獨(dú)瑜

（甘肅省隴南市禮縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，甘肅 禮縣 742200）

減小土壤有效磷測(cè)定誤差的方法探討

獨(dú)瑜

（甘肅省隴南市禮縣農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心，甘肅 禮縣 742200）

土壤有效磷含量是土壤肥力的重要指標(biāo)。為了準(zhǔn)確測(cè)定土壤中有效磷的含量，更好地指導(dǎo)施肥，本人經(jīng)過(guò)多年試驗(yàn)，在有效磷測(cè)定試劑的選擇、配制以及操作規(guī)程各環(huán)節(jié)不斷總結(jié)經(jīng)驗(yàn)，提出了各環(huán)節(jié)應(yīng)注意的事項(xiàng)，以減小有效磷測(cè)定誤差。

土壤有效磷；操作規(guī)程；注意事項(xiàng)；誤差

一、正確選擇測(cè)定方法和測(cè)定儀器

根據(jù)《全國(guó)測(cè)土配方施肥技術(shù)規(guī)范》的要求，土壤有效磷含量的測(cè)定一般采用碳酸氫鈉提取-鉬銻抗比色法，使用儀器為北京普析通儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)的T6S紫外分光光度計(jì)，往復(fù)式振蕩器等。

二、準(zhǔn)確配制試劑

嚴(yán)格按《規(guī)范》要求的步驟、順序進(jìn)行準(zhǔn)確配制，在試劑的配制和保存過(guò)程中，要經(jīng)常注意觀察藥品、試劑的顏色，發(fā)現(xiàn)異常，應(yīng)及時(shí)找原因，重新配制。同時(shí)，要選用質(zhì)量合格的藥品、試劑，最好使用固定生產(chǎn)廠家的藥品和試劑，以減小藥品、試劑帶來(lái)的系統(tǒng)誤差。

（一）碳酸氫鈉浸提劑的配制方法及注意事項(xiàng)

1.嚴(yán)格控制酸堿度。

嚴(yán)格按照操作規(guī)程配制好浸提劑后，要用10%氫氧化鈉溶液調(diào)PH值8.5，然后用水稀釋至1 000 mL，貯存于聚乙烯或玻璃瓶中備用。注意，在首次調(diào)節(jié)PH時(shí)，必須少量多次地添加氫氧化鈉，如果調(diào)節(jié)的PH值＞8.5，需用稀鹽酸回調(diào)。第二次以后可直接向碳酸氫鈉溶液中加入首次記下的氫氧化鈉的用量，然后用酸度計(jì)校準(zhǔn)即可。如更換不同批號(hào)的碳酸氫鈉或氫氧化鈉時(shí)，則須按首次配制調(diào)節(jié)PH。配制好的碳酸氫鈉浸提劑貯存于磨口玻璃瓶中，將瓶塞塞好，待用。如貯存期超過(guò)15天左右，使用時(shí)應(yīng)重新校正PH。

2.嚴(yán)格控制水土比。

將百分之一電子天平預(yù)熱30min，校準(zhǔn)后準(zhǔn)確稱取2.50g風(fēng)干土樣于15Oml塑料瓶中，再準(zhǔn)確量取50ml碳酸氫鈉浸提劑加入塑料瓶中，擰緊瓶蓋，上下?lián)u動(dòng)多次。一方面檢查瓶蓋是否密封不漏液：另一方面將土、液搖勻，以確保在振蕩過(guò)程中溶液不漏灑，且土樣與浸提劑徹底混勻。

3.嚴(yán)格控制浸提溫度和振蕩時(shí)間。

浸提液和浸提環(huán)境的溫度對(duì)Olsen法測(cè)定土壤有效磷影響極大。在10℃～30℃范圍內(nèi)，有效磷測(cè)定值隨溫度升高而增加，且隨著土壤含磷量的高低，其影響程度也不同，因此，嚴(yán)格控制提取溫度對(duì)測(cè)定有效磷含量極其重要。浸提液溫度保持25℃為宜，振蕩時(shí)間控制為30 min（浸提振蕩應(yīng)配備控溫設(shè)備，確保溫度控制為25±1℃）。

