林 薇,李巧鳳,陳 曄,詹壽發(fā)

(九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,江西九江 332000)

響應(yīng)面法優(yōu)化紫萁多糖提取工藝及體外抗癌活性研究

林 薇,李巧鳳,陳 曄,詹壽發(fā)*

(九江學(xué)院藥學(xué)與生命科學(xué)學(xué)院,江西九江 332000)

本文意在優(yōu)化紫萁多糖的提取工藝,并探討紫萁多糖對(duì)癌細(xì)胞的作用。以超聲-微波協(xié)同萃取方法,料液比、微波功率和提取時(shí)間為考察因素,在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,設(shè)計(jì)響應(yīng)面法Box-Benhnken中心組合實(shí)驗(yàn),對(duì)紫萁多糖提取工藝參數(shù)進(jìn)行優(yōu)化,得到優(yōu)化紫萁多糖的提取條件:料液比1∶35(g/mL),微波功率353 W,提取時(shí)間250 s時(shí),紫萁多糖的提取率為0.236%。以體外細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)方法研究紫萁多糖對(duì)HepG-2癌細(xì)胞的抑制作用,當(dāng)紫萁多糖濃度為0.001 mg/mL時(shí),對(duì)HepG-2癌細(xì)胞的抑制率為18.13%,在10 mg/mL時(shí)抑制率為72.65%,IC50值為0.474 mg/mL。

紫萁,水溶性多糖,響應(yīng)面法,抑癌率

紫萁(Osmundajaponica)為紫萁科多年生草本蕨類植物,嫩葉干品可食,稱為薇菜,含有豐富的維生素、蛋白質(zhì)、氨基酸[1]、多糖、黃酮、鞣酸[2]、無機(jī)鹽等多種人體所需營養(yǎng)成分,具清熱解毒、潤肺理氣、補(bǔ)虛舒絡(luò)、止血、安神、降壓、解熱之功效[3],主要活性成分是多糖和黃酮類化合物。多糖存在于植物體中,有廣泛的生物學(xué)活性和功能,如抗衰老、抗菌[4]、降血糖[5]等。人們逐漸認(rèn)識(shí)到植物多糖不僅能作為能量資源和結(jié)構(gòu)材料,更重要的是植物活性多糖參與了生命現(xiàn)象中細(xì)胞的各種活動(dòng)[6],多糖在抗腫瘤[7]、抗病毒、抗輻射方面的作用引起了人們的關(guān)注。

國內(nèi)外學(xué)者對(duì)紫萁多糖功能活性進(jìn)行了相關(guān)研究,戴金鳳、陶海南等[8-9]對(duì)紫箕的水溶性多糖進(jìn)行了提取研究,并運(yùn)用氣相色譜測(cè)定了紫萁單糖由葡萄糖、甘露糖、木糖和半乳糖組成,同時(shí)也證明紫萁水溶性多糖的抑菌作用是廣譜性的,而且紫萁水溶性多糖在抗菌消炎的同時(shí),具有止痛、生肌和護(hù)膚等功效;周仁超[10]也證明了紫萁多糖具有一定抑菌活性,特別對(duì)金色葡萄球菌和痢疾桿菌抑菌效果明顯;許文濤[11]用FARP法測(cè)定了紫萁多糖的抗氧化活性,結(jié)果表明紫萁多糖具有較好抗氧化活性;此外,Takashi等[12]曾從幼小紫萁葉中提取分離出一種具有血細(xì)胞凝集抑制作用的蛋白聚糖,這種蛋白聚糖對(duì)血型H有活性。但有關(guān)紫萁多糖抗腫瘤活性鮮見報(bào)道。

