尚 冰，叢培瑋，王艷杰，趙丹玉，馮曉帆，張 林

脾氣虛和脾陽虛模型大鼠空腸組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體5表達(dá)水平變化的實(shí)驗(yàn)研究

尚 冰，叢培瑋，王艷杰，趙丹玉，馮曉帆，張 林

【摘要】目的建立脾氣虛、脾陽虛模型，觀察大鼠空腸組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(GLUT)5表達(dá)水平變化，以探討不同階段脾虛能量代謝的實(shí)質(zhì)與差異。方法2015年3—9月，選取SPF級(jí)雄性SD大鼠24只，按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、脾氣虛組、脾陽虛組，每組8只。脾氣虛模型的建立采用飲食失節(jié)結(jié)合勞倦過度的原則，脾陽虛模型則在脾氣虛的基礎(chǔ)上施加苦寒瀉下法建立。觀察大鼠一般體征狀態(tài)(體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量等)、前肢抓力(肌力檢測(cè))、行為學(xué)變化(曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。采用實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)法測(cè)定GLUT5 mRNA表達(dá)水平，Western blotting法測(cè)定GLUT5表達(dá)水平。結(jié)果脾氣虛組體質(zhì)量、進(jìn)食量、前肢抓力均低于對(duì)照組(P<0.05)；脾陽虛組體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量、前肢抓力均低于對(duì)照組(P<0.05)；脾陽虛組體溫低于脾氣虛組(P<0.05)。脾氣虛組中心區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間長于對(duì)照組，角落區(qū)域停留時(shí)間短于對(duì)照組(P<0.05)；脾陽虛組中心區(qū)域、角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間均短于對(duì)照組、脾氣虛組(P<0.05)。對(duì)照組、脾氣虛組、脾陽虛組角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間均長于中心區(qū)域(P<0.05)；脾氣虛組、脾陽虛組周邊區(qū)域停留時(shí)間長于角落區(qū)域(P<0.05)。脾氣虛組、脾陽虛組GLUT5 mRNA、GLUT5表達(dá)水平低于對(duì)照組(P<0.05)；脾陽虛組GLUT5 mRNA表達(dá)水平低于脾氣虛組(P<0.05)。結(jié)論脾虛狀態(tài)下，大鼠空腸組織GLUT5 mRNA及其蛋白表達(dá)水平均降低，這可能是脾氣虧虛、能量代謝障礙的重要分子機(jī)制之一。

脾氣虛和脾陽虛是脾虛不同的發(fā)展階段。初期脾氣虛后，常會(huì)累及脾臟陽氣，產(chǎn)生虛寒癥狀，脾陽虛較脾氣虛病情更加深入。脾胃因其“后天之本、氣血生化之源”的地位，被認(rèn)為是人體生命活動(dòng)、能量來源的基礎(chǔ)保障[1]。大量研究發(fā)現(xiàn)，人類攝入的碳水化合物大部分在小腸上皮被分解為單糖，通過小腸上皮吸收轉(zhuǎn)運(yùn)進(jìn)入血循環(huán)，從而提供機(jī)體的絕大部分能量，其在體內(nèi)代謝首先需要進(jìn)入細(xì)胞，這一過程需要依賴一種葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體(glucose transporter，GLUT)來完成[2]。而這種吸收-轉(zhuǎn)運(yùn)-入血的簡單過程卻提供了絕大部分人體每日生存所必需的糖類物質(zhì)[3]。目前，關(guān)于脾虛本質(zhì)的研究諸多[4]，但針對(duì)脾虛患者臨床主要出現(xiàn)的思慮勞倦、精神氣血日虧等一系列“神疲乏力”等能量代謝的脾虛本質(zhì)探討的相關(guān)報(bào)道鮮見。本研究以脾氣虛、脾陽虛模型大鼠為載體，通過肌力檢測(cè)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)“神疲乏力”進(jìn)行量化評(píng)價(jià)，同時(shí)通過觀察不同模型大鼠空腸組織GLUT5表達(dá)水平，探討不同階段脾虛能量代謝的實(shí)質(zhì)與差異，以期為脾虛的臨床治療提供新的靶點(diǎn)。

