格松

（青海省玉樹市隆寶鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站青海玉樹815000）

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羊弓形蟲病血清學(xué)調(diào)查及分析

格松

（青海省玉樹市隆寶鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)工作站青海玉樹815000）

弓形蟲病是由剛地弓形蟲引起的呈世界性分布的一種廣泛寄生于人和動(dòng)物有核細(xì)胞中的寄生性原蟲病［1］。弓形蟲為細(xì)胞內(nèi)原蟲，宿主范圍十分廣泛，是一種能感染多種動(dòng)物的重要人畜共患寄生蟲病，貓科動(dòng)物為其唯一的終末宿主。感染的貓通過糞便排出弓形蟲卵囊，污染飼料、水源和環(huán)境，被認(rèn)為是弓形蟲的重要傳染源。羊的弓形蟲病除了造成懷孕母羊流產(chǎn)外，多數(shù)成年羊?yàn)殡[性感染，主要表現(xiàn)為懷孕母羊流產(chǎn)、死胎、先天畸形等，嚴(yán)重的母羊和羔羊都死于呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)癥狀的癥狀。對(duì)免疫力低下或缺陷的患者危害更嚴(yán)重，給養(yǎng)羊業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失［2］。而且弓形蟲是一種食源性原蟲，嚴(yán)重威脅人類的健康。

間接血凝技術(shù)（IHA）具有特異性強(qiáng)、敏感性高、價(jià)格低廉、操作簡(jiǎn)單的特點(diǎn)，是流行病學(xué)調(diào)查和輔助診斷理想方法，現(xiàn)在國(guó)內(nèi)外已有多種弓形蟲免疫診斷試劑盒［3］。為初步掌握青海省玉樹地區(qū)羊弓形蟲病的感染水平和流行規(guī)律，切實(shí)做好該地區(qū)弓形蟲病的監(jiān)測(cè)工作，本實(shí)驗(yàn)我們應(yīng)用間接血凝試驗(yàn)（IHA），對(duì)該地區(qū)7個(gè)規(guī)?；B(yǎng)殖場(chǎng)部分羊只進(jìn)行了血清學(xué)檢測(cè)，以期對(duì)弓形蟲病在本地區(qū)的流行情況提供參考，對(duì)畜產(chǎn)品健康發(fā)展和人類健康都具有重要意義。

1材料與方法

1.1血清樣品采集與處理

采集青海省玉樹地區(qū)7個(gè)規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)不同品種的羊血清共計(jì)560份，全部采用頸靜脈抽取適量的血液，做好標(biāo)記。將采集的血液擺成斜面，于37℃恒溫培養(yǎng)箱靜置1～2 h，置于4℃冰箱中24 h后分離血清，保存待檢。取待檢血清0.5 mL置于試管中，加入1%正常兔血清1.5 mL，56℃滅活30 min，加入未致敏的綿羊紅細(xì)胞2 mL，4℃過夜。

1.2主要試劑

弓形蟲間接血凝試驗(yàn)診斷液，弓形蟲標(biāo)準(zhǔn)陰性和陽(yáng)性對(duì)照血清及稀釋液等均購(gòu)自于中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3間接血凝試驗(yàn)檢測(cè)方法

1）鋪板在96孔V型凝集反應(yīng)板中加入稀釋液，每孔加入50μL。

2）待檢血清倍比稀釋每4孔一組，分別為一份樣品血清做對(duì)倍梯度稀釋：第一孔加被測(cè)樣品血清50μL，混勻后吸取50μL加入第二孔，混勻后吸取50μL加入第三孔，混勻后吸取50μL加入第四孔，混勻后吸取50μL棄去。另外每塊板凝集反應(yīng)板上設(shè)陰性血清、陽(yáng)性血清、空白稀釋液（不加血清）各一組。

3）加入抗原，每孔加衣原體屬抗原致敏綿羊紅細(xì)胞25μL，將凝集反應(yīng)板放在微量振蕩器振蕩 1 min，檢查各反應(yīng)孔紅細(xì)胞混勻與否，不出現(xiàn)紅細(xì)胞沉淀視為合格。將96孔V型反應(yīng)板放于無(wú)菌濕盒中靜置在37℃恒溫箱2 h后，進(jìn)行結(jié)果判定。

