鄧 斌

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401120）

輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法的研究

鄧 斌

（重慶市食品藥品檢驗(yàn)檢測(cè)研究院，重慶 401120）

根據(jù)中國(guó)藥典2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求，建立輔酶Q10注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法，并進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。結(jié)果表明，輔酶Q10注射液原液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素凝集反應(yīng)無(wú)干擾，其細(xì)菌內(nèi)毒素限值符合規(guī)定。用本法檢查輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素是可行的。

輔酶Q10注射液；鱟試劑；細(xì)菌內(nèi)毒素

輔酶Q10是一種良好的生化藥物，具有多種生物學(xué)功能，能輔助治療充血性心力衰竭、冠心病、高血壓、心律失常、繼發(fā)性醛固酮增多癥、頸部外傷后遺癥、腦血管障礙、失血性休克及肝炎等多種疾病[1，2]。鱟試劑法檢查輔酶Q10注射液的細(xì)菌內(nèi)毒素尚未見(jiàn)報(bào)道，筆者依照中國(guó)藥典2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法等[3，4]，對(duì)輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法進(jìn)行研究。

1 實(shí)驗(yàn)材料

鱟試劑（TAL）：批號(hào)20120108，規(guī)格0.1 mL/支，標(biāo)示靈敏度0.25 EU/mL，湛江海洋生物制品廠；批號(hào)1201022，規(guī)格0.1 mL/支，標(biāo)示靈敏度0.25 EU/mL，湛江安慶斯生物有限公司。細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品：批號(hào)20121206，效價(jià)10 EU/支，湛江海洋生物制品廠。細(xì)菌內(nèi)毒素檢查用水（BET水）：批號(hào)20121004，2 mL/支，湛江海洋生物制品廠。輔酶Q10注射液：批號(hào)13080001、13080002和13080006，規(guī)格5 mg/瓶，國(guó)內(nèi)某企業(yè)提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 TAL靈敏度復(fù)核

按照中國(guó)藥典2010年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求，將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品用BET水配成2.0λ、1.0λ、0.5λ和0.25λ 4個(gè)濃度的內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液，進(jìn)行TAL的標(biāo)示靈敏度復(fù)核，結(jié)果見(jiàn)表1。復(fù)核的靈敏度λC均在0.5λ～2λ范圍內(nèi)，符合要求。

表1 TAL靈敏度復(fù)核結(jié)果表

2.2 輔酶Q10注射液細(xì)菌內(nèi)毒素限值的確定

細(xì)菌內(nèi)毒素限值L=K/M，K為按規(guī)定的給藥途徑，人用1 kg體重1 h最大可接受的內(nèi)毒素劑量，注射劑K=5 EU/（kg·h）；M為人用1 kg體重1 h最大劑量（人均體重按60 kg計(jì)算），參考本品臨床用法用量，M為500 mL/60 kg；可計(jì)算出本品L=K/M=5.0/（500/60）=0.6 EU/mL?？紤]到用藥安全性，確定本品細(xì)菌內(nèi)毒素限值L為0.5 EU/mL。

2.3 輔酶Q10注射液最大有效稀釋倍數(shù)

根據(jù)公式MVD=c·L/λ計(jì)算。L為本品的細(xì)菌內(nèi)毒素限值，λ為TAL靈敏度，c為本品濃度。當(dāng)L=0.5 EU/mL，c=1 mL/mL，λ=0.25 EU/mL時(shí)，MVD=1×0.5/0.25=2倍。

2.4 輔酶Q10注射液干擾預(yù)試驗(yàn)

選用20120108批TAL進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)，λ為0.25 EU/mL。取13080001批樣品，用BET水將樣品稀釋1、2倍，獲得1∶1和1∶2樣品稀釋液，以樣品原液和稀釋液為樣品管，用樣品原液和稀釋液將細(xì)菌內(nèi)毒素工作標(biāo)準(zhǔn)品制成2.0λ細(xì)菌內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)溶液作為樣品陽(yáng)性管，同時(shí)以不加細(xì)菌內(nèi)毒素的BET水為陰性對(duì)照管，以2.0λBET水為陽(yáng)性對(duì)照管，進(jìn)行預(yù)干擾試驗(yàn)，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 輔酶Q10注射液干擾預(yù)試驗(yàn)表