1材料與方法

1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物2015年3—9月，選取SPF級(jí)雄性SD大鼠24只〔由本溪實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，許可證號(hào)：SCXK(遼)2010-0001〕，體質(zhì)量(200±10)g，飼養(yǎng)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2主要試劑和儀器RNAiso Plus試劑盒、實(shí)時(shí)定量熒光聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)試劑盒(Takara公司)；兔抗大鼠GLUT5(一抗)、羊抗兔IgG(二抗)(Abcam公司)；三羥甲基胺甲烷緩沖液(TBST)、聚偏二氟乙烯(polyvinylidene fluoride，PVDF)膜、蛋白定量試劑盒(武漢博士德生物工程有限公司)；TM-Vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)(成都泰盟軟件有限公司)；YLS-13A大小鼠抓力測(cè)定儀(濟(jì)南益延科技發(fā)展有限公司)；7500 RT-PCR儀(ABI公司)。

1.3動(dòng)物分組、模型建立和評(píng)價(jià)24只大鼠按照隨機(jī)數(shù)字表法分為對(duì)照組、脾氣虛組、脾陽虛組，每組8只。脾氣虛、脾陽虛模型的建立和評(píng)價(jià)參考筆者的前期報(bào)道[5]，在此基礎(chǔ)上本課題組進(jìn)行了改良設(shè)計(jì)，具體如下：(1)對(duì)照組：相同室溫及濕度環(huán)境，自由飲水進(jìn)食。(2)脾氣虛組(飲食失節(jié)+勞倦型)：室溫18～23 ℃，相對(duì)濕度45%～55%，自由飲水進(jìn)食，適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。先飽食1 d，再禁食2 d，均不禁水，共5個(gè)循環(huán)；每日水溫35～37 ℃游泳至力竭。(3)脾陽虛組(飲食失節(jié)+勞倦+苦寒瀉下型)：每日灌服20%番瀉葉水浸劑(2 ml/100 g)，早晚各1次，連續(xù)7 d。觀察大鼠一般體征狀態(tài)(體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量等)、前肢抓力(肌力檢測(cè))、行為學(xué)變化(曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn))對(duì)模型進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1.3.1體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量檢測(cè)測(cè)量3組大鼠體質(zhì)量、體溫后，放于代謝籠中，計(jì)算24 h進(jìn)食量。

1.3.2肌力檢測(cè)采用YLS-13A大小鼠抓力測(cè)定儀進(jìn)行肌力檢測(cè)。先用右手將大鼠按放在抓力板上，左手向前推抓力板，然后右手向后滑至大鼠尾部，左手輕輕松開抓力板，待大鼠用力抓住抓力板時(shí)，及時(shí)加力后拉，以得到最大前肢抓力。檢測(cè)由專人操作，輕拿輕放，避免激怒大鼠，每只大鼠連續(xù)測(cè)量3次，取平均值。

1.3.3曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)采用TM-Vision行為學(xué)實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)進(jìn)行檢測(cè)。檢測(cè)箱底部分為25個(gè)小格，規(guī)定中間9格為中心區(qū)域，四角的4格為角落區(qū)域，其他12個(gè)格為周邊區(qū)域。實(shí)驗(yàn)時(shí)將大鼠放入檢測(cè)箱中心，觀察5 min內(nèi)大鼠在檢測(cè)箱內(nèi)不同區(qū)域停留的時(shí)間。徹底清潔檢測(cè)箱后，檢測(cè)下1只大鼠。

1.4RT-PCR法測(cè)定GLUT5 mRNA表達(dá)水平造模結(jié)束后取大鼠近端空腸組織，采用RNAiso Plus試劑盒提取組織總RNA，紫外分光光度計(jì)檢測(cè)RNA純度：A260/A280為1.8～2.2。去除基因組DNA，反轉(zhuǎn)錄PCR，條件：37 ℃ 15 min，85 ℃5 s，4 ℃保存。利用RT-PCR試劑盒進(jìn)行擴(kuò)增反應(yīng)，條件：95 ℃ 10 s，95 ℃ 20 s，60 ℃ 35 s，32個(gè)循環(huán)。采用7500 RT-PCR儀檢測(cè)GLUT5 mRNA表達(dá)水平。引物序列：GLUT5基因：上游引物為5′-CTCATCTTCCCGTTCATTC-3′，下游引物為5′-CGTCCGATACCTTGTTCTT-3′；GAPDH基因：上游引物為5′-GGCACAGTCAAGGCTGAGAATG-3′，下游引物為5′-ATGGTGGTGAAGACGCCAGTA-3′。

