廖妙飛,付萬冬,*,楊會成,張偉杰,鄭 斌,鐘明杰

(1.浙江省海洋開發(fā)研究院,浙江舟山 316021;2.蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730050)

高透明度脫色魷魚皮膠原的制備工藝研究

廖妙飛1,付萬冬1,*,楊會成1,張偉杰2,鄭 斌1,鐘明杰1

(1.浙江省海洋開發(fā)研究院,浙江舟山 316021;2.蘭州理工大學(xué)生命科學(xué)與工程學(xué)院,甘肅蘭州 730050)

為了提高魷魚皮膠原蛋白的透明度和應(yīng)用價值,本文利用雙氧水對魷魚皮膠原蛋白進(jìn)行脫色工藝優(yōu)化研究。酶解提取得到的魷魚皮膠原蛋白通過單因素實(shí)驗(yàn)和正交實(shí)驗(yàn),以膠原蛋白回收率和膠原蛋白脫色率為指標(biāo),確定了最佳膠原蛋白回收和脫色工藝條件為雙氧水濃度0.6%,pH8,溫度55 ℃,脫色時間7 h。在最佳的蛋白回收和脫色工藝條件下,膠原蛋白的脫色率和蛋白回收率分別為78.76%和88.29%。因此,本研究所得膠原蛋白回收和脫色效果較好,具有潛在的應(yīng)用前景

魷魚皮,膠原,H2O2溶液,脫色率,蛋白提取率

膠原蛋白(Collagen)是一種纖維蛋白,約占動物體內(nèi)所有蛋白質(zhì)的30%,其分子組成特征是若干個Gly-X-Y序列重復(fù)和由三條多肽鏈構(gòu)成的獨(dú)特三螺旋結(jié)構(gòu),至今,已發(fā)現(xiàn)27種類型的膠原[1-2]。膠原蛋白及其降解產(chǎn)物因具有良好的物理性能和生物學(xué)特性,在化工、食品、醫(yī)學(xué)、生物材料以及農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域有著廣泛的應(yīng)用[3-4]。

陸地哺乳動物如牛、豬皮等得到了較好的利用,而水產(chǎn)加工廢棄物利用較少。目前全世界膠原的年產(chǎn)量超過24×104t,但生產(chǎn)這些膠原的原料基本上是牛、豬皮及哺乳動物的骨。由于近年來發(fā)生了BSE、口蹄疫以及豬鏈球菌病等危機(jī),尋找牛、豬皮以外的膠原蛋白原料成為當(dāng)務(wù)之急,而水產(chǎn)加工廢棄物尤其是魚皮是理想和現(xiàn)實(shí)的替代原料[5-6]。來源于水產(chǎn)動物的膠原蛋白明顯優(yōu)于牛、豬皮陸地哺乳動物的膠原蛋白的特性,比如低抗原性、低過敏性、易酶解被機(jī)體消化吸收等,此外,國內(nèi)外大量研究還報道水產(chǎn)膠原蛋白水解液具有抗氧化、降血壓、調(diào)血脂、提高免疫力等生理活性[7-10]。因此,從水產(chǎn)加工廢棄物中提取膠原蛋白并利用先進(jìn)的現(xiàn)代生物技術(shù),開發(fā)膠原多肽,生產(chǎn)具有各種生理功能的活性肽,既能促進(jìn)水產(chǎn)加工廢棄物的綜合利用,降低水產(chǎn)加工的成本,對水產(chǎn)業(yè)的發(fā)展提供更加廣闊的前景[11-15]。魷魚(Squid)屬海洋頭足類,無脊椎軟體動物,富含蛋白質(zhì)、脂肪、礦物質(zhì)及維生素等多種營養(yǎng)成分營養(yǎng)成分,是我國一種非常重要的水產(chǎn)品加工原料。我國魷魚的大規(guī)模捕撈和加工始于上世紀(jì)九十年代,目前,我國的魷魚加工總量達(dá)20萬噸左右,魷魚加工副產(chǎn)物占體重的20%左右,包括內(nèi)臟、皮、鰭部和墨囊等,其中,魷魚皮占副產(chǎn)物的10%左右,其含有約80%的膠原蛋白[16-18]。目前,魷魚皮提取的膠原蛋白制品存在的主要問題之一是膠原蛋白產(chǎn)品顏色太深,限制其應(yīng)用價值[19-21]。膠原蛋白提取物的脫色方法有活性炭法、雙氧水法和樹脂脫色法?；钚蕴棵撋a(chǎn)品顏色較重,且脫色后溶液中的活性炭殘渣難于完全除去;樹脂脫色效果最好,脫色工藝簡單,但樹脂價格較高,一次性投資較大,且需再生使用,生產(chǎn)周期較長,適合少量樣品的脫色,不適合工業(yè)化大生產(chǎn);雙氧水脫色操作簡便,脫色效果較好,產(chǎn)品顏色較淺,但對膠原蛋白具有較強(qiáng)的氧化作用,在使用時一定要控制好條件。有報道關(guān)于水產(chǎn)膠原脫色脫腥工藝的研究,也取得一些研究成果[22-24]。雙氧水脫色具有脫色效率高、操作簡單、快捷的特點(diǎn)。為此,本文以廢棄物魷魚皮為原料提取魷魚皮膠原蛋白,利用雙氧水溶液對膠原蛋白進(jìn)行脫色優(yōu)選,以期找到適合工業(yè)化生產(chǎn)的最佳脫色工藝,為擴(kuò)大魷魚皮膠原蛋白的應(yīng)用范圍,提高魷魚加工的經(jīng)濟(jì)效益,魷魚的綜合開發(fā)提供新途徑。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

