郭 迪，李宏云△，楊 華

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院:1.呼吸內(nèi)科;2.普通外科，鄭州 450052)

miRNA-152表達(dá)與NSCLC對(duì)順鉑耐藥的關(guān)系及其機(jī)制研究

郭 迪1，李宏云1△，楊 華2

(鄭州大學(xué)第五附屬醫(yī)院:1.呼吸內(nèi)科;2.普通外科，鄭州 450052)

目的 研究微小RNA-152(miRNA-152)在非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)順鉑(DDP)耐藥過程中的作用機(jī)制。方法 實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)檢測(cè)NSCLC細(xì)胞株A549及其DDP耐藥株A549/DDP細(xì)胞內(nèi)的miRNA-152水平。通過轉(zhuǎn)染miRNA-52模擬物(miRNA-152 mimic)以提高A549/DDP細(xì)胞內(nèi)的microRNA-152水平。MTT試驗(yàn)、倒置相差顯微鏡技儀和流式細(xì)胞術(shù)觀察上調(diào)miRNA-152對(duì)細(xì)胞增殖及凋亡的影響，同時(shí)采用qRT-PCR和Western blot技術(shù)觀察細(xì)胞內(nèi)Bcl-2及核轉(zhuǎn)錄因子-κB(NF-κB)水平變化。結(jié)果 A549/DDP細(xì)胞中存在miRNA-152的低表達(dá)，Bcl-2及NF-κB的高表達(dá)。上調(diào)miRNA-152后，DDP造成的A549/DDP細(xì)胞增殖抑制率和凋亡率顯著高于未上調(diào)miRNA-152的細(xì)胞，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。此外，miRNA-152 mimic轉(zhuǎn)染可顯著降低A549/DDP細(xì)胞中的Bcl-2及NF-κB表達(dá)。結(jié)論 低miRNA-152表達(dá)可能引起NSCLC對(duì)DDP的耐藥，miRNA-152可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2及NF-κB的水平介導(dǎo)NSCLC細(xì)胞對(duì)順鉑的敏感性。

癌,非小細(xì)胞肺；微小RNAs；Bcl-2；核因子κB；順鉑；藥物耐受性

非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer，NSCLC)的生長(zhǎng)分裂較慢，擴(kuò)散轉(zhuǎn)移較晚，因此大部分患者在首診時(shí)已經(jīng)進(jìn)入進(jìn)展期，喪失了手術(shù)根治的時(shí)機(jī)。這種情況下，NSCLC的非手術(shù)治療就成為了治療的重要環(huán)節(jié)[1]。非手術(shù)治療主要包括靶向治療和化學(xué)治療，對(duì)于表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)突變陽(yáng)性的NSCLC患者來(lái)說(shuō)，首選方案為EGFR-酪氨酸激酶抑制劑(tyrosine kinase inhibitor,TKI)靶向治療，如使用吉非替尼等藥物。而對(duì)于EGFR突變陰性的NSCLC患者EGFR-TKI的使用效果有限，因此這類患者首選化學(xué)治療[2-3]?；瘜W(xué)治療方案中，以鉑類藥物為基礎(chǔ)的聯(lián)合化學(xué)治療應(yīng)用廣泛，如順鉑(cisplatin，DDP)方案的效果已經(jīng)得到臨床證實(shí)。但是NSCLC患者對(duì)鉑類藥物的耐藥現(xiàn)象同樣不容忽視，進(jìn)一步探索NSCLC患者對(duì)鉑類藥物耐藥的機(jī)制具有重要意義[4]。近年來(lái)微小RNA(microRNA,miRNA)的轉(zhuǎn)錄后調(diào)控作用備受矚目，大量研究發(fā)現(xiàn)miRNA的表達(dá)變化與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及耐藥機(jī)制有關(guān)。研究證實(shí)NSCLC患者存在miRNA-152的低表達(dá)[5]，但關(guān)于miRNA-152表達(dá)與NSCLC對(duì)鉑類藥物耐藥之間的關(guān)系還鮮有研究。因此，本研究探討耐藥的A549細(xì)胞中miRNA-152表達(dá)變化，觀察其對(duì)DDP敏感性的影響，并初步闡述其介導(dǎo)耐藥的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑和材料 人肺腺癌A549細(xì)胞株購(gòu)自上海中科院細(xì)胞庫(kù)，DDP耐藥A549/DDP細(xì)胞株購(gòu)自上海斯信生物科技有限公司。胎牛血清和DMEM培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco公司。miRNA快速提取試劑盒購(gòu)自北京百泰克生物技術(shù)有限公司。ImProm-ⅡTM逆轉(zhuǎn)錄試劑盒、GO Taq?qPCR Master Mix試劑盒購(gòu)自普洛麥格(北京)生物技術(shù)有限公司。Trizol試劑及LipofectamineTM2000購(gòu)自美國(guó)Invitrogen公司。CCK-8試劑盒購(gòu)自上海博谷生物科技有限公司。ECL發(fā)光試劑盒購(gòu)自北京普利來(lái)生物科技有限公司。鼠抗人Bcl-2抗體、鼠抗人NF-κB抗體、鼠抗人GAPDH抗體、二抗購(gòu)自英國(guó)Abcam公司。miRNA-152模擬物購(gòu)自上海吉瑪公司。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng) A549細(xì)胞株培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基。A549/DDP細(xì)胞株培養(yǎng)于含12%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基，正常傳代3次后，須向培養(yǎng)基加入DDP，并維持DDP水平為2 μg/mL以保持其耐藥性。培養(yǎng)環(huán)境均為5% CO2，37 ℃。A549/DDP細(xì)胞的耐藥性已經(jīng)在預(yù)試驗(yàn)中得到驗(yàn)證，耐藥指數(shù)約為4.51。