1.5Western blotting法測(cè)定GLUT5表達(dá)水平造模結(jié)束后取大鼠近端空腸組織，提取各組大鼠空腸組織總蛋白，采用蛋白定量試劑盒對(duì)GLUT5定量分析，取80 μg總蛋白進(jìn)行二烷基硫酸鈉-聚丙烯乙胺凝膠電泳，電泳完畢后以150 V恒壓30 min半干轉(zhuǎn)印至PVDF膜，將膜用5%脫脂奶粉常溫下?lián)u床封閉2 h，加入一抗(稀釋比例均為1∶100)，4 ℃過夜。TBST洗膜3次，15 min/次；加入二抗，常溫下孵育1 h，TBST洗膜3次，15 min/次，化學(xué)發(fā)光法顯影。

2結(jié)果

2.13組大鼠一般體征狀態(tài)及前肢抓力比較對(duì)照組大鼠動(dòng)作敏捷，行動(dòng)靈活，皮毛光澤緊致，大便正常；脾氣虛組大鼠有所消瘦，神疲乏力，部分大鼠行動(dòng)緩慢，反應(yīng)略顯遲鈍，被毛蓬起無光澤，便較軟；脾陽虛組大鼠明顯消瘦，神疲倦怠，反應(yīng)遲鈍，行動(dòng)緩慢，被毛蓬起無光澤，便軟。3組大鼠體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量、前肢抓力比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脾氣虛組體質(zhì)量、進(jìn)食量、前肢抓力均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脾陽虛組體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量、前肢抓力均低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脾陽虛組體溫低于脾氣虛組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見表1)。

2.23組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)結(jié)果比較3組大鼠中心區(qū)域、角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脾氣虛組中心區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間長于對(duì)照組，角落區(qū)域停留時(shí)間短于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脾陽虛組中心區(qū)域、角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間均短于對(duì)照組、脾氣虛組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。對(duì)照組、脾氣虛組、脾陽虛組角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間均長于中心區(qū)域，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脾氣虛組、脾陽虛組周邊區(qū)域停留時(shí)間長于角落區(qū)域，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見圖1、表2，本文圖1、2彩圖見本刊官網(wǎng)www.chinagp.net電子期刊相應(yīng)文章附件)。

2.33組大鼠空腸組織GLUT5 mRNA及其蛋白表達(dá)水平比較3組大鼠GLUT5 mRNA、GLUT5表達(dá)水平比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。脾氣虛組、脾陽虛組GLUT5 mRNA、GLUT5表達(dá)水平低于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；脾陽虛組GLUT5 mRNA表達(dá)水平低于脾氣虛組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05，見圖2、表3)。

Table 1Comparison of body mass,temperature,food-intake and forelimb grip force among the three groups

組別只數(shù)體質(zhì)量(g)體溫(℃)進(jìn)食量(g)前肢抓力(g)對(duì)照組8314.2±14.437.2±0.523.0±7.11563±208脾氣虛組8180.6±9.4a36.8±0.915.7±3.1a1206±173a脾陽虛組8173.6±19.9a34.4±0.4ab15.0±7.2a1149±180aF值23.927.874.8610.58P值<0.0010.010.04<0.001

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與脾氣虛組比較，bP<0.05

圖1　3組大鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)運(yùn)動(dòng)軌跡

Table 2Comparison of stay time in each area in open field test among the three groups

組別只數(shù)中心區(qū)域角落區(qū)域周邊區(qū)域?qū)φ战M825.06±10.53136.49±38.42c138.50±31.06c脾氣虛組847.25±13.75a88.40±28.30ac164.30±28.33acd脾陽虛組89.21±4.57ab39.57±13.21abc84.63±13.57abcdF值18.3215.4351.84P值<0.0010.002<0.001

