李　超，王作昭，王玉英，康　泰，項(xiàng)路娟，黃　凱，紀(jì)鴻翔，楊宗統(tǒng)，尹燕博

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 青島 266109；2.吉林大學(xué)軍需科技學(xué)院，吉林 長春 130062；3.青島博隆實(shí)驗(yàn)動物有限公司，山東 青島 266225；4.青島澳蘭百特生物工程有限公司，山東 青島 266101）

臨床病死犬細(xì)菌分離鑒定及耐藥性分析

李超1，王作昭2，王玉英1，康泰1，項(xiàng)路娟3，黃凱3，紀(jì)鴻翔4，楊宗統(tǒng)1，尹燕博1

（1.青島農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 青島 266109；2.吉林大學(xué)軍需科技學(xué)院，吉林 長春 130062；3.青島博隆實(shí)驗(yàn)動物有限公司，山東 青島 266225；4.青島澳蘭百特生物工程有限公司，山東 青島 266101）

為更全面地掌握犬源細(xì)菌的流行及抗生素耐藥情況，本試驗(yàn)對2012-2015年采集自某規(guī)?；B(yǎng)殖場的60余份病死犬樣本進(jìn)行細(xì)菌分離鑒定，并參考CLSI推薦的紙片擴(kuò)散法檢測了部分分離菌對21種抗菌藥物的敏感性。結(jié)果顯示，3年共計(jì)分離鑒定出28株病原菌和條件致病菌，混合感染為犬細(xì)菌感染的主要形式；分離菌普遍呈多重耐藥，以大腸桿菌耐藥性最為嚴(yán)重。犬的細(xì)菌感染應(yīng)在臨床引起足夠的重視，臨床治療應(yīng)合理有效用藥。

犬源細(xì)菌；分離鑒定；耐藥性

寵物攜帶的病原菌呈現(xiàn)耐藥率升高的趨勢，耐藥譜也越來越廣，尤其是一些重要的人獸共患病病原菌，對人類健康造成嚴(yán)重威脅，寵物細(xì)菌耐藥性助推了人獸共患細(xì)菌病的流行[1-2]。鑒于寵物細(xì)菌病是影響人類健康的重要問題，因此，加強(qiáng)寵物性細(xì)菌病的預(yù)防、控制和對策研究，是提高我國人類健康水平的重要措施[3]。為更全面地掌握犬源細(xì)菌的流行及其為犬的細(xì)菌病的控制提供用藥依據(jù)，本研究對2012-2015年3年間臨床病死犬進(jìn)行了病理剖檢、細(xì)菌分離鑒定和藥敏試驗(yàn)，從而為犬細(xì)菌病的預(yù)防和控制奠定基礎(chǔ)。

1　材料與方法

1.1試劑材料藥敏紙片、微量生化鑒定管，購自浙江省杭州天和微生物試劑有限公司；營養(yǎng)瓊脂（NA）、麥康凱培養(yǎng)基（MAC）、伊紅美藍(lán)培養(yǎng)基（EMB）、S.S.瓊脂培養(yǎng)基、胰蛋白胨大豆肉湯（TSB）培養(yǎng)基等，購自青島高科園海博生物技術(shù)有限公司；血瓊脂平板自行配置；其他試劑材料均由青島澳蘭百特生物工程有限公司診斷中心提供。

1.2細(xì)菌的分離與鑒定病料是某規(guī)?；雀袢B(yǎng)殖場送檢的臨床癥狀表現(xiàn)為腹瀉、咳嗽及皮膚病等癥狀的病死犬，按照標(biāo)準(zhǔn)的實(shí)驗(yàn)室微生物鑒定方法（如革蘭染色、生化鑒定等）和分子生物學(xué)方法鑒定分離菌，鑒定好的菌株于-80℃下保存于含25%甘油的無菌生理鹽水中。

1.3抗菌藥物的敏感性試驗(yàn)采用CLSI推薦的紙片擴(kuò)散法對部分分離細(xì)菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，根據(jù)CLSI動物種特異的獸醫(yī)病原菌抑菌圈直徑解釋標(biāo)準(zhǔn)[4]進(jìn)行判定。

2　結(jié)果與分析

2.1細(xì)菌的分離與鑒定本研究從2012-2015年共計(jì)分離鑒定出28株病原菌和條件致病菌，其中包括大腸桿菌11株、假單胞菌2株、葡萄球菌2株，巴氏桿菌2株，鏈球菌、節(jié)桿菌、鞘氨醇單胞菌、溫和氣單胞菌、奇異變形桿菌、枯草芽孢桿菌、變形菌、志賀菌、嗜血紅素嗜血桿菌、產(chǎn)堿普羅威登斯菌、約氏乳酸桿菌各1株。大腸桿菌的分離率最高，為39.3%。

2.2分離菌耐藥性研究結(jié)果由表1可知，2012-2015年臨床病死犬分離菌的耐藥情況，18株測試菌株中除嗜血桿菌、巴氏桿菌、假單胞菌外，其他分離菌株普遍呈多重耐藥性，耐藥菌株存在“耐同類藥物中的多重藥物”的情況。由表2可知，9株測試的大腸桿菌中，除阿米卡星、頭孢西丁、頭孢他啶外，對其他15種所測試抗生素的耐藥率均超過50%，對頭孢克肟的耐藥率高達(dá)100%。