本研究的魷魚皮 取自浙江興業(yè)集團(tuán)有限公司;雙氧水、對二甲基氨基苯甲醛、氯胺T、檸檬酸、高氯酸、NaOH、正丁醇、鹽酸、L-羥脯氨酸、無水乙醇、濃硫酸和考馬斯亮藍(lán)G250等 均購自國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司;蛋白酶(胃蛋白酶(10萬U/g)、胰蛋白酶(10萬U/g)、中性蛋白酶(10萬U/g)和酸性蛋白酶(10萬U/g)) 購自諾維信(中國)生物技術(shù)有限公司。

DHG-9075A型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司;JJ-1精密增力電動攪拌器 國華電器有限公司;KDN-08C定氮儀 上海新嘉電子有限公司;數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-4 上海博訊實(shí)業(yè)有限公司;JJ-2組織搗碎勻漿機(jī) 金壇市精達(dá)儀器制造廠;超聲波清洗機(jī) 上海新芝電子有限公司;UV-2102C紫外可見分光光度計 上海尤尼珂儀器有限公司;BS124S天平 賽多利斯科學(xué)儀器有限公司;TC-15套式恒溫器 海寧新華醫(yī)療器械廠;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海亞榮生化儀器廠;XW-80A漩渦混合器 上海青浦滬西儀器廠;DELTA320 pH計 梅特勒-托利多儀器有限公司;冰箱 青島海爾股份有限公司;EYELA冷凍干燥機(jī) 上海愛朗儀器有限公司;SP64色差儀 愛麗色有限公司。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 膠原蛋白的提取

1.2.1.1 魷魚皮的處理 將魷魚皮解凍后,用自來水清洗,并剪成約4 mm×4 mm的小方塊,用10%正丁醇在4 ℃攪拌24 h,去除脂類物質(zhì),用5倍魷魚皮體積的蒸餾水清洗5次;將上述預(yù)處理的魷魚皮用0.05 mol/L的NaOH(W/V=1∶30)溶液于4 ℃浸泡12 h,每6 h換液一次,浸泡后用蒸餾水清洗魷魚皮至中性,瀝干水分得到處理好的魷魚皮。

1.2.1.2 單酶水解實(shí)驗(yàn) 按照1∶10(W/W)的比例將魷魚皮與水置于反應(yīng)器中,加酶量為魷魚皮重量的1%(W/W),酶解溫度為55 ℃,酶解時間為90 min,胃蛋白酶和酸性蛋白酶酶解pH為3.0,中性蛋白酶酶解pH為7.0,胰蛋白酶酶解pH為8.0;酶解完成后在沸水浴中滅活10 min,冷卻后用0.1 mol/L NaOH調(diào)pH至7.0,將提取液用雙層紗布過濾;濾液冷凍干燥得到未脫色魷魚皮膠原蛋白。