注：與對(duì)照組比較，aP<0.05；與脾氣虛組比較，bP<0.05；與同組中心區(qū)域比較，cP<0.05；與同組角落區(qū)域比較，dP<0.05

注：1、2、3為脾陽虛組，4、5為對(duì)照組，6、7、8為脾氣虛組；GLUT5=葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體5

圖2二烷基硫酸鈉-聚丙烯乙胺凝膠電泳結(jié)果

Figure 2Result of SDS-PAGE

表33組大鼠空腸組織GLUT5 mRNA及其蛋白表達(dá)水平比較

Table 3Comparison of mRNA and protein expression of GLUT5 among the three groups in jejunum

組別只數(shù)GLUT5mRNAGLUT5對(duì)照組81.00±0.002.92±0.26脾氣虛組80.67±0.10a1.19±0.14a脾陽虛組80.31±0.11ab1.16±0.06aF值137.4053.97P值<0.001<0.01

注：GLUT5=葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體5；與對(duì)照組比較，aP<0.05；與脾氣虛組比較，bP<0.05

3討論

對(duì)脾虛本質(zhì)的研究一直是中醫(yī)基礎(chǔ)研究的重點(diǎn)[6]。長期以來，人們對(duì)脾虛模型的研究多集中在神經(jīng)內(nèi)分泌、微量元素、免疫、消化、酶學(xué)等方面[1]，而在脾虛能量代謝方面的機(jī)制研究還未見報(bào)道。

本研究脾氣虛模型的建立采用了飲食失節(jié)結(jié)合勞倦過度的原則，脾陽虛模型則是在脾氣虛的基礎(chǔ)上施加苦寒瀉下法完成[5]。結(jié)果顯示，脾氣虛組大鼠消瘦，神疲乏力，行動(dòng)緩慢，反應(yīng)略顯遲鈍，被毛蓬起，便較軟；脾陽虛組大鼠明顯消瘦，神疲倦怠，反應(yīng)遲鈍，被毛無光澤，便軟；脾氣虛組體質(zhì)量、進(jìn)食量均低于對(duì)照組，脾陽虛組體質(zhì)量、體溫、進(jìn)食量均低于對(duì)照組，脾陽虛組體溫低于脾氣虛組。說明本實(shí)驗(yàn)飲食失節(jié)+勞倦型脾氣虛模型及飲食失節(jié)+勞倦+苦寒瀉下型脾陽虛模型制作成功。

“神疲乏力”是評(píng)價(jià)脾虛模型的重要指征之一，但長期以來，人們對(duì)脾虛模型“神疲乏力”的評(píng)價(jià)手段僅停留在肉眼觀察大鼠狀態(tài)的層面上，造成了一定的誤差[7]。本研究創(chuàng)新采用肌力檢測(cè)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)對(duì)“神疲乏力”進(jìn)行量化評(píng)價(jià)，以進(jìn)一步完善脾虛模型客觀化評(píng)價(jià)方法。前肢肌力檢測(cè)可以評(píng)價(jià)肢體力量，用以判斷神經(jīng)系統(tǒng)和運(yùn)動(dòng)系統(tǒng)的損傷[8]，本研究結(jié)果顯示，脾氣虛組、脾陽虛組大鼠前肢抓力低于對(duì)照組，其原因可能涉及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)系統(tǒng)和前肢肌肉損傷等方面。曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)主要用于觀察嚙齒類動(dòng)物在新環(huán)境中的探索性行為，能夠較為客觀地反映中樞神經(jīng)系統(tǒng)的興奮性[9]，本研究結(jié)果顯示，對(duì)照組大鼠角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間長于中心區(qū)域，反映其好奇程度較高。脾氣虛組大鼠中心區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間長于對(duì)照組，角落區(qū)域停留時(shí)間短于對(duì)照組，角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間長于中心區(qū)域，周邊區(qū)域停留時(shí)間長于角落區(qū)域，說明脾氣虛組大鼠對(duì)外界事物關(guān)注度降低，好奇程度下降，且反應(yīng)遲鈍，提示大鼠的中樞結(jié)構(gòu)可能出現(xiàn)損傷，但也不能排除飲食不節(jié)所造成的肌肉失養(yǎng)或力竭游泳導(dǎo)致的肌肉損傷。脾陽虛組大鼠中心區(qū)域、角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間均短于對(duì)照組、脾氣虛組，角落區(qū)域、周邊區(qū)域停留時(shí)間長于中心區(qū)域，周邊區(qū)域停留時(shí)間長于角落區(qū)域，說明脾陽虛大鼠在脾氣虛基礎(chǔ)上進(jìn)一步體現(xiàn)畏寒懼冷、喜聚堆懶動(dòng)的狀態(tài)。