1.4結(jié)果判定

標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性血清各稀釋度應(yīng)完全凝集，標(biāo)準(zhǔn)陰性血清、稀釋液空白對(duì)照不出現(xiàn)凝集現(xiàn)象，實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立。實(shí)驗(yàn)結(jié)果成立的條件下，稀釋度≥1∶64且凝集在（++）及以上的樣品判為陽(yáng)性；稀釋度≤1∶16（++）凝集的樣品判為陰性；介于二者之間判為可疑，可疑的樣品重新檢驗(yàn)，仍然可疑的判為陰性。

紅細(xì)胞全部凝集，在孔形成一層均勻的膜，布滿整個(gè)孔底者為“++++”；紅細(xì)胞多數(shù)凝集，在孔底形成一層薄膜，面積稍小者為“+++”；紅細(xì)胞部分凝集，在孔底形成薄層，邊緣松散或呈鋸齒狀者為“++”；紅細(xì)胞少量凝集，在孔底有小圓點(diǎn)者為“+”；紅細(xì)胞沉于孔底，但周圍不光滑或中心有空斑者為“±”；紅細(xì)胞完全沉于孔底，呈光滑的圓點(diǎn)者為“-”?！?+”以上的凝集判為陽(yáng)性凝集。

2結(jié)果與分析

弓形蟲間接血凝檢測(cè)顯示：從7個(gè)規(guī)?；驁?chǎng)采集的560份羊血清，陽(yáng)性數(shù)為92份，感染率為16.43%，且7個(gè)規(guī)?；B(yǎng)羊場(chǎng)都有感染，但不同羊場(chǎng)衣原體病感染率有所差異，最高的羊場(chǎng)陽(yáng)性率可達(dá)28.75%，最低的感染率為8.75%，該結(jié)果表明青海省玉樹地區(qū)羊群中普遍存在弓形蟲病。

3討論

弓形蟲病是一種重要的人獸共患寄生蟲病，世界各地普遍存在，幾乎所有的溫血?jiǎng)游锒寄芨腥?，作為弓形蟲的儲(chǔ)存宿主，以貓的重要性最大。弓形蟲是細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲，常表現(xiàn)為隱性感染，沒有明顯的臨床特征，許多養(yǎng)殖單位不夠重視。并且弓形蟲作為一種重要的食源性原蟲，不僅對(duì)養(yǎng)羊業(yè)造成巨大的的經(jīng)濟(jì)損失，而且對(duì)人的身體健康也存在嚴(yán)重的危害。因此，應(yīng)該高度重視弓形蟲病對(duì)養(yǎng)羊業(yè)的嚴(yán)重危害，做好預(yù)防和藥物治療工作，盡可能降低其給食品公共衛(wèi)生安全造成隱患。

我國(guó)羊弓形蟲的感染比較嚴(yán)重，據(jù)國(guó)內(nèi)流行病學(xué)調(diào)查報(bào)道多數(shù)高于20%。本實(shí)驗(yàn)通過對(duì)青海省玉樹地區(qū)560份羊血清進(jìn)行弓形蟲血清抗體的檢測(cè)，平均感染率為16.43%，最高陽(yáng)性率可達(dá)28.75%，可見該地區(qū)羊群中普遍存在弓形蟲病的感。但由于整個(gè)地區(qū)羊群基數(shù)較大，本試驗(yàn)抽檢樣品數(shù)有限，且多數(shù)屬于規(guī)?；驁?chǎng)，結(jié)果具有一定的局限性，還需要進(jìn)一步進(jìn)行弓形蟲病流行病學(xué)調(diào)查。（編輯：趙曉松）

參考文獻(xiàn)：

［1］陸承平.獸醫(yī)微生物學(xué)［M］.北京：中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社，2001.378-382.

［2］李曉卉，陸艷，馬少麗.青海改良種綿羊弓形體病的血清學(xué)調(diào)查［J］.青海畜牧獸醫(yī)雜志，2004，34（1）：22.

［3］羅才慶，袁勻，黃劍梅，等.龍巖市部分地區(qū)牛、羊弓形蟲病的血清學(xué)調(diào)查［J］.中國(guó)動(dòng)物保健，2013，15（7）：13-16.

doi：10.3969/j.issn.1008-4754.2016.6.029

作者簡(jiǎn)介：格松（1968-），男，藏族，青海玉樹人，中專，獸醫(yī)師，研究方向：畜牧獸醫(yī)。