1.3 實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄PCR(qRT-PCR)檢測(cè)miRNA-152 使用miRNA 快速提取試劑盒提取并純化A549細(xì)胞及A549/DPP細(xì)胞中的miRNA。使用ImProm-ⅡTM逆轉(zhuǎn)試劑盒將提取的miRNA轉(zhuǎn)錄為cDNA。以cDNA為模板進(jìn)行PCR擴(kuò)增，擴(kuò)增體系和條件嚴(yán)格參照廠商提供的說(shuō)明書。miR-152正向引物序列為5′-GAG TGC TCA GTG CAT GAC AG-3′，反向引物序列為5′-GTG CAG GGT CCG AGG T-3′。采用U6 RNA作為內(nèi)參，其正向引物序列為5′-CTC GCT TCG GCA GCA CA-3′，反向引物序列為5′-AAC GCT TCA CGA ATT TGC GT-3′。以2-ΔΔCt法計(jì)算miRNA-152的相對(duì)表達(dá)情況。其中ΔCt=Ct目標(biāo)-Ct內(nèi)參。

1.4 qRT-PCR檢測(cè)Bcl-2 mRNA和NF-κB mRNA 使用Trizol試劑提取A549細(xì)胞及A549/DPP細(xì)胞中的總RNA。ImProm-ⅡTM逆轉(zhuǎn)錄試劑盒對(duì)提取出的總RNA進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，以合成cDNA。逆轉(zhuǎn)錄體系參照試劑盒提供的說(shuō)明書。使用GO Taq?qPCR Master Mix試劑盒對(duì)上述合成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增。Bcl-2的正向引物為5′-TTC TTT GAG TTC GGT GGG GTC-3′，反向引物為5′-TGC ATA TTT GTT TGG GGC AGG-3′；NF-κB的正向引物為5′-CTG CAT TTC CAC AGT TTC CAG AACC-3′，反向引物為5′-ACG CTG CTC TTC TAT AGG AAC TTG G-3′；內(nèi)參GAPDH的正向引物為5′-ACC ACA GTC CAT GCC ATC AC-3′，反向引物為5′-TCC ACC ACC CTG TTG CTG TA-3′。反應(yīng)體系和方案參照試劑盒說(shuō)明書。使用2-△△CT法分析目的mRNA的相對(duì)表達(dá)情況。

