μg/g。梯度為0.01μg/g。混勻后充分沉降30min，在同一條件下重復(fù)上述步驟進(jìn)行吸光度的檢測(cè)。最后選取濃度為0.5μg/L和1.0μg/L的標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)，進(jìn)行六次重復(fù)操作，計(jì)算分析方法的實(shí)用性。

經(jīng)過計(jì)算所得，玉米醇溶蛋白的回歸線性方程為：Y=12683.12x-126.38，其線性范圍為0.0325～0.96μg/L，線性相關(guān)系數(shù)為0.9984，能夠滿足定量檢測(cè)的要求。

而十組不同添加水平的玉米醇溶蛋白加標(biāo)回收率及相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差分別是：樣品A回收率是82.44%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是2.26%；樣品B回收率是89.32%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是3.36%；樣品C回收率是91.29%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是4.22%；樣品D回收率是88.45%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是2.93%；樣品E回收率是87.16%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是3.13%；樣品F回收率是89.96%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是8.73%；樣品G回收率是90.58%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是6.24%；樣品H回收率是80.55%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是6.17%；樣品I回收率是92.43%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是2.32%；樣品J回收率是81.64%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是5.12%。

經(jīng)計(jì)算，十次梯度添加玉米醇溶蛋白標(biāo)樣的實(shí)驗(yàn)回收率為80.55%～92.43%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為2.26%～8.73%，由此可以判定，該方法的精密度和準(zhǔn)確性符合分析要求。

參考文獻(xiàn)：

[1] 楊勝.飼料分析及飼料質(zhì)量檢測(cè)技術(shù)[M].北京:農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社,1993.

[2] L.F. Ferraretto,R.D. Shaver,M. Espineira,H. Gencoglu,S.J. Bertics. Influence of a reduced-starch diet with or without exogenous amylase on lactation performance by dairy cows[J]. Journal of Dairy Science,2011.

收稿日期:2016-02-22

作者簡(jiǎn)介：劉振宇(1987-),男，山東萊蕪人，本科，助理工程師，主要從事糧油檢驗(yàn)方面工作。

doi:10.19369/j.cnki.2095-9737.2016.07.014

中圖分類號(hào)：S816.41

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：2095-9737(2016)07-0021-01