4.嚴(yán)格控制振蕩時(shí)間，及時(shí)過(guò)濾。

將盛有2.50g土樣、50ral碳酸氫鈉浸提劑的塑料瓶置于振蕩頻率為(180±20)r／rain的振蕩器中，固定其位置，振蕩(30±1)min后，立即用無(wú)磷濾紙過(guò)濾于干燥的150ml三角瓶中，若發(fā)現(xiàn)濾液混濁，要重新過(guò)濾。土樣浸提液振蕩后應(yīng)立即過(guò)濾，否則少量的磷會(huì)被再次固定，導(dǎo)致測(cè)量結(jié)果較實(shí)際含量偏低。同時(shí)，在浸提過(guò)程中，還要注意，因橡皮膠塞中含有磷，故浸提振蕩時(shí)用塑料瓶較好，否則測(cè)定結(jié)果會(huì)偏高。

（二）鉬銻貯備液的配制

鉬銻鈧配制時(shí)應(yīng)注意以下幾點(diǎn)：配制鉬銻貯備液時(shí)，最好將配制稀硫酸溶液的玻璃器皿底部浸入冷水中，然后將濃硫酸緩緩注入約2倍于濃硫酸量的純水中，同時(shí)不斷地?cái)噭?，同時(shí)配制該試劑時(shí)，應(yīng)根據(jù)樣品的多少現(xiàn)用現(xiàn)配，因?yàn)榇巳芤河行诓婚L(zhǎng)，易氧化、變色。

（三）磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液的配制

準(zhǔn)確稱取經(jīng)105℃烘干2 h后的磷酸二氫鉀（優(yōu)級(jí)純）0.4390 g，用水溶解后加入98%濃硫酸5 ml，再轉(zhuǎn)到1 000 ml的容量瓶中，用水定容后即為100 ug/mL磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液，可在冰箱中長(zhǎng)期保存。（注意：配制磷標(biāo)準(zhǔn)貯備液時(shí)，采用優(yōu)級(jí)純的磷酸二氫鉀，先經(jīng)105℃烘干2h，待冷卻后再準(zhǔn)確稱取配制）。

（四）顯色劑的配制及顯色

1.精確配制顯色。

稱取0.50 g抗壞血酸（左旋，旋光度+21～220）溶于100 mL鉬銻貯備液中，其有效期在室溫下為24h，當(dāng)冰箱溫度為2～8℃時(shí)可貯存7d。

2.準(zhǔn)確顯色。

（1）嚴(yán)格控制顯色液溫度.浸提液中加入抗壞血酸顯色劑后，形成的銻磷鉬雜多酸在常溫（20～25℃）下易被抗壞血酸還原為磷鉬藍(lán)而變色，因此顯色液溫度以20～25℃為宜。溫度偏低，則顯色偏淡，測(cè)量結(jié)果低于實(shí)際值；反之，溫度過(guò)高，顯色偏深，測(cè)量結(jié)果高于實(shí)際值；當(dāng)氣溫過(guò)低時(shí)，可將顯色液放在恒溫培養(yǎng)箱中完成顯色。

（2）嚴(yán)格控制顯色時(shí)間。當(dāng)過(guò)濾浸提液加入抗壞血酸顯色劑，排出CO2定容后，在高于20℃的室溫下放置30 min，可達(dá)到土壤有效磷測(cè)定的顯色要求。當(dāng)氣溫過(guò)低時(shí)，可適當(dāng)延長(zhǎng)顯色時(shí)間。浸提液顯色后，須在8 h內(nèi)測(cè)試完畢。