3　討論

統(tǒng)計(jì)細(xì)菌混合感染情況發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌感染的17份樣本中，細(xì)菌多重感染為9份，混合感染率為52.9%。犬的細(xì)菌混合感染時常出現(xiàn)，這可能與呼吸道生理環(huán)境、細(xì)菌的“二次感染”和耐藥菌株的出現(xiàn)有關(guān)[5]?！半p重感染率”為41.2%，分別為溫和氣單胞菌和奇異變形桿菌混合感染，枯草芽孢桿菌與金黃色葡萄球菌混合感染，大腸桿菌與節(jié)桿菌混合感染，大腸桿菌與鞘氨醇單胞菌混合感染，大腸桿菌與產(chǎn)堿普羅威登斯菌混合感染，大腸桿菌與約氏乳酸桿菌混合感染，嗜血紅素嗜血桿菌與巴氏桿菌混合感染；“三重感染率”為11.8%，分別為大腸桿菌、巴氏桿菌、假單胞菌混合感染，大腸桿菌、志賀菌、假單胞菌混合感染，大腸桿菌參與混合感染的頻率最高。

細(xì)菌在犬的化膿創(chuàng)、皮膚病、肺炎等病程中起著關(guān)鍵的作用，化膿創(chuàng)是致病菌經(jīng)皮膚或傷口侵入機(jī)體出現(xiàn)一系列應(yīng)答反應(yīng)的結(jié)果[6]；而繼發(fā)細(xì)菌感染的膿皮病，治療難度更大，如治療不及時可導(dǎo)致敗血癥死亡[7]；本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)犬肺炎的主要致病微生物包括大腸桿菌、假單胞菌、巴氏桿菌和土壤源細(xì)菌，犬肺炎感染的病原菌大多為“雙重感染”或“三重感染”、革蘭陽性菌與革蘭陰性菌混合感染；節(jié)桿菌和鞘氨醇單胞菌是從犬體內(nèi)分離到的2株土壤源細(xì)菌；巴氏桿菌、假單胞菌、志賀菌、奇異變形桿菌等是分離到的人獸共患病細(xì)菌。

抗菌藥物在養(yǎng)殖業(yè)的廣泛應(yīng)用引起了動物源細(xì)菌耐藥性的日益加重與廣泛傳播，動物源細(xì)菌耐藥性的流行加大了疫病的防控難度，給養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失[8]。為防止耐藥性的產(chǎn)生，應(yīng)盡可能選用窄譜抗生素，避免治療初就選用廣譜抗生素，經(jīng)驗(yàn)用藥時，應(yīng)盡量避開耐藥性已很高的品種，從而獲得確切療效。監(jiān)測細(xì)菌耐藥性、指導(dǎo)合理使用抗菌藥物是抗感染治療的重點(diǎn)[9]。犬的細(xì)菌性疾病治療過程中，按規(guī)定劑量、規(guī)定方法和療程用藥，切勿亂用藥，這是避免耐藥菌株繼續(xù)增多的根本方法。

能量缺乏是造成某些細(xì)菌感染的重要因素，在犬只缺乏能量的情況下，抵抗力下降，機(jī)體平衡失調(diào)從而造成細(xì)菌感染。細(xì)菌感染可導(dǎo)致犬營養(yǎng)不良、生長發(fā)育障礙和工作能力喪失，導(dǎo)致幼齡犬死亡率升高。為防止細(xì)菌病的發(fā)生，規(guī)?；B(yǎng)殖場應(yīng)最大限度的避免或防止犬出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，日糧中應(yīng)注意營養(yǎng)搭配均衡，保證日常能量所需，保證良好的飼養(yǎng)管理?xiàng)l件，加強(qiáng)環(huán)境衛(wèi)生管理，做好必要的消毒工作。

[1]Johnson J K，Perencevich E N，Lincalis D P，et al.Dog bite trans?mission of antibiotic-resistant bacteria to a human[J].Infect Con?trol Hosp Epidemiol，2006，27（7）：762-763.

[2]焦新安，黃金林.寵物重要人獸共患細(xì)菌病流行現(xiàn)狀及其控制策略[J].中國比較醫(yī)學(xué)雜志，2010，11、12：015.

[3]李金元，程抱林，王遠(yuǎn)清，等.寵物疫病防控的隱患與對策[J].養(yǎng)殖與飼料，2009，4：102-104.

[4]CLSI.Performance Standards for Antimicrobial Disk and Dilution Susceptibility Tests for Bacteria Isolated From Animals；Ap?proved Standard-Fourth Edition[J].CLSI document VET01-A4. Wayne，PA：Clinical and Laboratory Standards Institute，2013.

[5]張曉遠(yuǎn).犬呼吸道致病菌藥敏試驗(yàn)[J].中國獸醫(yī)雜志，2012，45（8）：60-61.

[6]左之才，鄧俊良，余樹民，等.手術(shù)開放療法治愈犬頑固性耳血腫[J].黑龍江畜牧獸醫(yī)，2006（9）：83-85.

[7]張旭，曾玲.中間型葡萄球菌的鑒定及抗生素敏感性觀察[J].實(shí)用醫(yī)技雜志，2003，10（5）：504-505.

[8]吳聰明，汪洋.動物源細(xì)菌耐藥性監(jiān)測與流行病學(xué)研究[J].中國獸藥雜志，2010，44（1）：23-25.

[9]沈磊磊，虞耀土，張忠杰，等.細(xì)菌分離培養(yǎng)和藥敏試驗(yàn)對獸醫(yī)臨床用藥的指導(dǎo)意義[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2008（2）：30-31.

S852.65+5

B

0529-6005（2016）07-0090-02

2015-03-23

李超（1989-），男，碩士生，從事預(yù)防獸醫(yī)學(xué)研究工作，E-mail：lichao07115614@126.com
王作昭（1979-），男，實(shí)驗(yàn)師，碩士，從事實(shí)驗(yàn)室相關(guān)工作，E-mail：zuozhaowang@163.com
注：王作昭與李超對本文具有同等貢獻(xiàn)

尹燕博，E-mail：yanboyin2011@163.com