目前,有的學(xué)者分別以乙醇、水為溶劑,采用水浴浸提取法進(jìn)行紫萁多糖提取,提取時(shí)間分別為2～6 h,提取溫度為90～100 ℃[13-14],該方法提取時(shí)間長,提取溫度高;張鐘等[15]以水為溶劑采用微波輔助提取技術(shù)從紫萁中提取多糖,在微波強(qiáng)度為539 W的條件下提取35 s,雖然提取時(shí)間較短,但微波功率較高。而超聲微波協(xié)同提取技術(shù)作為一種新興的樣品前處理方法,具有快速、高效、安全、提取時(shí)間短[16]、提取效率高[17]、重現(xiàn)性好及目標(biāo)物損失少等優(yōu)點(diǎn),已在天然產(chǎn)物活性成分研究領(lǐng)域廣泛應(yīng)用。有關(guān)超聲微波協(xié)同提取技術(shù)在紫萁多糖提取工藝方面研究鮮見報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以提取時(shí)間、微波功率、液料比為實(shí)驗(yàn)因素,采用響應(yīng)面法優(yōu)化紫萁水溶性多糖的超聲-微波協(xié)同萃取工藝,并通過細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)研究其對(duì)HepG-2癌細(xì)胞的體外抗癌活性,為紫萁多糖研究與利用提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

紫萁 2015年6月在江西廬山采集紫萁新鮮植株,太陽下曬干后取紫萁葉在干燥箱中烘干,將干燥的紫萁葉用粉碎機(jī)粉碎,過40目篩,貯于密封袋放入冰箱備用;HepG-2細(xì)胞 中國科學(xué)院生物化學(xué)研究所提供;葡萄糖,Sevage試劑[氯仿(V)∶正丁醇(V)=4∶1],3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴鹽(MTT) Sigma-Aldrich公司;RPMI 1640培養(yǎng)基和胰蛋白酶-EDTA 基諾生物技術(shù)公司;胎牛血清(FBS) 杭州四季青生物工程材料有限公司。

CW-2000超聲-微波協(xié)同萃取儀 新拓分析儀器科技有限公司;(BSA124S電子天平 賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;TDL-40B低速臺(tái)式大容量離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;721可見光分光光度計(jì) 天津普瑞斯儀器有限公司;AE31倒置生物顯微鏡 麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司;酶標(biāo)儀 美國伯騰儀器有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 水溶性紫萁多糖的提取和精制 稱取紫萁葉粉末2.00 g(M)加去離子水,使用超聲-微波協(xié)同提取儀提取紫萁多糖,4000 r/min離心15 min得上清液,加入3倍體積95﹪冰乙醇,置冰箱過夜后4000 r/min離心15 min,沉淀即為紫萁粗多糖。Sevage法脫蛋白2次,將脫蛋白后的多糖溶液按體積比1∶3加入95﹪乙醇溶液,沉淀得紫萁多糖(m)。

1.2.2 水溶性紫萁多糖檢測(cè)方法

1.2.2.1 葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 采用苯酚-硫酸法測(cè)定樣品中的多糖[18]。準(zhǔn)確稱取10 mg經(jīng)烘干的葡萄糖,用蒸餾水溶解并定容至100 mL(濃度為100 μg/mL)。分別吸取上述溶液0、0.1、0.5、0.9、1.3、1.8 mL加入試管中,每管用蒸餾水定容至2 mL,配制成系列標(biāo)準(zhǔn)葡萄糖溶液,各管加1.0 mL 6%苯酚溶液,再加入濃硫酸5.0 mL,靜置10 min,30 ℃水浴15 min,于490 nm處測(cè)定各管OD值,以糖含量(μg/mL)為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得到葡萄糖含量x與吸光度y的回歸方程為y=13.088x+0.01885(R2=0.999),表明葡萄糖在10～100 μg/mL質(zhì)量范圍濃度內(nèi)線性關(guān)系良好。

1.2.2.2 紫萁多糖的測(cè)定 將脫蛋白后的紫萁多糖用去離子水溶解定容至100 mL,搖勻,從中移取2.5 mL于25 mL容量瓶,加去離子水至刻度。取樣液2.0 mL于具塞試管中,加入6%苯酚溶液1.0 mL,再加入濃硫酸5.0 mL,按標(biāo)準(zhǔn)曲線制作相同的方法進(jìn)行多糖測(cè)定,按下式計(jì)算樣品中紫萁多糖的提取率:

式中:m為提取到的紫萁多糖質(zhì)量,g;M為紫萁葉粉末的質(zhì)量,g。

1.2.3 單因素實(shí)驗(yàn) 在開啟超聲波(50 W/40 KHz)的條件下,固定微波功率150 W,料液比1∶20,考察不同提取時(shí)間60、120、180、240、300、360 s對(duì)紫萁多糖提取率的影響;固定提取時(shí)間180 s,料液比1∶20,考察不同微波功率100、150、200、250、300、350 W對(duì)紫萁多糖提取率的影響;固定提取時(shí)間180 s,微波功率150 W,考察不同料液比1∶20,1∶30,1∶35,1∶40,1∶45,1∶50 g/mL對(duì)紫萁多糖提取率的影響。

1.2.4 Box-Benhnken中心組合實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì) 在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用Box-Benhnken實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),以提取時(shí)間、微波功率、料液比為自變量,紫萁多糖提取率為響應(yīng)值,建立紫萁多糖提取工藝條件的二次模型。因素水平見表1:

表1 紫萁多糖提取工藝響應(yīng)曲面因素和水平

1.2.5 紫萁水溶性多糖抑癌實(shí)驗(yàn)

1.2.5.1 紫萁多糖溶液的配置 精密稱取250 mg已精制的多糖,溶于10 mL的5%的葡萄糖等滲溶液,渦旋10 min左右,加入10 mL含有胎牛血清和雙抗的1640培養(yǎng)液,再加入40 μL(0.2%,v/v)的二甲基亞砜,繼續(xù)渦旋10 min左右,充分溶解后過0.45 μm水膜,用1640培養(yǎng)液定容到25 mL,即為含10 mg/mL紫萁多糖母液。用1640培養(yǎng)液稀釋成0.001、0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2、5、10 mg/mL的系列紫萁多糖溶液(使用時(shí)配制)。

1.2.5.2 細(xì)胞培養(yǎng) 人肝癌HepG-2細(xì)胞培養(yǎng)于含10%胎牛血清的RPMI 1640培養(yǎng)基中,在5% CO2培養(yǎng)箱內(nèi)37 ℃培養(yǎng)傳代,取對(duì)數(shù)生長期細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。

1.2.5.3 MTT法測(cè)細(xì)胞增殖抑制率 取傳代3～4代的對(duì)數(shù)生長期HepG-2細(xì)胞用胰酶消化,洗滌、離心后將其制備成細(xì)胞懸液(5.0×104個(gè)/mL),取200 μL接種于96孔板中(1.0×104個(gè)/孔)。將細(xì)胞培養(yǎng)板置于37 ℃細(xì)胞培養(yǎng)箱中,在5% CO2條件下孵育24 h,顯微鏡下觀察可見細(xì)胞貼壁生長,吸掉培養(yǎng)液,加入濃度分別為0.001、0.01、0.05、0.1、0.25、0.5、1、2、5、10 mg/mL的紫萁多糖溶液200 μL,以細(xì)胞空白和溶劑空白為對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)48 h后,換無血清的培養(yǎng)液,每孔加入5 mg/mL的MTT 30 μL繼續(xù)培養(yǎng)4 h后,吸去原培養(yǎng)液,毎孔加入200 μL的DMSO溶解結(jié)晶,用酶標(biāo)儀于570 nm處測(cè)定其吸光度,計(jì)算不同濃度下的細(xì)胞存活率。上述實(shí)驗(yàn),每個(gè)濃度設(shè)8個(gè)復(fù)孔,每組重復(fù)3次。

式中:A1為實(shí)驗(yàn)組吸光度;A2為細(xì)胞空白組吸光度;A0為溶劑空白組吸光度。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 采用Origin7.5軟件作圖,Design-expert 8.0.6軟件進(jìn)行方差分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 單因素實(shí)驗(yàn)

2.1.1 提取時(shí)間對(duì)多糖提取率的影響 微波功率150 W,料液比1∶20時(shí),隨著提取時(shí)間的增加,多糖提取率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì),圖1所示。當(dāng)提取時(shí)間超過240 s時(shí),多糖提取率呈下降趨勢(shì),原因可能是時(shí)間過長導(dǎo)致多糖水解程度增大,選取提取時(shí)間為240 s。