表2結(jié)果表明，用0.25 EU/mL TAL進(jìn)行試驗(yàn)，樣品原液、1和2倍稀釋液均無(wú)干擾，即樣品原液對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素與TAL的反應(yīng)無(wú)干擾作用。

2.5 樣品干擾試驗(yàn)

取樣品（批號(hào)13080001），將樣品溶液加到TAL管中，同時(shí)進(jìn)行陰性對(duì)照試驗(yàn)和樣品陰性試驗(yàn)，以確定樣品原液對(duì)干擾試驗(yàn)的影響，結(jié)果見(jiàn)表3。

表3 輔酶Q10注射液干擾試驗(yàn)表

表3結(jié)果表明，2個(gè)批號(hào)TAL的Es分別為0.125 EU/mL和0.250 EU/mL，均在0.5λ～2λ范圍內(nèi)，且Et均為0.125 EU/mL，在0.5Es～2Es范圍內(nèi)，確認(rèn)樣品原液無(wú)干擾。

2.6 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查

按照中國(guó)藥典2005年版二部附錄細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法要求進(jìn)行試驗(yàn)，取13080001、13080002和13080006批樣品，分別用2個(gè)廠家的TAL進(jìn)行細(xì)菌內(nèi)毒素檢查，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 樣品細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果表

表4結(jié)果表明，陽(yáng)性對(duì)照管與樣品陽(yáng)性對(duì)照管均為陽(yáng)性，陰性對(duì)照管與樣品管均為陰性，說(shuō)明3批樣品的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查結(jié)果均符合規(guī)定。

3 討論

試驗(yàn)結(jié)果表明，本品原液對(duì)標(biāo)示靈敏度為0.25 EU/mL的2批不同廠家生產(chǎn)的TAL均無(wú)干擾作用，說(shuō)明所選靈敏度TAL可用于樣品細(xì)菌內(nèi)毒素的檢查。

在干擾試驗(yàn)前進(jìn)行干擾預(yù)試驗(yàn)，其目的在于確定本品對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素檢測(cè)不產(chǎn)生干擾的最小稀釋倍數(shù)，如果本品的最大有效稀釋倍數(shù)下均無(wú)法排除干擾，則應(yīng)考慮使用更高靈敏度的TAL進(jìn)行試驗(yàn)。

[1]楊立軍.輔酶Q10的現(xiàn)代研究進(jìn)展[J].海峽藥學(xué)，2008，20（12）：135-137.

[2]劉 麗.輔酶Q10治療心血管疾病的應(yīng)用[J].中國(guó)實(shí)用醫(yī)藥，2007，2（25）：71.

[3]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典[S].2部.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：附錄85-88.

[4]彭 艷，張 菡.注射用鹽酸甲氯酚酯的細(xì)菌內(nèi)毒素檢查方法.中國(guó)藥業(yè)，2009，18（1）：20-21.

Study on Bacterial Endotoxin Test for Coenzyme Q10Injection

Deng Bin
（Chongqing Institute of Food and Drug Inspection and Testing, Chongqing 401120, China）

Bacterial endotoxin test method of coenzyme Q10injection was established according to the requirement of Bacterial Endotoxin Test in the Appendix of the Chinese Pharmacopoeia 2010, and the method validation was carried out. The results showed that the coenzyme Q10solution had no interference with the bacterial endotoxin agglutination reaction, and the bacterial endotoxin limit was in accordance with the regulation. Using this method to check coenzyme Q10bacterial endotoxin injection is feasible.

Coenzyme Q10injection; Limulus reagent; Bacterial endotoxin

R917

10.16736/j.cnki.cn41-1434/ts.2016.22.036

鄧 斌（1968-），男，重慶人，高級(jí)工程師；專業(yè)方向?yàn)槭称匪幤窓z驗(yàn)。