葡萄糖是中樞神經(jīng)系統(tǒng)主要的能源物質(zhì)，機(jī)體所需能量的50%～70%來源于糖[10]。葡萄糖作為營養(yǎng)性碳水化合物主要的消化尾產(chǎn)物，被機(jī)體吸收后，能提供能量并為合成其他生命物質(zhì)提供碳源[11]。GLUTs家族(GLUT1～GLUT5)是細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的主要載體。目前發(fā)現(xiàn)，GLUT5主要分布于成熟的小腸絨毛、基地外側(cè)膜、腎近區(qū)小管及游動(dòng)的精子[12]。Honma等[13]研究了連續(xù)3 d饑餓大鼠空腸組織GLUT5 mRNA表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)饑餓大鼠GLUT5 mRNA表達(dá)水平明顯下降，對(duì)其進(jìn)行高糖喂食后，空腸組織GLUT5 mRNA表達(dá)水平升高，提示GLUT5在哺乳動(dòng)物空腸單糖吸收過程中起重要作用。Barone等[14]在對(duì)GLUT5基因敲除小鼠空腸內(nèi)果糖吸收量分析后證實(shí)，正常飲食小鼠空腸內(nèi)果糖吸收量降低大約75%，而血清中果糖含量也降低近90%，提示GLUT5基因缺失對(duì)小鼠單糖的吸收產(chǎn)生顯著影響。本研究結(jié)果顯示，脾氣虛組、脾陽虛組GLUT5 mRNA、GLUT5表達(dá)水平低于對(duì)照組，脾陽虛組GLUT5 mRNA表達(dá)水平低于脾氣虛組，證實(shí)脾虛狀態(tài)下，GLUT5 mRNA及其蛋白表達(dá)水平均有不同程度的降低。

本課題組在模型量化評(píng)價(jià)上采用肌力檢測(cè)和曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)完善了對(duì)脾虛狀態(tài)下“神疲乏力”的半定量數(shù)據(jù)分析，但脾虛模型評(píng)價(jià)仍有很多證型表現(xiàn)有待于進(jìn)一步探索其量化研究評(píng)價(jià)體系。本研究目前僅以葡萄糖在體內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制為出發(fā)點(diǎn)對(duì)脾虛能量代謝本質(zhì)展開研究，脾虛能量代謝本質(zhì)實(shí)驗(yàn)復(fù)雜，故還需做進(jìn)一步研究加以驗(yàn)證。

綜上所述，脾虛狀態(tài)下，大鼠空腸組織GLUT5 mRNA及其蛋白表達(dá)水平均降低，這可能是脾氣虧虛、能量代謝障礙的重要分子機(jī)制之一，其深入研究有待進(jìn)一步論證。

作者貢獻(xiàn)：尚冰進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與實(shí)施、資料收集整理、撰寫論文、成文并對(duì)文章負(fù)責(zé)；叢培瑋、王艷杰、趙丹玉進(jìn)行實(shí)驗(yàn)實(shí)施、評(píng)估、數(shù)據(jù)整理；馮曉帆、張林進(jìn)行實(shí)驗(yàn)實(shí)施、審校。

本文無利益沖突。

參考文獻(xiàn)

[1]聶建華,孫世發(fā).中醫(yī)脾虛證的近10年相關(guān)研究[J].中醫(yī)藥學(xué)報(bào),2011,39(1):128-130.

[2]Rand EB,Depaoli AM,Davidson NO,et al.Sequence,tissue distribution,and functional characterization of the rat fructose transporter GLUT5[J].Am J Physiol,1993,264(6 Pt 1):G1169-1176.