三、標(biāo)淮曲線的配制

配制標(biāo)準(zhǔn)曲線，要求其相關(guān)系數(shù)r為0.9990。當(dāng)土壤中有效磷含量過(guò)高，超過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線的覆蓋范圍時(shí)，誤差增大，可通過(guò)調(diào)整分取倍數(shù)，使磷含量在標(biāo)準(zhǔn)曲線的含蓋范圍內(nèi)。調(diào)整分配倍數(shù)后，再用國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)土樣測(cè)試，其結(jié)果具有較高的精確度。從本人多年測(cè)定經(jīng)驗(yàn)可知，分取倍數(shù)以50/25最佳。本人采用此分取倍數(shù)測(cè)定省配盲樣土壤有效磷，其結(jié)果達(dá)到省站要求的誤差范圍。

（2015年6月18日所制標(biāo)準(zhǔn)曲線）

四、紫外分光光度計(jì)測(cè)定

（一）仔細(xì)檢查，排除比色皿誤差

當(dāng)土壤中有效磷含量被全部浸提出來(lái)，而且完全顯色后，就用用T6 S型紫外可見(jiàn)分光光度計(jì)進(jìn)行測(cè)定。測(cè)定因不同比色皿之間可能會(huì)存在吸光度差異，即使是吸光度相同的比色皿，使用一段時(shí)間后也會(huì)出現(xiàn)差異。因此八連池中同時(shí)使用的8個(gè)比色皿，在使用前可注入碳酸氫鈉浸提劑，同時(shí)放入1～8號(hào)比色池中，先按2次校零鍵，再按測(cè)量鍵，檢查其吸光度是否一致，若差異較大，應(yīng)及時(shí)調(diào)換。另外，比色皿要勤清洗，每次用完后在蒸餾水中浸泡數(shù)分鐘后再?zèng)_洗干凈。比色皿內(nèi)壁若有比色液藍(lán)色附著時(shí)，可用碳酸氫鈉溶液浸泡后再?zèng)_洗干凈。

（二）排除比色液氣泡

比色液中的CO2排不干凈，易造成吸光值誤差，所以濾液中加入顯色劑后，要充分搖勻，以便使CO2逸出。當(dāng)比色液注入比色皿后，要對(duì)著光亮處進(jìn)行觀察，若有氣泡可用手指輕壓比色皿磨砂面，氣泡逸出后再進(jìn)行測(cè)定。在加注比色液時(shí)，比色液常常會(huì)溢出到比色皿外，應(yīng)及時(shí)用濾紙吸去水分，用擦鏡紙擦拭干凈后再入池測(cè)定。

五、測(cè)定數(shù)據(jù)的處理

（一）正確計(jì)算有效磷含量

按照有效磷，mg kg-1=C*V*D*1000/m*1000計(jì)算土壤有效磷的含量。（C——從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得的顯色液中的磷的濃度；V——顯色液的體積；D——分取倍數(shù)）

（二）細(xì)心設(shè)置對(duì)照，減小偶然誤差

測(cè)定每批樣品時(shí)，要做空白試驗(yàn)、平行試驗(yàn)，并且?guī)б粋€(gè)參比樣(可自制)，以檢測(cè)測(cè)定結(jié)果的準(zhǔn)確性，不準(zhǔn)確的要查找原因，重新測(cè)定。

（三）規(guī)范操作規(guī)程，減小系統(tǒng)和偶然誤差

測(cè)定中所用移液管、塑料瓶、三角瓶、容量瓶、瓶蓋、瓶塞、漏斗都要用自來(lái)水多次沖洗，再用純水沖洗，且需烘干后使用。測(cè)定吸光度的比色皿，可用稀鹽酸浸泡一夜后，再依次用自來(lái)水、純水沖洗干凈，然后浸泡于純水中待用，若長(zhǎng)期不用，應(yīng)放置于干燥盒內(nèi)保存。

[1]全國(guó)測(cè)土配方施肥技術(shù)規(guī)范[S].2011．

[2]程樂(lè)明．碳酸氫鈉浸提-鉬銻抗比色法測(cè)定土壤有效磷的注意事項(xiàng)[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2009，32(05).

(編輯：劉國(guó)華)

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2016-03-29

獨(dú)瑜（1971-），女，甘肅禮縣人，高級(jí)農(nóng)藝師，主要從事農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣工作。