1.2.2 膠原蛋白脫色單因素實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 H2O2溶液濃度對脫色效果的影響 取6份15 mL酶解液,分別加30% H2O2溶液至H2O2濃度為0.2%、0.4%、0.6%、1.0%、1.5%和2.0%,用1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至7,置于25℃水浴中反應(yīng)3 h。用色差儀測定色差值ΔE,計算脫色率;用分光光度計測定595 nm處的吸光度A595 nm,計算蛋白提取率。

1.2.2.2 pH對脫色效果的影響 取6份15 mL酶解液,加入30% H2O2溶液至H2O2濃度為0.6%,再分別用1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至4、5、7、8、9、10,置于25 ℃水浴中反應(yīng)3 h。用色差儀測定色差值ΔE,計算脫色率;用分光光度計測定595 nm處的吸光度A595 nm,計算蛋白提取率。

1.2.2.3 溫度對脫色效果的影響 取6份15 mL酶解液,加入30% H2O2溶液至H2O2濃度為0.6%,用1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至8,分別置于25、35、45、50、55和65 ℃水浴中反應(yīng)3 h。用色差儀測定色差值ΔE,計算脫色率;用分光光度計測定595 nm處的吸光度A595 nm,計算蛋白提取率。

1.2.2.4 時間對脫色效果的影響 取6份15 mL酶解液,加入30% H2O2溶液至H2O2濃度為0.6%,用1 mol/L NaOH調(diào)節(jié)pH至10,置于55 ℃水浴中分別反應(yīng)3、4、5、6、7和8 h。用色差儀測定色差值ΔE,計算脫色率;用分光光度計測定595 nm處的吸光度A595 nm,計算蛋白提取率。

1.2.3 正交實(shí)驗(yàn) 由于酶解液在300～800 nm波長內(nèi)無吸收峰,因此無法利用在某一波長處脫色前后的吸光度變化作為脫色的評價標(biāo)準(zhǔn),為此選取色差變化率為脫色指標(biāo)。采用最優(yōu)酶解工藝處理的酶解液進(jìn)行離心過濾得上清液,利用雙氧水脫色時考察雙氧水用量、pH、溫度、脫色時間4因素,進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn);以色差儀測量脫色前后的色差變化率和多肽損失率為指標(biāo)確定脫色效果,探究脫色的最優(yōu)條件,并對最優(yōu)的條件進(jìn)行驗(yàn)證。按照正交表L9(34)安排4因素3水平的正交實(shí)驗(yàn),見表1。

表1 正交實(shí)驗(yàn)水平因素表

1.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作 分別取六只試管,其中一只加入1.0 mL蒸餾水做空白,5只分別加入0.125、0.25、0.5、0.75和1 mL濃度為160 μg/mL小牛血清蛋白標(biāo)準(zhǔn)液,補(bǔ)充蒸餾水到1.0 mL。然后每只試管加入5.0 mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑,搖勻放置5 min,在595 nm處測定吸光值。以A595 nm吸光值為縱坐標(biāo),小牛血清蛋白的濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

回歸方程為Y=0.0019X+0.005,相關(guān)顯著性R2=0.9991。則原液中蛋白含量為a=Aa×0.0019+0.005,處理后溶液中蛋白含量為b=Ab×0.0019+0.005。則蛋白提取率計算公式為:

式中,c-蛋白提取率,%;a-原液中蛋白含量,μg/mL;b-處理后溶液中蛋白含量,μg/mL。

1.2.5 膠原含量、脫色率和分子量測定

1.2.5.1 膠原蛋白含量測定 配制濃度約200μg/mL的待測蛋白質(zhì)溶液,取一只試管加入1.0mL蒸餾水做空白,一支加入0.5mL待測蛋白質(zhì)溶液,補(bǔ)充蒸餾水到1.0mL,然后每支試管加入5.0mL考馬斯亮藍(lán)G-250試劑,搖勻放置5min后,在595nm處測定吸光值。取經(jīng)過處理的魷魚皮1g,加入6mol/L的鹽酸5mL。于沸水浴中加熱8h水解后,用蒸餾水補(bǔ)全6mL。吸取溶液1mL,稀釋50倍,調(diào)節(jié)pH=6,取1mL稀釋液,測定吸光度。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和稀釋倍數(shù),計算含量。

取酶解液上清液5mL,加入6mol/L的鹽酸5mL,置于沸水浴中水解4h,蒸餾水補(bǔ)足10mL。取1mL水解液用蒸餾水定容至100mL,取其中1mL溶液于試管中,進(jìn)行羥脯氨酸含量測定。