1.5 Western blot法檢測(cè)Bcl-2和NF-κB 提取A549細(xì)胞及A549/DPP細(xì)胞中的總蛋白，使用12%的聚丙烯酰胺凝膠進(jìn)行電泳，并轉(zhuǎn)膜。轉(zhuǎn)膜結(jié)束后，使用5%脫脂奶粉室溫封閉1 h。分別使用1∶1 500的鼠抗人Bcl-2抗體，1∶2 000的鼠抗人NF-κB抗體及鼠抗人GAPDH抗體，4 ℃孵育12 h。接著使用磷酸鹽緩沖液-Tween 20(PBST)洗滌3次，除去未結(jié)合的一抗。二抗稀釋后(1∶1 000)與膜接觸，室溫下孵育1～2 h，ECL發(fā)光試劑盒顯色并分析條帶。

1.6 miRNA-152的過表達(dá) 轉(zhuǎn)染前將A549/DDP細(xì)胞轉(zhuǎn)移至不含DDP的培養(yǎng)基中常規(guī)培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁后，消化細(xì)胞制備細(xì)胞懸液，以6 000/孔的細(xì)胞密度將細(xì)胞接種于96孔板，當(dāng)細(xì)胞匯合度達(dá)到80%左右時(shí)，使用LipofectamineTM2000轉(zhuǎn)染試劑盒將miRNA-152模擬物(miRNA-152 mimic)轉(zhuǎn)入細(xì)胞，miRNA-152 mimic的工作水平為50 nmol/L，相同方法轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)miRNA mimic作為陰性對(duì)照。繼續(xù)培養(yǎng)48 h，qRT-PCR驗(yàn)證轉(zhuǎn)染效果。

1.7 CCK-8試驗(yàn)及形態(tài)學(xué)檢查分析miRNA-152上調(diào)對(duì)細(xì)胞抑制率的影響 將A549/DDP細(xì)胞分為5組：未經(jīng)DDP處理且未任何轉(zhuǎn)染處理的A549/DDP細(xì)胞(A組)，未經(jīng)DDP處理，但經(jīng)無(wú)關(guān)miRNA mimic轉(zhuǎn)染處理的A549/DDP細(xì)胞(B組)，未經(jīng)DDP處理，但經(jīng)miRNA-152 mimic轉(zhuǎn)染處理的A549/DDP細(xì)胞(C組)，經(jīng)3 μmol/L DDP處理，但未經(jīng)任何轉(zhuǎn)染處理的A549/DDP細(xì)胞(D組)，經(jīng)3 μmol/L DDP處理且經(jīng)無(wú)關(guān)miRNA mimic轉(zhuǎn)染處理的A549/DDP細(xì)胞(E組)，經(jīng)3 μmol/L DDP處理且經(jīng)miRNA-152 mimic轉(zhuǎn)染處理的A549/DDP細(xì)胞(F組)。處理24 h后，MTT法計(jì)算各組抑制率。倒置相差顯微鏡觀察各組細(xì)胞的增殖情況。

1.8 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率 細(xì)胞分組同上，各組處理時(shí)間達(dá)到后，常規(guī)收集細(xì)胞，使用Annexin V-FITC試劑盒內(nèi)的緩沖液重新懸浮細(xì)胞。依此加入5 μL Annexin V-FITC和10 μL碘化丙啶染色液，混勻后室溫避光孵育15 min上機(jī)檢測(cè)。

1.9 qRT-PCR及Western blot分析miRNA-152過表達(dá)對(duì)細(xì)胞Bcl-2及NF-κB表達(dá)的影響 培養(yǎng)未經(jīng)轉(zhuǎn)染的A549/DDP細(xì)胞(空白對(duì)照組)，轉(zhuǎn)染miRNA-152 mimic 的A549/DDP細(xì)胞(試驗(yàn)組)，以及轉(zhuǎn)染無(wú)關(guān)miRNA mimic的A549/DDP細(xì)胞(陰性對(duì)照組)48 h。按上文所述方法提取3種細(xì)胞中的總RNA及總蛋白樣本。qRT-PCR及Western blot分析方法同上，相關(guān)引物和抗體均同前，檢測(cè)miRNA-152上調(diào)后A549/DDP細(xì)胞中Bcl-2及NF-κB的表達(dá)變化。

2 結(jié) 果

2.1 A549/DDP細(xì)胞的miRNA-152表達(dá) 與A549細(xì)胞相比，A549/DDP細(xì)胞miRNA-152表達(dá)較低，相對(duì)降低的倍數(shù)為(0.65±0.04)倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見圖1。

