文│李賀俠（安徽省和縣畜牧獸醫(yī)局）

肉鴿大腸桿菌的分離鑒定與藥敏試驗(yàn)

文│李賀俠（安徽省和縣畜牧獸醫(yī)局）

當(dāng)前，在肉鴿養(yǎng)殖場中，大腸桿菌病已經(jīng)逐漸成為重要的常見細(xì)菌性傳染病之一。不同年齡段的肉鴿都可能感染大腸桿菌病，該病對(duì)幼齡鴿的危害比較嚴(yán)重，死亡率高。隨著肉鴿規(guī)模化、集約化養(yǎng)殖的持續(xù)發(fā)展，飼養(yǎng)管理不善、衛(wèi)生狀況不良、氣候突變、營養(yǎng)失衡以及其他應(yīng)激因素均可誘發(fā)該病。肉鴿大腸桿菌病是由不同血清型的大腸桿菌引起的以腹瀉為主要癥狀的一類疾病，臨床表現(xiàn)為呼吸困難，精神萎靡，呆立閉眼，羽毛雜亂，腿爪干燥，排黃白色稀糞等，發(fā)病后死亡率較高。由于大腸桿菌的血清型較多，對(duì)藥物的敏感程度也不一樣，且易產(chǎn)生耐藥性，在治療時(shí)存在一定的盲目性，治療后又易復(fù)發(fā)，容易對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成較大損失。

筆者結(jié)合工作實(shí)際，通過對(duì)某肉鴿養(yǎng)殖戶送檢的以腹瀉為特征且病理解剖發(fā)現(xiàn)肝臟表面有針尖大小灰白色壞死灶的病死肉鴿進(jìn)行病原的分離鑒定，選用藥敏試驗(yàn)中篩選出的敏感藥物進(jìn)行治療，取得較好效果，為該病的診斷、治療提供參考依據(jù)。

一、材料和方法

1.材料。

（1）病料。某肉鴿養(yǎng)殖戶送檢的以腹瀉為特征的病死肉鴿10只。

（2）培養(yǎng)基。麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基以及各類糖發(fā)酵管等。

（3）藥品與試劑。革蘭氏碘液、95%乙醇溶液、沙黃溶液、糖發(fā)酵試管、甲基紅試劑等；藥敏紙片（頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢唑啉、頭孢西丁、奧復(fù)星、頭孢哌酮、先鋒霉素、慶大霉素、頭孢拉定、頭孢呋辛、克林霉素、鏈霉素、阿米卡星、先鋒霉素V、氨芐西林、環(huán)丙沙星、卡那霉素等17種抗菌藥物紙片）購自杭州天和微生物試劑有限公司。

2.方法。

（1）細(xì)菌分離培養(yǎng)。無菌取病死肉鴿的心血、肝臟組織分別劃線接種于麥康凱瓊脂平板，37℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，取若干個(gè)菌落涂片，革蘭氏染色鏡檢，在油鏡下觀察細(xì)菌的形態(tài)及染色特性。挑取疑為大腸桿菌的菌落再劃線接種于麥康凱瓊脂平板，直至純化為止，并對(duì)純化后的細(xì)菌冷凍保存，備用。

（2）細(xì)菌生化試驗(yàn)。取純培養(yǎng)物分別接種于葡萄糖、乳糖、麥芽糖等自制的糖發(fā)酵管中，37℃培養(yǎng)24～48小時(shí)，觀察發(fā)酵管的反應(yīng)情況。取純培養(yǎng)物分別做糖發(fā)酵試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)、甲基紅試驗(yàn)、尿素酶利用實(shí)驗(yàn)。

（3）細(xì)菌的藥物敏感試驗(yàn)。參考相關(guān)文獻(xiàn)，將分離的菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，觀察抑菌環(huán)情況。共檢測17種藥物：頭孢曲松、頭孢他啶、頭孢唑啉、頭孢西丁、奧復(fù)星、頭孢哌酮、先鋒霉素、慶大霉素、頭孢拉定、頭孢呋辛、克林霉素、鏈霉素、阿米卡星、先鋒霉素V、氨芐西林、環(huán)丙沙星、卡那霉素。以抑菌圈直徑大小作為藥物敏感性高低的判定標(biāo)準(zhǔn)，具體情況為：抑菌圈直徑大于15毫米者為高敏藥物；直徑為10～15毫米者為中敏；藥物直徑為10毫米以下者為耐藥。

二、結(jié)果與分析

1.細(xì)菌分離培養(yǎng)。分離菌菌落在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上呈紅色圓形、邊緣整齊、表面光滑、濕潤、隆起。革蘭氏染色鏡檢，分離菌為革蘭氏陰性中等大小的桿菌，菌體兩端鈍圓，單個(gè)存在。

2.生化試驗(yàn)。分離菌能利用葡萄糖、麥芽糖、乳糖，產(chǎn)酸產(chǎn)氣；吲哚試驗(yàn)為陽性；MR試驗(yàn)為陽性，VP試驗(yàn)為陰性。結(jié)果表明，該分離菌株為大腸桿菌。

3.藥敏試驗(yàn)結(jié)果。藥敏試驗(yàn)結(jié)果顯示，該分離菌株只對(duì)頭孢曲松、頭孢西丁、頭孢哌酮、先鋒霉素V、環(huán)丙沙星5種藥物高度敏感，對(duì)頭孢他啶、奧復(fù)星、先鋒霉素、氨芐西林、阿米卡星5種藥物中度敏感，而對(duì)頭孢唑啉、慶大霉素、頭孢拉定、頭孢呋辛、卡那霉素、克林霉素、鏈霉素7種藥物有耐藥性（見表1）。

表1 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

三、討論

細(xì)菌的分離培養(yǎng)和生化試驗(yàn)結(jié)果表明，該群鴿所患疾病為大腸桿菌病。針對(duì)該場發(fā)病情況，建議采取對(duì)發(fā)病鴿舍、用具、環(huán)境進(jìn)行徹底消毒，病死雛鴿進(jìn)行無害化處理，加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，降低飼養(yǎng)密度等措施，并根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用頭孢曲松進(jìn)行治療，用藥4天后電話回訪養(yǎng)殖戶，已無鴿只死亡，病情也得到有效控制。

大腸桿菌在環(huán)境中廣泛存在，繼發(fā)感染以及環(huán)境不良等均可誘發(fā)該病。該病主要侵害幼齡鴿群，且發(fā)病后很難繼續(xù)存活，病死鴿又造成該病的繼續(xù)傳播，所以對(duì)養(yǎng)鴿業(yè)造成極大的威脅，成為養(yǎng)鴿業(yè)中日益突出的問題。加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，保持鴿舍衛(wèi)生清潔，做好消毒工作，合理通風(fēng)，安排合理的飼養(yǎng)密度，及時(shí)更換巢窩，供應(yīng)優(yōu)質(zhì)飼料和合格的飲用水，采取措施減少與降低浮塵，可有效預(yù)防大腸桿菌病。由于鴿大腸桿菌耐藥性的廣泛存在，因此在鴿大腸桿菌病的臨床治療中，通過藥敏試驗(yàn)篩選出高敏藥物對(duì)發(fā)病鴿進(jìn)行治療，避免耐藥性的產(chǎn)生具有較大的意義。