膠原蛋白比率(%)=樣品中羥脯酸含量×14.1/樣品質(zhì)量×100

膠原蛋白提取率(%)=樣品中膠原蛋白質(zhì)量/樣品質(zhì)量×膠原蛋白比率×100

1.2.5.2 膠原蛋白脫色率測定 用色差儀測定樣品脫色率由色差值ΔE來計算,即脫色率計算公式為:

式中,d-脫色率,%;ΔE原-原液色差值;ΔE樣-處理后溶液色差值。

1.2.5.3 膠原相對分子量測定 分別進(jìn)行配制12%的SDS-PAGE分離膠和5%的濃縮膠,等膠凝固后小心取出梳子,濾紙吸干水分。配置好的膠板裝進(jìn)垂直電泳槽中,加入SDS-電極緩沖液,充滿整個膠板。取事先用樣品緩沖液配置的不同蛋白樣品進(jìn)行不同卡槽加樣后,在電極緩沖液中加入幾滴溴酚藍(lán)指示劑。接好電源后以20mA進(jìn)行電泳,進(jìn)入分離膠后改為25mA電流進(jìn)行電泳,直至指示染料到達(dá)凝膠底部邊緣為止。結(jié)束電泳后取出膠板于染色液中,染色30～50min。使用脫色液進(jìn)行脫色,每隔3～5h更換一次脫色液,直至無蛋白處凝膠無色為止。

1.2.6 數(shù)據(jù)處理 實(shí)驗(yàn)結(jié)果利用統(tǒng)計分析軟件SPSS19.0,采用加權(quán)評分法。評分標(biāo)準(zhǔn)為:將各項指標(biāo)除以該列最大值再乘以100,為該項得分。根據(jù)膠原脫色率(x)和多糖含量(y)兩項指標(biāo)權(quán)衡,確定二者的權(quán)重系數(shù)均為0.5,對兩項指標(biāo)進(jìn)行加權(quán)求和,加權(quán)平均=0.5x+0.5y。

2 結(jié)果與分析

2.1 魷魚皮膠原相對分子量測定

從圖1中可以發(fā)現(xiàn),對于自制的膠原蛋白,泳道中出現(xiàn)了三條譜帶,有兩條位于100ku處,一條位于200ku處,分別對應(yīng)于膠原微結(jié)構(gòu)中的α1鏈,α2鏈和β鏈,β鏈?zhǔn)铅伶湹亩垠w,分子量是其二倍。這說明所提取的膠原三螺旋結(jié)構(gòu)保持完整,純度較高,接近于天然狀態(tài),由于實(shí)驗(yàn)過程中所使用的酶具有特異性,即只對膠原大分子鏈上的非膠原部分及末端肽等特定部位進(jìn)行切割,不會破壞膠原的天然三螺旋結(jié)構(gòu)。作為生物醫(yī)用的膠原蛋白,其自身的分子量是一項重要的檢測指標(biāo),與其他的性質(zhì)密切相關(guān),如止血性能、力學(xué)性能和耐熱性能等,作為生物質(zhì)材料使用的膠原蛋白應(yīng)不可使其過度降解,應(yīng)盡量保證其自身的天然狀態(tài),實(shí)驗(yàn)自制的膠原蛋白分子量300ku,符合膠原大分子的要求。

圖1 魷魚皮膠原蛋白的SDS-PAGE分析Fig.1 Analysis of Squid skin collagen by SDS-PAGE注:泳道A:蛋白Marker;泳道B:脫色前魷魚皮膠原蛋白;泳道C:脫色后魷魚皮膠原白。

2.2 最優(yōu)酶種類確定

以膠原蛋白提取率作為指標(biāo),比較不同蛋白酶的水解效果。四種蛋白酶單酶膠原蛋白提取率結(jié)果如圖2所示,通過四種蛋白酶進(jìn)行酶解膠原的提取研究發(fā)現(xiàn),胰蛋白酶對膠原的提取優(yōu)于胃蛋白酶、中性蛋白酶和酸性蛋白酶。可以看出在最佳酶解條件下,胰蛋白酶更適合膠原蛋白的提取,而且得到的膠原理化性能也好于其他酶類水解的膠原。因此,胰蛋白酶對于魷魚皮膠原的提取效果最好,提取率最高,可以作為后期酶解提取的魷魚皮膠原蛋白。