圖1 A549及A549/DDP細(xì)胞中的miRNA-152相對(duì)表達(dá)水平

2.2 A549/DDP細(xì)胞的Bcl-2及NF-κB表達(dá) 與A549細(xì)胞相比，A549/DDP細(xì)胞Bcl-2及NF-κB mRNA 表達(dá)水平較高，分別相對(duì)提高了(1.53±0.21)倍和(1.37±0.13)倍，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot分析證實(shí)，Bcl-2及NF-κB蛋白表達(dá)同樣在A549/DDP細(xì)胞中較高，見圖2、3。

A：Bcl-2；B:NF-κB。

圖2 A549及A549/DDP細(xì)胞中的Bcl-2、NF-κB mRNA相對(duì)表達(dá)水平

圖3 A549及A549/DDP細(xì)胞中的Bcl-2及NF-κB蛋白表達(dá)水平

2.3 miRNA-152表達(dá)上調(diào)增加A549/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性 如圖4所示，B、C、D、E、F組的細(xì)胞增殖抑制率分別為(7.5±2.5)、(6.8±2.1)、(22.6±3.8)、(23.4±3.4)、(41.3±4.4)%。其中F組細(xì)胞抑制率顯著高于D組和E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。形態(tài)學(xué)結(jié)果顯示，DDP能夠抑制細(xì)胞增殖且F組細(xì)胞增殖顯著低于D組，見圖5。

圖4 3 μmol/L DDP處理 A549/DDP細(xì)胞24 h后的細(xì)胞抑制率

圖5 各組細(xì)胞倒置相差顯微鏡圖像(×200)

A:流式細(xì)胞分析圖；B：凋亡分析圖。

圖6 3 μmol/L DDP處理 A549/DDP細(xì)胞24 h后的流式細(xì)胞分析圖和凋亡分析圖

2.4 miRNA-152表達(dá)上調(diào)增加DDP引起的A549/DDP細(xì)胞凋亡 如圖6所示，A、B、C、D、E、F組的細(xì)胞凋亡率分別為(3.8±1.3)、(4.4±0.9)、(4.8±1.1)、(14.5±2.2)、(13.2±1.9)、(22.3±2.1)%。其中F組細(xì)胞凋亡率顯著高于D組和E組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.5 miRNA-152表達(dá)上調(diào)可以降低A549/DDP細(xì)胞中Bcl-2及NF-κB的表達(dá) qRT-PCR發(fā)現(xiàn)，試驗(yàn)組Bcl-2及NF-κB mRNA 水平較空白對(duì)照組及陰性對(duì)照組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。Western blot結(jié)果顯示，試驗(yàn)組Bcl-2及NF-κB 蛋白水平也顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。圖7、8。

A：Bcl-2;B：NF-κB。

圖7 miRNA-152 mimic 轉(zhuǎn)染對(duì)A549/DDP細(xì)胞中Bcl-2、NF-κB mRNA水平的影響

圖8 miRNA-152 mimic 轉(zhuǎn)染對(duì)A549/DDP細(xì)胞中Bcl-2和NF-κB mRNA水平的影響

3 討 論

DDP的耐藥機(jī)制較為復(fù)雜，主要涉及藥物轉(zhuǎn)運(yùn)、藥物解毒、細(xì)胞凋亡等多個(gè)方面，常見的機(jī)制有如下幾個(gè)方面：(1)細(xì)胞膜上的分子泵表達(dá)異常，大量藥物排出細(xì)胞外，導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的藥物水平降低，如人類多藥耐藥基因編碼的P-gp過表達(dá)引起的耐藥，P-gp由人類多藥耐藥基因(mul-tidrug resistance gene，MDR)家族中的mdr1編碼產(chǎn)生，定位于細(xì)胞膜，是一種能量依賴性的分子泵，它能將DDP或其他化學(xué)治療藥物泵出細(xì)胞外，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞內(nèi)的藥物水平降低或者藥物重分布[6]。(2)細(xì)胞的藥物解毒效應(yīng)增強(qiáng)，也導(dǎo)致藥物代謝、排除增加或者藥物毒性減少，如谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶π家族的表達(dá)異常引起的耐藥，谷胱甘肽轉(zhuǎn)硫酶π可增加藥物極性、清除藥物的代謝產(chǎn)物、阻止藥物與腫瘤細(xì)胞的DNA結(jié)合及催化谷胱甘肽與親電子物質(zhì)結(jié)合、消除化學(xué)治療藥物產(chǎn)生的活性氧損傷，避免細(xì)胞膜上的脂質(zhì)氧化[7]。(3)DNA的修復(fù)功能異常，如拓?fù)洚悩?gòu)酶Ⅱ的突變會(huì)造成DDP耐藥。(4)凋亡調(diào)控蛋白的異常，DDP可能通過一些凋亡調(diào)控因子促進(jìn)細(xì)胞凋亡，這些調(diào)控因子異常時(shí)，可能造成DDP的療效降低[8]。