[3]Ren Z,Niu WX.Basic physiology and function of the intestinal glucose transporter:GLUT5 and SGLT1[J].International Journal of Pathology and Clinical Medicine,2006,26(6):536-541.(in Chinese)

任重,牛偉新.小腸上皮單糖轉(zhuǎn)運(yùn)體GLUT5與SGLT1的基本生理和功能[J].國際病理科學(xué)與臨床雜志,2006,26(6):536-541.

[4]Zhan LB,Chu Y,Zhao XJ,et al.Study on the nature of Spleen Qi deficiency based on metabonomics[J].World Science and Technology-Modernization of Traditional Chinese Medicine,2011,13(4):622-625.(in Chinese)

戰(zhàn)麗彬,初艷,趙欣捷,等.基于代謝組學(xué)的脾氣虛證本質(zhì)研究[J].世界科學(xué)技術(shù)-中醫(yī)藥現(xiàn)代化,2011,13(4):622-625.

[5]尚冰.脾氣虛證、脾陰虛證、脾陽虛證模型大鼠MDA、SOD、GSH-Px、T-AOC、8-OHdG、端粒長度變化的實(shí)驗(yàn)研究[D].沈陽:遼寧中醫(yī)藥大學(xué),2006.

[6]Cong PW,Shang B,Xu NY,et al.Mechanism study of spleen being the source of Qi and blood[J].Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine,2013,40(5):1036-1038.(in Chinese)

叢培瑋,尚冰,許南陽,等.“脾為氣血生化之源”生血、統(tǒng)血機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2013,40(5):1036-1038.

[7]Zhao P,Li XT.Study of systematic evaluation on the literature of spleen-deficiency syndrome diagnostic standard[J].Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine,2013,40(7):1304-1306.(in Chinese)

趙平,李先濤.脾虛證診斷標(biāo)準(zhǔn)文獻(xiàn)系統(tǒng)評(píng)價(jià)研究[J].遼寧中醫(yī)雜志,2013,40(7):1304-1306.

[8]Shang B,Cong PW,Wang RF,et al.Research of ffuzzy mathematics mode identification on spleen deficiency rats models[J].Journal of Liaoning University of TCM,2013,15(3):64-66.(in Chinese)

尚冰,叢培瑋,王蕊芳,等.對(duì)脾虛大鼠模型建立模糊數(shù)學(xué)評(píng)價(jià)體系的研究[J].遼寧中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,15(3):64-66.

[9]Liu YP,Liu T,Bi H,et al.Effects of strain,sex and circadian rhythm on open field test on mice[J].Journal of Xi′an Jiaotong University (Medical Sciences),2014,35(5):634-638.(in Chinese)

劉友平,劉田,畢航,等.品系、性別和生物節(jié)律對(duì)小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)的影響[J].西安交通大學(xué)學(xué)報(bào):醫(yī)學(xué)版,2014,35(5):634-638.

[10]Jiang C,Xie J,Chen HF.The mechanism of conformation transformation of glucose transporter 1[J].Genomics and Applied Biology,2015,34(7):1372-1377.(in Chinese)

江誠,謝俊,陳海峰.葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的轉(zhuǎn)運(yùn)機(jī)制研究[J].基因組學(xué)與應(yīng)用生物學(xué),2015,34(7):1372-1377.

[11]Peng J,Hu YH,Huang XS.A study on expressional distribution spectrum of the pathological features of glucose transporter5 (GLUT5) in a animal model on the syndrome of dampness incumbering middle energizer in jejunal tissue and the intervention by pingwei dosage[J].Lishizhen Medicine and Materia Medica Research,2014,25(5):1238-1240.(in Chinese)

彭晉,呼永河,黃秀深.濕阻中焦證模型空腸葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白5的病理特征性表達(dá)分布譜以及平胃散干預(yù)的研究[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2014,25(5):1238-1240.

[12]Inukai K,Asano T,Katagiri H,et al.Cloning and increased expression with fructose feeding of rat jejunal GLUT5[J].Endocrinology,1993,133(5):2009-2014.

[13]Honma K,Masuda Y,Mochizuki K,et al.Re-feeding rats a high-sucrose diet after 3 days of starvation enhances histone H3 acetylation in transcribed region and expression of jejunal GLUT5 gene[J].Biosci Biotechnol Biochem,2014,78(6):1071-1073.

