霍小蕾　裴　振　王金勝　牛香蘭

(長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院，山西　長(zhǎng)治　046000)

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PRL-3、MMP-2和CD105在食管鱗癌中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系

霍小蕾裴振王金勝牛香蘭

(長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院，山西長(zhǎng)治046000)

摘要〔〕目的探討蛋白酪氨酸磷酸酶(PRL)-3、基因金屬蛋白酶(MMP)-2和細(xì)胞膜糖蛋白(CD105)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其與食管鱗癌臨床病理特征之間的關(guān)系。方法選取2012年12月至2014年12月在該院收集的食管鱗癌患者手術(shù)組織細(xì)胞標(biāo)本為研究組，同時(shí)取該組患者癌旁組織細(xì)胞標(biāo)本為對(duì)照組，應(yīng)用免疫組化SP檢測(cè)PRL-3蛋白、MMP-2蛋白和CD105-MVD的表達(dá)，并計(jì)算PRL-3蛋白、MMP-2蛋白和CD105-MVD陽(yáng)性表達(dá)與食管鱗癌臨床病理學(xué)參數(shù)之間的關(guān)系。結(jié)果PRL-3、MMP-2和CD105-MVD在食管鱗狀細(xì)胞癌中的陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于癌旁組織(P<0.05)。MMP-2和CD105-MVD與食管鱗癌患者的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度有相關(guān)性，而PRL-3與食管鱗癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性。結(jié)論P(yáng)RL-3、MMP-2和CD105-MVD在食管鱗狀細(xì)胞癌中高表達(dá)，提示三者聯(lián)合檢測(cè)或可以篩選成為食管鱗狀細(xì)胞癌診斷的早期標(biāo)志物，而MMP-2和CD105可以作為預(yù)測(cè)食管鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移和評(píng)估預(yù)后的生物標(biāo)志物。

關(guān)鍵詞〔〕蛋白酪氨酸-磷酸酶；基因金屬蛋白酶-2；細(xì)胞膜糖蛋白-MVD；食管鱗狀細(xì)胞癌

第一作者：霍小蕾(1981-)，女，碩士，講師，主要從事組織胚胎學(xué)及腫瘤學(xué)相關(guān)研究。

最常見(jiàn)的消化道惡性腫瘤是食管癌，每年食管癌的死亡率約有30萬(wàn)人〔1〕。雖然近年來(lái)對(duì)癌癥的診治已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，但還存在預(yù)后較差的特點(diǎn)，主要原因是食管鱗癌的侵襲和轉(zhuǎn)移速度非常快，且早期癥狀不明顯難以獲得早期診斷。因此，對(duì)食管鱗癌早期診斷和侵襲轉(zhuǎn)移程度的生物標(biāo)志物進(jìn)行判斷有一定的價(jià)值。本研究對(duì)蛋白酪氨酸磷酸酶(PRL)-3、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)-2和細(xì)胞膜糖蛋白(CD105)在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)及其相關(guān)性進(jìn)行研究。

1資料和方法

1.1一般資料選取2012年12月至2014年12月在我院收集的食管鱗癌患者手術(shù)組織細(xì)胞標(biāo)本為研究組，共60例。這些組織細(xì)胞樣本所屬的病例均經(jīng)過(guò)病理診斷為首次發(fā)病，其中男35例，女25例，年齡37～82〔平均(51.2±7.9)〕歲，術(shù)前均未接受過(guò)放化療治療。按照國(guó)際食管癌分期標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行劃分：浸潤(rùn)程度可以劃分為4個(gè)級(jí)別，T1：腫瘤已侵及黏膜固有層或下層；T2：腫瘤已侵犯肌層；T3：腫瘤已經(jīng)侵犯食管纖維膜；T4：腫瘤已經(jīng)侵犯到鄰近的器官。淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的劃分也分為4個(gè)等級(jí)；N0：淋巴結(jié)沒(méi)有轉(zhuǎn)移；N1：食管或是食管周?chē)呀?jīng)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，大約為1～3枚；N2：食管周?chē)呀?jīng)有≥4枚淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移；N3：血管干旁已經(jīng)有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移。食管鱗癌分期劃分為4個(gè)階段,Ⅰ期：T1N0M0或T2N0M0；Ⅱ期：T3N0M0或T4N0M0；Ⅲ期：任何TN1M0或任何TN2N3M0；Ⅳ期：任何T任何NM1。同時(shí)取該組患者癌旁組織細(xì)胞標(biāo)本為對(duì)照組。本組食管鱗癌患者無(wú)淋巴轉(zhuǎn)移14例，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移46例；Ⅰ期7例，Ⅱ期18例，Ⅲ期22例，Ⅳ期13例；中高分化25例，低分化35例。

1.2方法

1.2.1主要試劑美國(guó)proteintech Grop公司生產(chǎn)的PRL-3一抗、MMP-7一抗和CD105一抗，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的磷酸鹽緩沖液(PBS)和免疫組化SP試劑盒等。

1.2.2主要實(shí)驗(yàn)儀器設(shè)備石蠟包埋機(jī)，日本OLYMPUS公司生產(chǎn)的組織切片機(jī)和雙目顯微鏡，以及北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)的免疫組化濕盒。