圖2 不同酶種類對魷魚皮膠原蛋白提取的影響Fig.2 Effect of different enzymes on the extraction of squid skin collagen

2.3 單因素實(shí)驗(yàn)

2.3.1 H2O2溶液濃度對脫色效果的影響 由圖3可以看出,當(dāng)H2O2溶液濃度從0.2%增至0.6%時,膠原蛋白脫色率和膠原蛋白蛋白提取率顯著增加;當(dāng)H2O2溶液濃度大于0.6%時,膠原蛋白脫色率有所緩慢增加,但膠原蛋白蛋白提取率迅速下降?？赡苡捎陔p氧水濃度超過閾值后,雙氧水對膠原蛋白氧化降解加劇,導(dǎo)致膠原蛋白提取率快速下降。兩因素相結(jié)合可以得出,雙氧水用量不宜過大,H2O2溶液濃度在0.6%時脫色效果最好。

圖3 H2O2濃度對脫色率和蛋白提取率的影響Fig.3 Effects of H2O2 concentrations on the decoloring rate and protein extraction rate

2.3.2 pH對脫色效果的影響 由圖4可以看出,當(dāng)脫色液pH從4增至8時,脫色率和蛋白提取率均增大;在脫色液pH為8時,膠原脫色率和提取率達(dá)到最大值;隨著脫色液pH繼續(xù)增大,蛋白提取率呈下降趨勢,脫色率快速下降。雙氧水為弱酸性,在酸性條件下較為穩(wěn)定,較低脫色液pH不利于雙氧水氧化脫色作用,在微酸性或微堿性條有利于雙氧水氧化能力強(qiáng),脫色率效果好,但堿性條件下雙氧水快速分解,不能發(fā)揮雙氧水氧化脫色作用。因此,脫色液pH控制在8左右,脫色效果較好。

圖4 pH對脫色率和蛋白提取率的影響Fig.4 Effects of pH values on the decoloring rate and protein extraction rate

2.3.3 溫度對脫色效果的影響 由圖5可以看出,當(dāng)溫度在25 ℃到55 ℃之間脫色率和蛋白提取率均增加,在55 ℃時出現(xiàn)最大值,隨著溫度繼續(xù)升高,脫色率和蛋白提取率呈下降趨勢。可能由于溫度的升高一定程度后,雙氧水分解加速,有效雙氧水含量下降,導(dǎo)致膠原蛋白脫色率下降。因此,結(jié)合兩因素可以得出,脫色溫度控制在55 ℃左右。

圖5 溫度對脫色率和蛋白提取率的影響Fig.5 Effects of temperatures on the decoloring rate and protein extraction rate

圖6 時間對脫色率和蛋白提取率的影響Fig.6 Effects of times on the decoloring rate and protein extraction rate

由圖5可以看出,當(dāng)時間在3～7 h時脫色率和蛋白提取率呈增加趨勢,在7 h時出現(xiàn)峰值,隨著時間繼續(xù)延長,脫色率變化不大,蛋白提取率有所下降趨勢。隨著時間延長,由于雙氧水氧化作用導(dǎo)致膠原蛋白的降解,使得蛋白提取率下降,結(jié)合兩因素可以得出,脫色時間控制在7 h內(nèi),脫色率和蛋白提取率較理想。

2.4 正交實(shí)驗(yàn)

由于各影響因素間的相互交叉影響,為了全面考察雙氧水脫色法的工藝參數(shù),根據(jù)單因素實(shí)驗(yàn)的結(jié)果,確定以雙氧水濃度(A)、pH(B)、溫度(C)、時間(D)4種因素進(jìn)行正交實(shí)驗(yàn),以脫色率和蛋白提取率為考察指標(biāo)得到各種條件下魷魚皮脫色的最佳條件。正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果與方差分析見表2和表3。

表2 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果

注:脫色率加權(quán)50%,蛋白提取率加權(quán)50%。

表3 正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果方差分析

注:*有顯著性影響,F0.05(2.2)=19.00;F0.01(2.2)=99。 由表2和表3的實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析得出各條件對魷魚皮脫色效果的影響順序由大到小依次為:pH、雙氧水濃度、時間、溫度。通過分析得出的最優(yōu)魷魚皮脫色工藝條件水平為:A1B1C3D2,最佳魷魚皮脫色工藝條件為:雙氧水濃度0.6%、pH8、溫度65 ℃、時間7 h。