圖1 提取時(shí)間對(duì)對(duì)紫萁多糖提取率的影響Fig.1 Effect of extraction time on the yield of polysaccharides of Osmunda japonica

2.1.2 微波功率對(duì)多糖提取率的影響 提取時(shí)間180 s,料液比1∶20時(shí),隨著微波功率的增加,多糖提取率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì),圖2所示。當(dāng)微波功率超過350 W時(shí),多糖提取率會(huì)下降,原因可能是過高的功率破壞多糖的結(jié)構(gòu)使其分解,造成多糖的損失。另外,過高的功率可能引起爆沸,也引起一定程度的損失,選取微波功率為350 W。

圖2 微波功率對(duì)紫萁多糖提取率的影響Fig.2 Effect of microwave power on the yield of Polysaccharide from Osmunda japonica

2.1.3 料液比對(duì)多糖提取率的影響 提取時(shí)間180 s,微波功率150 W時(shí),隨著料液比的增加,多糖提取率呈現(xiàn)先升高后下降的趨勢(shì),圖3所示。當(dāng)料液比(g/mL)超過1∶35時(shí),多糖提取率會(huì)下降,原因可能是隨著溶劑用量的增大,出現(xiàn)了暴沸的現(xiàn)象導(dǎo)致不能持續(xù)加熱,同時(shí)部分提取液也會(huì)沖上冷凝管造成損失,選取料液比為1∶35。

圖3 料液比對(duì)紫萁多糖提取率的影響Fig.3 Effect of solid-liquid ratio on the yield of Polysaccharides from Osmunda japonica

2.2 響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)結(jié)果與分析

2.2.1 響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果 利用Design-Expert V8.0.6軟件,采用Box-Behnken設(shè)計(jì)響應(yīng)曲面實(shí)驗(yàn)方案,以提取時(shí)間(A)、微波功率(B)和液料比(C)為自變量,根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)結(jié)果,按表1中的因素、水平進(jìn)行實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì),結(jié)果見表2。

表2 響應(yīng)曲面設(shè)計(jì)與實(shí)驗(yàn)結(jié)果

表3 擬合二次多項(xiàng)式模型的方差分析

2.2.2 響應(yīng)曲面分析與優(yōu)化 響應(yīng)曲面是優(yōu)化存在多因素影響實(shí)驗(yàn)條件的尋優(yōu)方法,通過固定數(shù)量的實(shí)驗(yàn)次數(shù)可以連續(xù)的對(duì)實(shí)驗(yàn)因素進(jìn)行分析,并得到直觀的3D曲面圖進(jìn)而評(píng)價(jià)各因素間的交互作用。根據(jù)回歸分析的結(jié)果,做出模型的響應(yīng)曲面圖,結(jié)果如圖4～6所示。根據(jù)二次模型所做的響應(yīng)曲面可評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)因素對(duì)紫萁多糖得率的交互作用,以及確定各因素的最佳水平。

圖4 微波功率和提取時(shí)間對(duì)提取率交互影響的三維曲面圖Fig.4 Response surface diagram and contour plot for yield of crude Polysaccharides as a function of microware power and extraction time

圖5 料液比和提取時(shí)間對(duì)提取率交互影響的三維曲面圖Fig.5 Response surface diagram and contour plot for yield of crude polysaccharides as a function of solid/liquid ratio and extraction time

圖6 微波功率和料液比對(duì)提取率交互影響的三維曲面圖Fig.6 Response surface diagram and contour plot for yield of crude polysaccharides as a function of microware power and solid/liquid ratio

從圖4～6中的響應(yīng)曲面及其等高線可以看出,紫萁多糖提取率受提取時(shí)間、微波功率和料液比的共同影響。圖4～6所示為當(dāng)固定提取時(shí)間、微波功率、料液比任一因素為為零水平時(shí),其余兩個(gè)因素間的交互作用及對(duì)多糖提取率的影響。紫萁多糖提取率隨其中任意兩個(gè)變量的增加均呈上升趨勢(shì),達(dá)到某一定值時(shí),曲面稍下降或趨于平緩。其中,提取時(shí)間和微波功率的交互作用較大,而微波功率和液料比、液料比和提取時(shí)間的交互作用小。