1.2.3免疫組織化學(xué)染色步驟(1)脫蠟以及水化，30 min，60℃烤片，然后利用二甲苯浸泡，10 min/次，共2次。再用無(wú)水乙醇浸泡，5 min/次，共2次，然后用95%乙醇浸泡，5 min/次，共2次；(2)30 min利用3%H2O2阻斷，并用雙蒸水沖洗3次，每次5 min；(3)利用枸櫞酸鹽緩沖液進(jìn)行抗原修復(fù)，利用高火檔微波處理，每次5 min，共2次，等待冷卻，然后再用雙蒸水沖洗，每次5 min，共3次，再用PBS洗，每次5 min，共3次，每次沖洗后對(duì)試管進(jìn)行輕微振蕩；(4)將10%的羊血清滴加入試管，放進(jìn)恒溫箱孵育，溫度設(shè)定為37℃，共30 min；(5)滴加一抗，再次放進(jìn)恒溫箱孵育，溫度設(shè)定為37攝氏度，共30 min，放置到冰箱過(guò)夜，溫度調(diào)至4℃，第2天，復(fù)溫后利用PBS進(jìn)行沖洗，每次5 min，共3次；(6)滴加二抗，鏈親和素抗生物素過(guò)氧化物酶溶液；(7)利用二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色，并控制好顯色時(shí)間，終止染色；(8)利用蘇木素對(duì)其進(jìn)行再次染色和脫水，最后用樹(shù)膠封片，待觀察。

1.2.4實(shí)驗(yàn)對(duì)照和判斷標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照使用的是已知的食管鱗癌陽(yáng)性片，要保證所有切片的實(shí)驗(yàn)條件都一樣。對(duì)PRL-3和MMP-7結(jié)果的判斷以胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)黃色到棕褐色的顆粒，并且采用半定量方法對(duì)陽(yáng)性表達(dá)進(jìn)行計(jì)算，兩個(gè)因素相乘得到總分，一是陽(yáng)性細(xì)胞百分比，一是染色強(qiáng)度，然后進(jìn)行結(jié)果判斷，陽(yáng)性病例是總分≥2分者。CD105-MVD的結(jié)果判斷，對(duì)色密集區(qū)的血管數(shù)目進(jìn)行計(jì)算。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)。

2結(jié)果

2.1PRL-3、MMP-2和CD105在食管鱗癌中的表達(dá)PRL-3蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的表達(dá)陽(yáng)性率為48.3%(29/60)，顯著高于癌旁組織表達(dá)陽(yáng)性率10%(6/60)(χ2=8.143，P<0.05)MMP-2蛋白在食管鱗狀細(xì)胞癌中的陽(yáng)性率為86.6%(52/60)，顯著高于癌旁組織16%(10/60)(χ2=8.126，P<0.05)。CD105陽(yáng)性信號(hào)主要位于血管內(nèi)皮細(xì)胞胞質(zhì)和胞膜上，鏡下可見(jiàn)在BC組織標(biāo)本切片中血管內(nèi)皮細(xì)胞呈現(xiàn)不同程度黃染(圖1)。CD105-MVD在研究組和對(duì)照組中的表達(dá)分別為(11.59±4.85)mol/L和(41.57±15.38)mol/L，相比差異顯著(t=2.323，P<0.05)。

圖1　食管鱗癌CD105的表達(dá)(SP，×200)

2.2PRL-3、MMP-2和CD105的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系MMP-2和CD105與食管鱗癌患者的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度有相關(guān)性，而PRL-3與食管鱗癌患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有顯著相關(guān)性(N1、N2、N3期PRL-3陽(yáng)性率分別為33.3%、61.6%、100%，N0期為14.3%)。MMP-2與食管鱗癌患者的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度有相關(guān)性。在食管鱗癌中，MMP-2蛋白的陽(yáng)性表達(dá)在低度分化和中度高度分化中有明顯差異(P<0.05)，在中晚期癌癥和早期癌癥中也有明顯差異(P<0.05)，在有無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者中也有明顯差異(P<0.05)，而在性別、年齡的表達(dá)中無(wú)顯著性差異(P>0.05)。CD105與食管鱗癌患者的分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、浸潤(rùn)程度有相關(guān)性。見(jiàn)表1。

表1　食管鱗癌中MMP-2蛋白、CD105-MVD的表達(dá)與臨床病理特征之間的關(guān)系

3討論

MMP-2是一類(lèi)具有Zn-(2+)依賴性的內(nèi)源性蛋白水解酶，主要功能就是參與細(xì)胞表面和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白降解，激活基質(zhì)成分〔2，3〕。PRL-3是屬于蛋白酪氨酸磷酸酶家族的一員，在結(jié)腸癌肝轉(zhuǎn)移中的高表達(dá)已經(jīng)被明確證實(shí)存在〔1，4，5〕。CD105是一類(lèi)細(xì)胞膜抗原，與增生有關(guān)，屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子受體復(fù)合物的成員，能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞對(duì)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(TGF)-β的反應(yīng)，促進(jìn)血管的形成等〔6〕。本研究提示三者或可以篩選成為食管鱗狀細(xì)胞癌診斷的早期標(biāo)志物，而MMP-2和CD105可以作為預(yù)測(cè)食管鱗癌侵襲轉(zhuǎn)移和評(píng)估預(yù)后的生物標(biāo)志物。

參考文獻(xiàn)4

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〔2015-05-16修回〕

(編輯袁左鳴)

通訊作者：裴振(1981-)，男，在讀博士，講師，主要從事生理學(xué)及腫瘤學(xué)相關(guān)研究。

基金項(xiàng)目：長(zhǎng)治醫(yī)學(xué)院科技創(chuàng)新項(xiàng)目(No.CX201407)

中圖分類(lèi)號(hào)〔〕R73〔

文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼〕A〔

文章編號(hào)〕1005-9202(2016)01-0113-03；

doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2016.01.051