[14]Barone S,Fussell SL,Singh AK,et al.Slc2a5 (Glut5) is essential for the absorption of fructose in the intestine and generation of fructose-inducedhypertension[J].J Biol Chem,2009,284(8):5056-5066.

(本文編輯：崔麗紅)

【關(guān)鍵詞】脾氣虛；脾陽虛；空腸；葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體5型

尚冰，叢培瑋，王艷杰， 等.脾氣虛和脾陽虛模型大鼠空腸組織葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體5表達(dá)水平變化的實(shí)驗(yàn)研究[J].中國全科醫(yī)學(xué)，2016，19(3)：332-336.[www.chinagp.net]

Shang B,Cong PW,Wang YJ,et al.Expression of GLUT5 in jejunum of model rats with spleen-qi deficiency syndrome and spleen-yang deficiency syndrome[J].Chinese General Practice，2016，19(3)：332-336.

Expression of GLUT5 in Jejunum of Model Rats With Spleen-qi Deficiency Syndrome and Spleen-yang Deficiency SyndromeSHANGBing,CONGPei-wei,WANGYan-jie,etal.AcademyofTCM,LiaoningUniversityofTraditionalChineseMedicine,Shenyang110847,China

【Abstract】ObjectiveTo build rat models of spleen-qi deficiency syndrome and spleen-yang deficiency syndrome and observe the changes of GLUT5 expression in jejunum of rats,in order to investigate the essence and differences of spleen deficiency syndrome and energy metabolism in different stages.MethodsFrom March to September in 2015,selected 24 male SD rats of SPF grade and divided them into control group,spleen-qi deficiency group and spleen-yang deficiency group,with 8 rats in each group.Models of spleen-qi deficiency were built by the methods of dietary irregularity and overfatigue,and spleen-yang deficiency syndrome models were built by the above methods plus discharge fire withbitter-cold method.General physical signs (body mass,body temperature and food intake),forelimb grip strength (muscle force test) and behavioral changes (open field test) were evaluated.RT-PCR was employed to detect the expression of GLUT5 mRNA,and Western blotting method was used to measure the expression of GLUT5.ResultsSpleen-qi deficiency group was lower than control group in body mass,food intake and forelime grip force (P<0.05);spleen-yang deficiency group was lower than control group in body mass,temperature,food intake and forelimb grip force (P<0.05);spleen-yang deficiency group was lower than spleen-qi deficiency group in temperature (P<0.05).Spleen-qi deficiency group was longer in the stay time in central area and peripheral area and was shorter in the stay time in corner area than control group (P<0.05);spleen-yang deficiency group was shorter than control group and spleen-qi deficiency group in the stay time in central area,corner area and peripheral area (P<0.05).The three groups all had longer stay time in corner area and peripheral area than in central area (P<0.05);spleen-qi deficiency group and spleen-yang deficinecy group had longer stay time in peripheral area than in corner area(P<0.05). Spleen-qi deficiency group and spleen-yang deficiency group were lower than control group in the expression of GLUT5 mRNA and GLUT5 (P<0.05);spleen-yang deficiency group was lower than spleen-qi deficiency group in the expression of GLUT5 mRNA (P<0.05).ConclusionIn the status of spleen deficiency,GLUT5 mRNA and its protein expression of jejunum of rats decreases,which may be one of the most important molecular mechanisms of spleen deficiency and metabolic disorder of energy.

【Key words】Spleen-qi deficiency;Spleen-yang deficiency;Jejunum;Glucose transporter type 5

(收稿日期：2015-08-25；修回日期：2015-12-11)

【中圖分類號(hào)】R 256.3

【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A

doi：10.3969/j.issn.1007-9572.2016.03.019

通信作者：王艷杰，110847 遼寧省沈陽市，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院；E-mail：15940157054@163.com

基金項(xiàng)目：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(973計(jì)劃)(2013CB531702)
作者單位：110847 遼寧省沈陽市，遼寧中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)文獻(xiàn)研究院(尚冰)，教學(xué)實(shí)驗(yàn)中心(叢培瑋)，基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院(王艷杰，趙丹玉，馮曉帆，張林)

·中醫(yī)·中西醫(yī)結(jié)合研究·