很多關(guān)于腫瘤的研究開始關(guān)注miRNA與腫瘤發(fā)生發(fā)展及耐藥現(xiàn)象的關(guān)系。miRNA是一類長(zhǎng)約21～25 nt的非編碼小分子RNA，其在轉(zhuǎn)錄后水平上抑制靶基因的表達(dá)，從而調(diào)控細(xì)胞的增殖、凋亡等生命現(xiàn)象。越來(lái)越多的研究證實(shí)，miRNA與腫瘤關(guān)系密切，影響腫瘤的進(jìn)展、分化、轉(zhuǎn)移甚至耐藥等[9]。特別是耐藥是臨床上腫瘤內(nèi)科治療亟待解決的瓶頸問題，尋找可以用于逆轉(zhuǎn)耐藥的潛在的miRNA靶點(diǎn)引起人們廣泛的興趣。有研究表明，乳腺癌的阿霉素耐藥株MCF-7/ADR與非耐藥株相比，存在36個(gè)miRNA的表達(dá)差異[10]。還有研究發(fā)現(xiàn)，miR-17～92基因簇與卵巢漿液性癌化學(xué)治療耐藥有關(guān)，可用于化學(xué)治療效果的評(píng)估[11]。本研究發(fā)現(xiàn)與非耐藥的A549細(xì)胞相比，對(duì)DDP耐藥的A549/DDP細(xì)胞存在miR-152的低表達(dá)，因此，作者認(rèn)為較低的miR-152表達(dá)抑制腫瘤細(xì)胞的凋亡，不利于治療。此觀點(diǎn)與既往的一些研究結(jié)果類似，如有研究發(fā)現(xiàn)miRNA-152可以抑制NSCLC的生長(zhǎng)和侵襲能力，過低的miRNA-152表達(dá)增加了腫瘤細(xì)胞增殖[5]。

當(dāng)然，miRNA在腫瘤的耐藥中要發(fā)揮作用，必然通過其靶基因，具體機(jī)制涉及：(1)miRNA可以調(diào)節(jié)一系列耐藥相關(guān)蛋白。如miR-298可以抑制MDR-1的表達(dá)，進(jìn)而減少P-糖蛋白的表達(dá)，起到緩解乳腺癌細(xì)胞耐藥的作用。相反，miR-27a激活MDR-1，引起腫瘤細(xì)胞耐藥[12]；(2)miRNA可以影響藥物的靶點(diǎn)蛋白，從而引起耐藥性的改變。如在小細(xì)胞肺癌中，miR-126可以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子為靶基因，減少其表達(dá)，后者為貝伐單抗的靶點(diǎn)，因此miR-126可以增加miRNA對(duì)貝伐單抗的敏感性[13]；(3)miRNA可以影響藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)。研究發(fā)現(xiàn)miR-206可以靶向抑制連接蛋白，后者發(fā)揮轉(zhuǎn)運(yùn)藥物的功能，其功能受限后，會(huì)導(dǎo)致藥物不能向鄰近細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)；(4)miRNA可以影響藥物引起的細(xì)胞死亡。如miR-21可以下調(diào)Bax的水平，從而抑制凋亡發(fā)生[9]。