通過對(duì)回歸模型求解方程,得出紫萁多糖的最佳提取工藝條件為提取時(shí)間250.21 s,微波功率353.31 W,料液比1∶35.23(g/mL)。此條件下紫萁多糖最大提取得率的理論計(jì)算值為0.243%。

2.2.3 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn) 為檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷目煽啃?采用上述工藝條件進(jìn)行紫萁多糖的提取實(shí)驗(yàn),同時(shí)考慮到實(shí)際操作的可行性,將實(shí)驗(yàn)條件定為:提取時(shí)間250 s,微波功率為353 W,料液比為1∶35(g/mL),在此條件下提取4次,實(shí)際測(cè)得的平均提取率為0.236%,與理論預(yù)測(cè)值相比,相對(duì)誤差約為0.004%。因此,采用響應(yīng)曲面法優(yōu)化得到的提取參數(shù)準(zhǔn)確可靠,具有實(shí)用價(jià)值。

2.3 水溶性紫萁多糖抑制癌細(xì)胞增殖

統(tǒng)計(jì)不同濃度紫萁水溶性多糖溶液培養(yǎng)下的癌細(xì)胞存活率及標(biāo)準(zhǔn)差,隨著多糖濃度的上升,癌細(xì)胞的存活率迅速下降,計(jì)算IC50值為0.474 mg/mL,見圖7。多糖濃度為0.001 mg/mL時(shí),抑制率為18.13%;當(dāng)濃度為10 mg/mL時(shí),對(duì)癌細(xì)胞的抑制率達(dá)到72.65%。

圖7 紫萁多糖對(duì)HepG-2細(xì)胞存活率的影響Fig.7 The polysaccharides of Osmunda japonica on HepG-2 effect of cell survival

本實(shí)驗(yàn)初步證實(shí)紫萁中提取的水溶性多糖具有較強(qiáng)的抗癌活性,但其抗癌作用的機(jī)制和免疫活性的機(jī)理有待進(jìn)一步的探索。

3 結(jié)論

在單因素實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上,采用Box-Behnken實(shí)驗(yàn),優(yōu)化得到紫萁水溶性多糖提取的最佳工藝:提取時(shí)間250 s、微波功率353 W、料液比1∶35(g/mL)。在此模型下,理論提取率為0.243%,實(shí)測(cè)提取率為0.236%。與理論預(yù)測(cè)值相比,相對(duì)誤差約為0.004%。細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示,隨著紫萁多糖濃度的上升,癌細(xì)胞的存活率迅速下降,IC50值為0.474 mg/mL。當(dāng)多糖濃度為0.001 mg/mL時(shí),對(duì)18.13%的癌細(xì)胞有抑制能力;當(dāng)濃度為10 mg/mL時(shí),癌細(xì)胞的抑制率達(dá)到了72.65%,表明紫萁多糖具有較強(qiáng)的抗癌活性,但其抗癌作用的機(jī)制和免疫活性的機(jī)理還需進(jìn)一步的探究。

[1]李金昶,王愛霞,于愛群. 薇芽干的營養(yǎng)成分[J]. 食品科學(xué),1992,13(7):36-38.

[2]徐皓. 紫萁的藥用及食用價(jià)值[J]. 亞熱帶植物學(xué)報(bào),2005,34(3):82-84.

[3]何義發(fā),田國政,劉芳. 薇菜葉水溶性多糖提取工藝優(yōu)化及體外抗氧化活性研究[J]. 食品工業(yè)科技,2012,33(13):193-196.

[4]張澤宏,何義發(fā). 紫萁提取液抑菌實(shí)驗(yàn)的初步研究[J]. 西南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版),2008,30(2):95-98.

[5]石倩茹,陳盼盼,田國政,等. SephadexG-200分離純化薇菜可溶性多糖的工藝優(yōu)化[J]. 現(xiàn)代園藝,2011,(15):8-9.

[6]羅婭君,楊葵華. 藥用蕨類植物多糖研究進(jìn)展[J]. 綿陽師范學(xué)院學(xué)報(bào),2008,27(11):71-74.