2.5 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)

取魷魚皮酶解液3份各15 mL在上述最佳工藝條件下進(jìn)行穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn),結(jié)果見表3。

由表4可知,在最佳條件下,3次實(shí)驗(yàn)?zāi)z原蛋白的脫色率和蛋白提取率都達(dá)到了較高水平,平均值分別為78.76%和88.29%,并趨向于較強(qiáng)的穩(wěn)定性。

表4 驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果

這與正交實(shí)驗(yàn)分析所得的結(jié)果是一致的,說明該正交實(shí)驗(yàn)穩(wěn)定有效。張雪等[24]采用活性炭吸附法脫除魷魚皮膠原蛋白提取液中色素,在最優(yōu)條件下,魷魚皮膠原蛋白液的脫色率為45.6%,蛋白質(zhì)和氨基酸損耗率分別為19.65%和22.93%。劉閃等[25]采用粉狀活性炭鱘魚皮膠原蛋白肽酶解液脫色,在最優(yōu)條件下,水解產(chǎn)物脫色率為81.58%,蛋白質(zhì)回收率為82.5%。鄧曉龍等[26]采用大孔吸附樹脂脫色,對羅非魚魚鱗膠原蛋白肽脫色工藝進(jìn)行研究,在最優(yōu)條件下,多肽損失率為6.71%,終產(chǎn)物白度62.48%。因此,本研究利用雙氧水對魷魚皮膠原蛋白脫色工藝,具有膠原蛋白高脫色率和蛋白高回收率的優(yōu)勢,并且利用雙氧水脫色成本較低,具有潛在的應(yīng)用前景。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)探討了過氧化氫對魷魚皮膠原蛋白進(jìn)行脫色的工藝條件,設(shè)置了四個因素:雙氧水濃度、pH、溫度、時間,分別研究這四個因素對脫色結(jié)果的影響,得到最佳脫色工藝條件。經(jīng)過正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,四個因素的影響程度大小為:pH>雙氧水濃度>時間>溫度。正交實(shí)驗(yàn)的最佳工藝條件:雙氧水濃度0.6%、pH8、溫度55 ℃和時間7 h。經(jīng)三次重復(fù)最優(yōu)條件得到脫色率和蛋白提取率平均值分別為78.76%和88.29%。本研究得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果為放大實(shí)驗(yàn)或工業(yè)化生產(chǎn)提供理論依據(jù),也為擴(kuò)大魷魚皮膠原蛋白的應(yīng)用領(lǐng)域和提高其產(chǎn)品的附加值提供研究基礎(chǔ)。

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Study on preparation process of high degree transparency decolorization squid skin collagen

LIAO Miao-fei1,FU Wan-dong1,*,YANG Hui-cheng1,ZHANG Wei-jie2,ZHENG Bin1,ZHONG Ming-jie1

(1.Zhejiang Marine Development Research Institute,Zhoushan 316021,China; 2.College of Life Science and Engineering,Lanzhou University of Technology,Lanzhou 730050,China)

In order to improve transparency degree and application value of squid skin collagen,this paper studied the process on using hydrogen peroxide oxidation to decolorize the pigment of squid skin collagen. With one-factor-at-a-time method and orthogonal experiment of the squid skin collagen obtained by enzymatic hydrolysis,the optimal protein recovery and decolorization process conditions of squid skin collagen were the concentration of hydrogen peroxide of 0.6%,PH value of 8.0,temperature of 50 ℃,and the reaction time of 7 h. Under the optimal protein recovery and decolorization process conditions,the decolorization rate and protein recovery rate of squid skin collagen were 78.76% and 88.29%,respectively. So,the results of this study have better collagen recovery and decolorization effect and have potential application prospects.

Squid skin;collagen;H2O2solution;decolorization rate;protein extraction rate

2016-06-13

廖妙飛(1984-),女,碩士,工程師,研究方向:海洋生物制品制備與利用,E-mail:miaofeiliao@163.com。

*通訊作者:付萬冬(1979-),男,博士,高級工程師,研究方向:海洋生物資源綜合利用,E-mail:fuwandong@126.com。

浙江省重大科技專項重大社會發(fā)展項目(2011C02003);浙江省公益技術(shù)研究農(nóng)業(yè)項目(2016C32081)。

TS

A

1002-0306(2016)24-0000-00

10.13386/j.issn1002-0306.2016.24.000