雖然很多研究發(fā)現(xiàn)miR-152在腫瘤中存在低表達(dá)，且具有抑制腫瘤的功能[14-15]，但未見有研究報(bào)道m(xù)iR-152與化學(xué)治療耐藥的關(guān)系。本研究中，使用miR-152 minic上調(diào)A549/DDP細(xì)胞的miR-152后，發(fā)現(xiàn)原本耐藥的細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性提高了。同時(shí)發(fā)現(xiàn)miR-152 mimic降低耐藥細(xì)胞中Bcl-2和NF-κB的表達(dá)水平。因此，作者認(rèn)為miR-152可能通過調(diào)節(jié)Bcl-2和NF-κB發(fā)揮藥物敏感性的調(diào)節(jié)作用。Bcl-2和NF-κB均為公認(rèn)的抗凋亡基因。大量研究證實(shí)，肺癌、胃癌、卵巢癌，以及結(jié)腸癌等均存在Bcl-2和NF-κB過表達(dá)，二者的抗凋亡作用在腫瘤細(xì)胞的惡性增殖過程中扮演重要角色，與侵襲和轉(zhuǎn)移行為密切相關(guān)[16-17]。在耐藥性研究方面，Hall等[18]發(fā)現(xiàn)Bcl-2可以作為生殖系統(tǒng)腫瘤化學(xué)治療的靶點(diǎn)，較高的Bcl-2意味著較差的預(yù)后。Sun等[19]發(fā)現(xiàn)肺腺癌A549細(xì)胞中的NF-κB表達(dá)過高，抑制NF-κB的表達(dá)可以增加A549對(duì)化學(xué)治療藥物的敏感性。本研究中miR-152表達(dá)上調(diào)后，Bcl-2和NF-κB表達(dá)減少，抗凋亡減弱，這可以解釋為何原本耐藥的A549/DDP細(xì)胞對(duì)DDP的敏感性得到了提高。但Bcl-2和NF-κB是否是miR-152的直接靶基因，還是miR-152調(diào)節(jié)通路下游的某個(gè)環(huán)節(jié)，需要進(jìn)一步的研究證實(shí)。

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Relation between microRNA-152 expression and cisplatin resistance in non-small cell lung cancer cells and its mechanism

GuoDi1,LiHongyun1△,YangHua2

(1.DepartmentofRespiration;2.DepartmentofGeneralSurgery,FifthAffiliatedHospitalofZhengzhouUniversity,Zhengzhou,Henan450052,China)

Objective To investigate the action mechanism of microRNA-152(miRNA-152) in the cisplatin(DDP) resistance process in non-small cell lung cancer (NSCLC).Methods The miRNA-152 level in NSCLC cell line A549 and its cisplatin-resistant cell line A549/DDP was detected by the real time quantitative PCR(qRT-PCR).miRNA-152 mimic was transfected for increasing the intracellular miRNA-152 level in A549/DDP.The MTT assay,inverted miroscope technique and flow cytometry were adopted to observe the effect of up-regulating miRNA-152 on cell proliferation inhibition and apoptosis,meanwhile,the level changes of intracellular Bcl-2 and NF-κB were also observed by adopting qRT-PCR and Western blot.Results The low expression of miRNA-152 and the high expression of Bcl-2 and NF-κB were found in A549/DDP cells.Up-regulation of miRNA-152 enhanced the inhibitory effect of DDP in A549/DDP cells.Furthermore,after up-regulating miRNA-152,the inhibiting rate and apoptosis rate of A549/DDP cells caused by DDP were significantly higher than those in the cells without up-regulating miRNA-152,the difference was statistically significant(P<0.05).In addition,miRNA-152 mimic transfection significantly decreased the expression of Bcl-2 and NF-κB in A549/DDP cells.Conclusion Low expression of miRNA-152 may induce the resistance of NSCLC to DDP,miRNA-152 could mediate the sensitivity of NSCLC cells to DDP via regulating Bcl-2 and NF-κB levels.

carcinoma,non-small-cell lung;microRNAs；Bcl-2；NF-κB;cisplatin;drug tolerance

郭迪(1980-)，主治醫(yī)師，碩士，主要從事呼吸內(nèi)科研究?！?/p>

，E-mail:drliofres@163.com。

? 著·

10.3969/j.issn.1671-8348.2016.10.001

R734.2

A

1671-8348(2016)10-1297-05

2015-11-08

2015-12-20)