[7]林俊,李萍,陳靠山. 近5年多糖抗腫瘤活性研究進(jìn)展[J].中國中藥雜志,2013,38(8):1116-1125.

[8]戴金鳳,李磊. 紫萁多糖單糖組成及摩爾比GC分析[J]. 江西農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào),2001,23(04):492-494.

[9]陶海南,劉輝,薛喜文,等. 紫萁多糖抗菌活性初步研究[J]. 南昌大學(xué)學(xué)報(bào)(理科版),1996,20(04):16-18.

[10]周仁超,李淑彬. 蕨類植物抗菌作用的初步研究[J]. 天然產(chǎn)物研究與開發(fā),1999,11(4):53-56.

[11]許文濤,張方方,黃昆侖,等. 響應(yīng)曲面法優(yōu)化蕨菜水溶性多糖提取工藝的研究(英文)[J]. 食品科學(xué),2008,29(7):122-126.

[12]TsapalovaⅠE. Plotnikova TV. Chemical composition of fresh and salted fern shoots[J]. Konservnaial Ovoshchesushilnaia Promyshlennost,1981,18(1):76.

[13]趙玉宏. 紫萁多糖提取工藝條件實(shí)驗(yàn)[J]. 湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2008,47(6):699-701.

[14]郭鳳領(lǐng),李俊麗,王運(yùn)強(qiáng),等. 高山薇菜中多糖提取條件優(yōu)化[J]. 長江蔬菜,2013(22):75-77.

[15]張鐘,李鳳霞,邱桂林. 薇菜多糖的提取及純化[J]. 中國林副特產(chǎn),2007,5:1-4.

[16]劉全德,唐仕榮,王衛(wèi)東,等. 響應(yīng)曲面法優(yōu)化超聲波-微波協(xié)同萃取生姜多糖工藝[J]. 食品科學(xué),2010,31(18):124-128.

[17]白紅進(jìn),汪河濱,褚志強(qiáng),等. 不同方法提取黑果枸杞多糖的研究[J]. 食品工業(yè)科技,2007,28(03):145-146.

[18]厲博文,張東,楊嵐,等. 紫萁貫眾中多糖的含量測(cè)定[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2010,16(10):41-43.

Optimization of extraction of polysaccharides fromOsmundejaponicaleaves by response surface methodology and their inhibitory effects on tumor

LIN Wei,LI Qiao-feng,CHEN Ye,ZHAN Shou-fa*

(School of Pharmacology and Life Sciences,Jiujiang University,Jiujiang 332000,China)

The study was to explore the optimum processes of extraction polysaccharides fromOsmundajaponicaleaves and the effect of Polysaccharides on cancer cells. Using the ultrasonic microwave synergistic extraction,solid-liquid ratio,microwave power and extraction time as factors,based on the single factor experiment,the response surface methodology(RSM)Box-Benhnken center combination experimental design was employed to optimize the extraction of polysaccharides ofOsmundajaponica. The results of optimum extraction conditions were as follow:the solid-liquid ratio was 1∶35(g/mL),microwave power 353 W,extraction time was 250 s. Under these conditions,the extraction yield was 0.236%. According to the Cytotoxicity test,the inhibitory effect of polysaccharides fromOsmundajaponicaon the HepG-2 cancer cells had been studied. The results of cytotoxicity test indicated that the concentration of polysaccharides were 0.001 mg/mL,10 mg/mL separately,the inhibition rate was 18.13%,72.65% respectively. The vaule of IC50was 0.474 mg/mL.

Osmundajaponica;water-soluble polysaccharides;response surface methodology(RSM);Inhibition rate

2016-05-06

林薇(1995-)，女，本科，研究方向：天然植物的開發(fā)與利用，E-mail：artemislyn@163.com。

*通訊作者:詹壽發(fā)(1964-)，男，副教授，研究方向：天然植物的開發(fā)與利用，E-mail：zhan9630@126.com。

TS

A

1002-0306(2016)24-0000-00

10.13386/j.issn1002-0306.2016.24.000